收藏本站
《浙江大学》 2008年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

二烯丙基三硫化物对人膀胱癌T24细胞体外作用及其机制的研究

王云彬  
【摘要】: 第一部分二烯丙基三硫化物(DATS)对人膀胱癌T24细胞增殖的影响 目的研究大蒜提取物二烯丙基三硫化物(DATS)于体外对人膀胱癌细胞系T24细胞增殖和细胞周期的影响及其可能机制。 方法采用MTT法观察不同浓度的DATS(10,20,40,和80μmol/L)作用不同时间(24,48和72h)后对T24细胞增殖的影响。同时应用集落形成试验观察不同浓度的DATS(0,0.5,1,5,10,20和40μmol/L)对T24细胞集落形成的影响。T24细胞经不同浓度DATS(10,20,40,和80μmol/L)作用24小时后,采用流式细胞仪进行细胞周期分析。并应用Western blotting方法检测细胞周期相关蛋白Cdc25C的表达,以观察DATS对其的影响。 结果 1.DATS对T24细胞的增殖有明显的抑制作用,MTT法显示随着药物浓度升高(2.5~100μmol/L)和作用时间的延长(24-72h)其抑制作用逐渐增强,作用24h后,5-100μmol/L的抑制率范围为13%~81%,而作用48h及72h后抑制率范围则分别升至25%~87%及31%~96%。呈明显剂量和时间依赖性。 2.DATS抑制T24细胞集落形成,随着浓度增高集落形成率逐步下降,浓度为20μmol/L时集落形成抑制率已达100%。 3.经流式细胞仪检测,不同浓度DATS(10-40μmol/L)作用T24细胞24h后,G2/M期细胞逐渐增多,表明DATS可引起G2/M期停滞,表现为剂量依赖性。 4.不同浓度DATS(10-80μmol/L)作用T24细胞24h后,Cdc25C蛋白表达随药物浓度增加逐渐降低。 结论DATS能显著抑制T24细胞增殖和集落形成,其抑制作用呈时间和剂量依赖性。DATS能显著抑制T24细胞中Cdc25C蛋白的表达,这可能是诱导T24细胞G2/M期停滞的分子机制之一。 第二部分二烯丙基三硫化物(DATS)对人膀胱癌T24细胞凋亡的影响 目的研究DATS在体外对人膀胱癌细胞系T24细胞凋亡的诱导作用,并探讨其诱导凋亡的相关信号通路等分子机制。 方法研究DATS抗膀胱癌增殖作用是否为诱导细胞凋亡所致。用光学显微镜及荧光染色形态学观察经DATS作用后T24细胞产生的凋亡形态学改变。并应用流式细胞仪(Annexin V/PI双染法)检测细胞凋亡率的变化。采用Western blotting方法检测不同浓度DATS(10,20,40,和80μmol/L)作用24小时后T24细胞中caspase-3、PARP等蛋白在诱导凋亡中的表达,同时进一步研究了诱导细胞凋亡的分子机理,包括细胞中抗凋亡的PI3K/Akt通路及Bcl-2家族蛋白的表达。 结果 1.DATS作用于T24细胞后明显诱导细胞凋亡并呈显著剂量依赖性。 2.光学显微镜显示不同浓度DATS(10,20,40,和80μmol/L)作用于T24细胞24小时后使其细胞密度呈剂量依赖性降低。同时观察到凋亡细胞所具有的典型形态学改变。 3.流式细胞仪(Annexin V/PI双染法)检测不同浓度的DATS(10~80μmol/L)对T24细胞作用24h后细胞凋亡呈剂量依赖性增加。细胞发生坏死比例为0.2%~1.3%,而发生凋亡的比例为6.2%~20.0%,较之对照组0.3%明显为高,且呈剂量依赖性。其中早期凋亡细胞比例为4.8%-12.2%,晚期凋亡细胞比例为1.4%~7.8%,均较之对照组为高。 4.DATS作用于T24细胞后easpase-3和PARP均被激活,表现为proeaspase-3的减少和裂解的PARP片段(89KD)出现,并呈显著的剂量依赖性。 5.DATS作用于T24细胞后p-PDK1,p-Thr308-Akt,和p-Ser473-Akt的表达逐渐降低,呈剂量依赖性,但t-Akt的表达不受影响。 6.DATS作用于T24细胞后Bax和BAD表达逐渐增高,Bcl-2和Bcl-xL的表达逐渐降低,呈显著的剂量依赖性。而且Bax/Bcl-2的比例逐渐增高,呈显著的剂量依赖性。 结论DATS能诱导T24细胞凋亡,凋亡的诱导作用呈显著剂量依赖性。DATS诱导产生凋亡的机理可能通过抑制T24细胞PI3K/Akt信号通路的激活从而调节Bcl-2家族等蛋白并最终诱导凋亡发生。 第三部分二烯丙基三硫化物(DATS)对人膀胱癌T24细胞侵袭转移的影响 目的研究DATS于体外对人膀胱癌细胞系T24细胞侵袭转移能力的影响及其可能机制。 