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《浙江大学》 2007年
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无菌间优势微生物的分离鉴定及其对一般消毒剂的抗性研究

刘晓华  
【摘要】: 对于药品和食品生产行业而言,无菌操作室是非常重要的基础设施之一。监控无菌室内微生物分布和室内优势菌株的分离鉴定是标准生产习惯的一部分。常用的监控方案主要是媒介的使用,例如SCD琼脂法在30℃温度下培养4天。依照欧洲联合会的标准生产要求,可允许的表面接触平板的CPU数量级别从A到B分别是1-5级。而美国药典USP(U.S.Pharmacopeia)中规定的级别分别是100-1000从3到5级。为达到这个要求,无菌室所有的可接触表面包括地板、空气等以及在操作人员的手部皮肤都要经过多种消毒剂进行常规消毒。在许多药品类相关生产制造行业,紫外线照射、苯酚溶液擦洗(苯酚又称来苏儿,Lysol)以及Chlorhexidine gluconate(CHG)溶液浸泡,即本实验中的Maskin消毒液,是三种比较常见的用于无菌室空气、器械和人手皮肤的消毒方法。 对于科研和医药食品生产而言,要保持无菌操作车间的真实洁净无异于一场战斗,对保证产品质量极为重要。要决定用哪种消毒方法最合适,或者哪几种方法的结合更合适于某个无菌生产操作室,我们就有必要掌握这些优势菌株的最初污染源和污染菌株。因此必须先弄清楚该无菌室的微生物分布以及这些微生物所具有的各自的特点,以及对各种消毒剂的抗性极限等。 本研究的目的就是分离和鉴定分布于某药品类无菌生产车间的微生物菌株及其抗性特性的测定。在鉴定可能存在于无菌车间的微生物污染源的研究中,对分离的菌株进行菌落和细胞形态学比较,并且做常规生理生化测定,同时对这些分离得到的优势菌株进行16 S rDNA基因扩增和部分保守序列鉴定。 生理生化试验表明有3株分离菌株在很多方面都有相似性,16S rDNA序列分析表示3株菌具有高于99%的相似性,部分16S rDNA Blast分析更加确定了这3株菌都属于葡萄球菌属,结合生理生化测定结果可以初步得出结论:其中2株分别最相似于S.saprophyticus和S.cohnii的解脲亚种,余下1株应该最有可能是S.warneri或者S.pasteuri。用同样的方法,5株中的另外两株被鉴定出分别为厚壁菌门的Bacillus fusiformis和放线菌中的Microbacterium oleivoran。 分离菌株的特有抗性测定过程中,一共测试了对3种消毒剂的抗性作用(UV、苯酚、和CHG)。以金黄色葡萄球菌作对照,在实验结果的基础上分析分离菌株对三种消毒剂的敏感度大小,即抗性能力,从而判定分离菌株是否属于抗性基因获得型突变株。结果表明:虽然分离菌株的抗消毒剂能力较强而得以存活于无菌室中,但是经过试验,与对照菌株金黄色葡萄球菌Sa进行的抗消毒剂能力的作用时间和浓度的双因素差异分析,并无显著差异,这也就表明分离菌株只是普通的现存野生株,而不是因为含有某种质粒或者遗传获得产生的突变株。
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:Q93

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【参考文献】
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