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《浙江大学》 2008年
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佐米曲坦诱导鼠肝CYP3A2作用机理和米格列奈体外代谢的研究

陆思洁  
【摘要】: 第一部分 前期实验发现佐米曲坦对大鼠肝中CYP3A酶活性具有性别差异诱导作用,能选择性的诱导雄性大鼠肝中CYP3A,而对雌性大鼠肝CYP3A没有明显得诱导作用。这个结论是基于体外肝微粒孵育实验和体内咪达唑仑药代动力学的实验结果。大鼠肝脏中CYP3A亚型包括:CYP3A1、CYP3A2、CYP3A9和CYP3A18。其中CYP3A1和CYP3A2对药物代谢起重要作用。为进一步确证佐米曲坦对大鼠肝中CYP3A酶的性别差异诱导作用,我们用荧光定量PCR和Western blot的方法检测了经佐米曲坦诱导后雌雄大鼠肝中CYP3A1和CYP3A2的mRNA和蛋白水平的变化。结果发现佐米曲坦性别差异诱导CYP3A酶的原因是其性别选择性地诱导了CYP3A2而对CYP3A1的mRNA及蛋白水平无明显影响。 通常认为PXR核受体是介导CYP3A基因调控的关键因子,但是其作用模式是否存在性别差异未见文献报道。查阅文献后我们发现CYP3A2在成年大鼠中的表达呈现性别差异,以雄性占主导。生长激素(GH)是许多性别差异性表达的CYP450包括CYP3A2的关键调控子。同时据报道佐米曲坦可以影响人体血浆中的生长激素水平。由此,我们推测生长激素介导了佐米曲坦诱导雄性大鼠肝中的CYP3A2。为了证实这一推测,我们首先用放射免疫(RIA)方法检测经佐米曲坦诱导后雌雄大鼠体内生长激素的变化。然后用2个GH缺陷的模型即脑垂体损伤大鼠和原代大鼠肝细胞重复佐米曲坦的诱导实验。并从CYP3A酶活性,mRNA和蛋白水平三个水平阐述实验结果。实验结果发现,佐米曲坦可以抑制正常大鼠体内血浆生长激素水平。与正常组的诱导结果不同的是,佐米曲坦不能诱导,相反的是抑制了损伤组雄性大鼠肝中的CYP3A2。另外佐米曲坦对于雌雄原代肝细胞中的CYP3A1/2无明显诱导作用。因此,我们初步认为生长激素介导了佐米曲坦诱导雄性大鼠肝中的CYP3A2。 为进一步探究佐米曲坦性别选择性诱导CYP3A2的细胞内的分子机制。我们初步考察了与CYP3A调控相关的1个核受体(PXR)和2个转录因子(Stat5b、HNF4α)经佐米曲坦诱导后三个模型中的肝mRNA和蛋白及其入核蛋白水平的变化。结果发现佐米曲坦性别选择性地影响了正常组大鼠肝HNF4α的入核蛋白水平。但是,我们没有在原代肝细胞和损伤组大鼠中观察到这种性别选择性的作用,说明佐米曲坦对HNF4α的诱导可能受生长激素所影响。佐米曲坦性别选择性地诱导了正常组大鼠原代肝细胞及损伤组大鼠肝PXR的mRNA但对PXR蛋白及入核蛋白水平无影响。 本部分实验结果显示佐米曲坦性别选择性诱导正常组雄性大鼠CYP3A酶活性的原因是因为它可以性别选择性地诱导雄性大鼠CYP3A2。生长激素、HNF4α可能参与了这个性别选择性诱导过程。 第二部分 米格列奈是一个治疗Ⅱ型糖尿病的新型钾离子通道的拮抗剂。我们首先确证了米格列奈的代谢产物的结构。确证的方法有:HPLC色谱图法、β-D-葡醛酸水解酶水解后HPLC图谱比较法和LC-MS/MS法。实验结果证明米格列奈微粒体孵育生成的代谢物米格列奈的酰基单分子葡萄糖醛酸结合物。然后我们采用各种亚型UGTs重组酶孵育实验、特征性底物相关性研究和抑制性研究来鉴定参与米格列奈葡萄糖醛酸化反应的代谢酶的种类。研究发现,在UGT1A1、UGT1A3、UGT1A6、UGT1A9和UGT287中,只有UGT1A3和UGT287对米格列奈具葡醛化的代谢活性。相关性分析研究和代谢抑制实验结果进一步证实了其正确性。其中相关性研究结果中,米格列奈在15个人肝微粒体中葡醛酸化活性和槲皮素的葡醛酸化活性的相关系数为0.806,和双氯芬酸的葡醛酸化活性的相关系数为0.704。抑制实验结果显示米格列奈的葡醛酸代谢活性能被槲皮素和双氯芬酸显著性抑制,半数抑制浓度(IC50)分别为28.9±3.76μmol·L~(-1)和9.9±1.8μmol·L~(-1)。上述实验结果表明米格列奈在人肝微粒体中的二相代谢产物为酰基单分子葡醛酸结合物,UGT1A3和UGT287是米格列奈的两种重要二相代谢酶。
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:R96