方法应用MTT法检测DATS对T24细胞粘附纤维连接蛋白(fibronectin)能力的影响,应用Transwell小室进行人工重组基底膜侵袭实验检测DATS对T24细胞侵袭能力的影响,并应用划痕愈合试验检测DATS对T24细胞迁移能力的影响。采用RT-PCR方法检测不同浓度DATS(10,20,40,和80μmol/L)作用24小时后的T24细胞中MMP-9 mRNA和MMP-2 mRNA的表达。采用Western blotting方法检测不同浓度DATS(10,20,40,和80μmol/L)作用24小时后的T24细胞中MMP-9蛋白的表达。 结果 1.粘附试验表明DATS(10~80μmol/L)作用24小时后,能有效抑制T24细胞与细胞外基质的粘附,且随药物浓度增高,抑制作用增强。 2.划痕试验显示DATS作用不同时间(0,12和24小时)对T24细胞迁移力的影响随浓度增加和时间的延长而增强,呈剂量和时间依赖性。 3.侵袭试验表明DATS(10~80μmol/L)作用于T24细胞24h后,随着药物浓度的升高,T24细胞的侵袭力逐渐降低,呈剂量依赖性。 4.DATS可减少T24细胞中MMP-9 mRNA和蛋白的表达,随药物浓度增高而表达减少,呈剂量依赖性。 结论DATS能显著抑制T24细胞的粘附、迁移和侵袭能力。DATS的侵袭转移抑制能力可能与降低MMP-9的表达有关。
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:R737.14

手机知网App
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 马行一;杨岷;吴蔚桦;曾燕;马云霞;胡耀;米绪华;;青蒿琥酯对脂多糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞凋亡及Bcl-2基因表达的影响[J];中国中西医结合肾病杂志;2008年07期
2 罗执芬;周云;刘明月;;替尼泊甙对胃癌细胞BGC-823体外增殖的影响[J];郑州大学学报(医学版);2007年03期
3 刘洁;庄乾元;张维怡;;葡萄籽提取物原花青素对人膀胱癌BIU87细胞周期的影响及其机制研究[J];第三军医大学学报;2009年17期
4 熊斌,雷志勇,陈虹,刘斌,白淑芳;土槿乙酸衍生物PBA-D1诱导Hela细胞凋亡及其机制[J];中国药理学通报;2005年07期
5 王林美;叶博;赵振军;李树英;;独角莲抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖和诱导凋亡的作用研究[J];沈阳农业大学学报;2009年02期
6 程倚萌;娄季宇;王金兰;杨霄鹏;;大鼠局灶性脑缺血再灌注后海马Bcl-2、Bax蛋白的表达[J];中国实用神经疾病杂志;2007年03期
7 陈建丽;曹婷婷;;ATRA诱导肺癌细胞株A549分化与凋亡[J];河南医学研究;2006年04期
8 陈保疆;张玉环;王萍;;雷公藤甲素对变应性接触性皮炎小鼠淋巴细胞周期及凋亡的影响[J];中国中西医结合皮肤性病学杂志;2007年03期
9 吴岚;尹宏;刘开祥;俸军林;蒋静子;;原花青素对脑缺血再灌注损伤大鼠Bcl-2表达和神经元凋亡的影响[J];现代中西医结合杂志;2009年21期
10 郁云龙;刘云鹏;王锴;朱志图;刑永达;哈敏文;;蟾蜍灵诱导人肺腺癌细胞凋亡作用及其机制[J];肿瘤防治研究;2010年09期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 杨进益;姜兴金;叶林;刘建光;宗海鹰;魏伟;王勐;;尿激酶及其受体对膀胱癌细胞系侵袭转移影响的体外研究[A];第十五届全国泌尿外科学术会议论文集[C];2008年
2 吴志明;谢立平;郑祥毅;秦杰;白宇;毛祺琦;;氟伐他汀(Fluvastatin)对人膀胱癌T24,5637细胞增殖以及迁移能力的影响[A];第十五届全国泌尿外科学术会议论文集[C];2008年
3 孔德波;郑祥毅;杨凯;毛祺琦;李玉兵;郁建迪;谢立平;;小RNA靶向激活膀胱癌T24细胞p14ARF基因的机制研究[A];2009年浙江省男科、泌尿外科学术年会论文汇编[C];2009年
4 张永春;谷江;孙发;石家齐;;传统医学在膀胱癌治疗中的意义[A];2010年贵州省泌尿外科学术会议论文集[C];2010年
5 苏旭;薛丽香;金光辉;刘建香;付士波;;电离辐射对不同肿瘤细胞细胞周期、细胞凋亡和细胞坏死的影响[A];中华医学会放射医学与防护学分会第二次中青年专题研讨会论文汇编[C];1999年
