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《浙江大学》 2008年
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里氏木霉Trichoderma reesei自噬相关基因TrATG5的克隆与功能分析

鲁书玲  
【摘要】: 里氏木霉Trichoderma reesei属于半知菌亚门Deuteromycotina、丝孢目Hyphomycetales,有性态为红褐肉座菌Hypocrea jecorina。目前研究主要在酶基因克隆、重组蛋白过量表达机制、菌株遗传改造等方面。但是,关于其细胞自噬基因的研究目前还未见报道。 细胞自噬是真核生物在进化上和功能上广泛存在的保守过程,是细胞内长寿命蛋白或细胞器降解与再利用的过程。本文主要目的是通过基因敲除的方法来研究和阐明自噬基因在里氏木霉中的主要功能。获得的主要研究结果如下: 1.比对稻瘟菌Magnaporthe oryzae MgATG5氨基酸序列,在里氏木霉基因组文库中检索得到同源基因(相似度为59%),定名为TrATG5。然后,利用分子生物学手段,构建了TrATG5基因置换载体。 2.本研究成功探索了利用根癌农杆菌介导的遗传转化(Agrobacteriumtumefaciens-mediated transformation,ATMT)手段在木霉菌里进行基因敲除的方法。置换载体经ATMT转化后,利用同源双交换的方法将TrATG5基因靶定敲除,确认得到了TrATG5缺失突变体ΔTrATG5。 3.ΔTrATG5突变体在PDA培养基上的菌落形态发生变化,菌落颜色黄色,菌丝光秃稀疏,产孢量显著下降;在SNA培养基上生长速率有所下降。 4.将ΔTrATG5突变体和立枯丝核菌Rhizoctonia solani对峙培养,显微镜下观察后,发现重寄生依然发生;里氏木霉野生型菌株QM9414基本上不能利用蔗糖,而ΔTrATG5可以利用蔗糖正常生长。还原糖测定结果显示,ΔTrATG5具备了蔗糖利用能力。
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:S476;Q78

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