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《浙江大学》 2007年
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精浆中白介素23的含量测定及与精液质量的关系

张晗  
【摘要】: 细胞因子与人类生殖的关系正得到广泛的研究,因为它们涉及到生殖生理和生育调节的各个方面。人的精浆中含有转化生长因子(transforming growthfactor,TGF)、表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素(interleukine,IL)、干扰素γ(interferon-γ,IFN-γ)以及一些可溶性受体,它们来自于男性生殖道的不同部位,可能对生殖系统的甾体激素合成、精子细胞的发育、及精子功能产生影响。人精浆中存在炎症性细胞因子,主要来自于白细胞中的巨噬细胞,在外来抗原、病原体和慢性炎症的情况下激活产生。这些细胞因子主要包括IL-1、IL-6、IL-8、IL-12、TNF-α、IFN-γ等。在体外实验中,一些细胞因子,如IL-1、IL-6、TNF-α、IFN-γ等,可影响人精子活动力,增加精子细胞活性氧的产生,降低精子的穿卵能力;IL-1、TNF-α可以抑制睾丸酮(T)的产生;TNF-α可以显著抑制精子的顶体酶活性和顶体反应。IL-23是2000年新发现的炎症性细胞因子,自身独特的p19亚基与IL-12的p40亚基通过二硫键形成异源二聚体细胞因子(p40p19),它主要来源于活化单核巨噬细胞和树突细胞,通过作用于记忆性T细胞和炎症性巨噬细胞的IL-23受体而发挥功能。IL-23具有多种生物学功能,能促进T细胞尤其是CD4~+T细胞增殖,促进T细胞、抗原提呈细胞产生IFN-γ与IL-12,对树突细胞的共刺激功能起调节作用,具有抗肿瘤和抗转移活性,而且与自身免疫和炎症反应疾病密切相关。在转基因小鼠实验中,广泛表达p19的转基因小鼠有严重的生长和生育方面的缺陷。至今,国内外未发现有关IL-23与人精液质量关系的文献报道。本课题在对研究对象进行精液常规参数、精子形态检查的基础上,检测了人精浆中IL-23、IL-6、IL-8、TNF-α的含量,同时检测了其血清T、FSH、LH值,并对IL-23与精浆中IL-6、IL-8、TNF-α含量的关系及其与精液常规参数、精子形态、血生殖激素之间的关系进行了分析。现将结果报道如下。 1材料与方法 1.1标本来源 1.1.1 2007年5~6月共收集57份人类精液标本,其中45份来自浙江省人类精子库的供精志愿者,共45例,年龄20~25周岁,平均(21.8±1.1)周岁,全部为在校学生,未婚;其余12份来自浙江省计划生育专科门诊部就诊的男性不育症病人,未经抗生素治疗,共12例,年龄26~38周岁,平均(30.1±3.6)周岁。 1.1.2分组:根据WHO正常人前向运动精子(a级+b级)百分率和精子密度参考值将57份人类精液标本分成两组,其中精子密度≥20×10~6/ml且a+b≥50%作为精液质量正常组(35份);密度<20×10~6/ml或a+b<50%、或密度<20×10~6/ml且a+b<50%为异常组(22份)。 本研究中不包括无精子症和白细胞精子症病人,所有研究对象外生殖器检查均无异常;双侧睾丸均≥12ml;尿常规检查白细胞阴性。 1.2方法 1.2.1精液标本收集:所有受试者均禁欲3-5天,以手淫法采集精液于无菌烧杯内,置37℃水浴箱内液化后备查。 1.2.2精液常规分析:待精液完全液化后,按《WHO人类精液及精子-宫颈粘液相互作用实验室检验手册》(第四版)进行精液分析,内容包括精液量、PH值、液化时间、外观、精子密度、精子活力、活动率等指标。 1.2.3精子形态染色及分析:待精液液化后,将精液滴于洁净玻片上,推成薄片,自然干燥后,改良巴氏染色,树胶封固。精子形态分析按《WHO人类精液及精子-宫颈粘液相互作用实验室检验手册》(第四版)进行。油镜下观察,计数至少200个精子以上,按标准对精子形态进行分类,并分别记录其结果。包括正常精子百分率、头部异常百分率、颈部及中段异常百分率、尾部异常百分率、胞浆小滴百分率。 1.2.4精浆中IL-23、IL-6、IL-8及TNF-α水平测定:取部分完全液化后的精液以3 000 rpm/分钟离心20分钟,分离精浆保存于-20℃待行各种细胞因子的检测。采用上海博光生物科技有限公司进口分装试剂盒,应用ELISA夹心法测定精浆中IL-23、IL-6、IL-8及TNF-α含量。 1.2.5血清T、FSH、LH测定:所用仪器为德国拜耳(Bayer)公司ACS:180 SE全自动化学发光免疫分析系统(Automated chemiluminescence,system),其灵敏度可达10~(-12)g/L;所用试剂均为随机配套试剂。 1.2.6统计学分析:所有数据以mean±SD表示,组与组均值之间比较采用独立样本t检验,相关分析采用线性回归法。采用SPSS 11.5统计软件包进行分析。 2.结果 2.1从精液分析的结果显示,精液质量正常组的精子密度、前向运动百分率、活动率、存活率及精子形态正常率均显著高于异常组(P<0.01)。PH值无显著差异 2.2所有标本的精浆中均可检测到IL-23,含量为8.19±4.60pg/ml,范围1.44-19.35pg/ml。 2.3精液质量正常组的精浆IL-23含量为6.37±3.58pg/ml。精液质量异常组的精浆IL-23含量为11.08±4.63 pg/ml,显著高于精液质量正常组的IL-23含量(P<0.01)。进一步分析显示,精浆IL-23含量在前向运动精子(a+b)<50%的研究对象中明显高于前向运动精子≥50%的研究对象(P<0.001),相关系数r=-0.429(P<0.01),IL-23的含量与前向运动精子百分率呈负相关;精浆中IL-23的含量与精子正常形态率的相关系数r=-0.266(P<0.05),精浆中IL-23的含量与精子正常形态率存在负相关。 2.4精浆中IL-23含量与IL-6、IL-8和TNF-α的关系经相关性分析后,精浆中IL-23含量与精浆中IL-6、IL-8和TNF-α含量的相关系数分别为0.820(P<0.001)、0.586(P<0.001)和0.516(P<0.001),均存在显著的正相关。 2.5精浆中IL-23含量与血清FSH、LH、T含量的关系精浆中IL-23的含量分别与血清FSH、LH、T水平经相关性分析后,其结果显示均不存在相关性。 3.结论 人类精浆中存在IL-23,精液质量正常的研究对象精浆中含量为6.37±3.58pg/ml;精液质量异常的研究对象精浆中IL-23含量明显升高(11.08±4.63pg/ml,P<0.01);精浆中IL-23含量与前向运动精子百分率、精子的正常形态率存在显著负相关,与精浆中IL-6、IL-8、TNF-α水平存在显著的正相关,但与血清生殖激素FSH、LH、T的水平不存在相关性。
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:R698.2

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