6 韩锋;李庆文;;Ki-67在膀胱移行细胞癌的表达及其意义[A];第十五届全国泌尿外科学术会议论文集[C];2008年
7 王强;张凤蕴;郭涛;逯晓辉;刘晨;王丽群;;Bcl-2与胃癌细胞凋亡的关系[A];庆祝黑龙江省免疫学会成立十周年(1993—2003)论文集[C];2003年
8 申兵冰;张杰;何俊;安寒;全大勇;黄颂敏;付平;;槲皮素对系膜细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响[A];中华医学会肾脏病学分会2006年学术年会论文集[C];2006年
9 杨德林;宋波;王剑松;张超;徐鸿毅;;高侵袭力人膀胱癌细胞亚系的分离鉴定[A];第十五届全国泌尿外科学术会议论文集[C];2008年
10 徐戎;张悦;王倩;曾繁典;;岩藻黄质(Fucoxanthin)抗肺癌作用及其机制研究[A];中国药理学会第十次全国学术会议专刊[C];2009年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 哈尔滨医科大学附属第二医院泌尿外科教授 史沛清;膀胱癌全切尿路重建术式优劣评说[N];健康报;2011年
2 西安交大医学院第一附属医院泌尿外科 教授 贺大林;血尿可能是膀胱癌的早期症状[N];家庭医生报;2009年
3 刘少华;夏季多饮水 预防膀胱癌[N];大众卫生报;2000年
4 记者 秦勉;破解膀胱癌的致病原因[N];北京科技报;2011年
5 湘雅医院肿瘤科刘少华教授;多饮水可防膀胱癌[N];大众卫生报;2002年
6 陈志峰 卢志勇;新技术检测膀胱癌[N];经济参考报;2003年
7 北京同仁医院泌尿外科 刘跃新 乔庐东;查膀胱癌有了“软镜子”[N];健康时报;2009年
8 钟伟;膀胱癌是如何播种的[N];健康报;2004年
9 张献怀;回肠移接为膀胱癌患者解忧[N];健康报;2009年
10 林非;早期发现膀胱癌的新途径[N];中国医药报;2003年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王云彬;二烯丙基三硫化物对人膀胱癌T24细胞体外作用及其机制的研究[D];浙江大学;2008年
2 秦杰;表没食子儿茶素没食子酸酯对人膀胱癌T24细胞体外作用及其机制的实验研究[D];浙江大学;2007年
3 白宇;白藜芦醇对人膀胱癌T24细胞的抑制作用及其机制研究[D];浙江大学;2008年
4 秦军;抑制COX-2表达对逆转膀胱癌恶性生物学行为的影响[D];第四军医大学;2005年
5 张坚;环氧化酶2在膀胱癌发生发展以及治疗中的作用[D];复旦大学;2003年
6 赵立杰;小白菊内酯对胃癌细胞增殖抑制和诱导凋亡作用的研究[D];中国医科大学;2008年
7 郭云宝;三氧化二砷抗人脑SHG-44胶质瘤细胞作用的体内外实验研究[D];吉林大学;2008年
8 蔡大伟;叶酸代谢酶基因MTHFR、MTR多态性与膀胱癌遗传易感性及与RASSF1A基因启动子区甲基化关系的研究[D];中国医科大学;2010年
9 杨庆;利用基因表达谱芯片技术研究人膀胱癌相关基因[D];第二军医大学;2001年
10 刘晓强;内皮抑素重组腺病毒载体的构建及其对膀胱癌生长抑制作用的研究[D];天津医科大学;2003年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 孙芳;杨梅黄酮对人膀胱癌T24细胞的体外作用及体内实验研究[D];浙江大学;2010年
2 尹瀚堃;去甲泽拉木醛对T24膀胱癌细胞株效应的实验研究[D];复旦大学;2009年
3 陈治国;曲美他嗪对大鼠脑缺血再灌注神经细胞凋亡的影响[D];苏州大学;2006年
4 刘镇;uPA合成抑制剂Amilorde对人膀胱癌细胞系T24侵袭转移能力的作用研究[D];苏州大学;2008年
5 王春莲;三氧化二砷对大鼠C6脑胶质瘤细胞抗癌作用的实验研究[D];吉林大学;2006年
6 张睿;口腔粘膜下纤维化及其癌变组织中细胞凋亡及Bcl-2、Bax的表达研究[D];中南大学;2008年
7 杨晓阳;青蒿琥脂对骨髓细胞株RPMI8226增殖、凋亡、侵袭影响的研究[D];河北医科大学;2009年
8 梁波罗;IL-6对前列腺增生上皮细胞凋亡的影响[D];中南大学;2009年
9 闻宁;P27~(Kip1)及CyclinD1在膀胱癌中的表达及其相关性研究[D];中国医科大学;2003年
10 夏飞;结核分枝杆菌诱导宿主巨噬细胞凋亡机制的研究[D];武汉大学;2005年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026