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 赵娜萍;余露山;曾苏;;HPLC法测定大鼠血浆中咪达唑仑的含量及其在药物相互作用研究中的应用[J];药物分析杂志;2007年06期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 刘昌辉;黄小桃;郑侠;李能;李颖仪;宓穗卿;王宁生;;大鼠体内咪达唑仑及其代谢物1'-羟基咪达唑仑的药动学研究[J];广东药学院学报;2012年01期
2 邢峰;余露山;曾苏;;孕烷X受体介导佐米曲坦对大鼠肝细胞色素P450 CYP 3A的诱导作用[J];浙江大学学报(医学版);2009年03期
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 李海山;马兜铃酸的肾毒性及DNA损伤机制研究[D];大连医科大学;2003年
2 邢峰;佐米曲坦对大鼠肝CYP3A1/2诱导机制的研究[D];浙江大学;2010年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 沈永年,郭华,王传丰,钱大龙,陈瑞冠;生物工程合成生长激素对生长激素缺乏性侏儒症血浆脂肪酸的急性作用[J];中华内分泌代谢杂志;1990年02期
2 糜祖煌;;新生儿感染性肺炎血清生长激素的测定探讨[J];中国新生儿科杂志;1992年01期
3 林清霞;生长激素垂体腺瘤手术治疗的效果[J];国外医学.耳鼻咽喉科学分册;1995年02期
4 马小平,高广忠,夏治平,张正玉,高丽群;针刺对弱智儿童血清皮质醇与生长激素的影响[J];上海针灸杂志;1998年03期
5 洪楚原,黄仲初;生长激素在肛肠外科急症中的应用[J];中国现代医学杂志;1999年04期
6 李亚洁!510515广州市,翟惠敏,黄健美!510515广州市;脑出血动物血液及胃液生长激素的动态变化[J];中华护理杂志;2000年07期
7 周向东,罗椒衍;冠心病引起的慢性心力衰竭患者应用生长激素的疗效评价[J];国外医学.内科学分册;2000年08期
8 杨美琳,杨俊文;儿童糖尿病患者垂体及甲状腺功能的探讨[J];河南医学研究;2000年03期
9 张志民,陈万欣;生长激素与心脏[J];承德医学院学报;2001年03期
10 楼浩明,曹同瓦,杨涵铭;重症颅脑损伤病人应用生长激素对氮代谢的影响[J];中华急诊医学杂志;2002年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 谢晓洪;安家石;许永华;;早期高蛋白代谢支持加生长激素对重度颅脑创伤患者的影响[A];2009年全国危重病急救医学学术会议论文汇编[C];2009年
2 张元海;刘利平;杨顺江;喻三宝;;重度烧伤应用生长激素致高钙血症二例[A];中华医学会第六届全国烧伤外科学术会议论文汇编[C];2001年
3 潘思年;李燕虹;马华梅;陈红珊;朱顺叶;杜敏联;;生长激素对促性腺激素释放激素拟似物处理后的青春期大鼠生长板软骨细胞增殖和表型的影响[A];中华医学会第十五次全国儿科学术大会论文汇编(上册)[C];2010年
4 朱晗;曾凡星;;生长激素对运动大鼠骨骼肌形态和代谢机能的影响[A];第七届全国体育科学大会论文摘要汇编(二)[C];2004年
5 王向昱;;生长激素联合生长抑素治疗重症急性胰腺炎60例分析[A];2004年浙江省外科学学术年会论文汇编[C];2004年
6 高敏;姒健敏;曹倩;;生长激素及其受体在萎缩性胃炎中的表达及临床意义探讨[A];中华医学会消化病学分会——2005年全国胃肠激素学术研讨会论文集[C];2005年
7 刘晓娟;王吉贵;孙绍光;杨淑艳;洪燕;王思贤;苏小明;尚丹;刘芃芃;刘维全;;水貂生长激素全基因的克隆及真核表达载体的构建[A];全国动物生理生化第九次学术交流会论文摘要汇编[C];2006年
8 刘应科;张知新;苏慧敏;张琼;赵秋玲;;长效生长激素对去垂体幼鼠生长及糖代谢的影响[A];中华医学会第十五次全国儿科学术大会论文汇编(上册)[C];2010年
9 李玉清;;生长激素运动实验与生长激素刺激实验[A];第五次全国中青年检验医学学术会议论文汇编[C];2006年
10 王成鑫;周红艳;舒细纪;李艳;;子宫内膜异位症潜在生物学恶性特点及发病机制探讨[A];第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议论文集[C];2006年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 罗志;滥用生长激素危险[N];医药经济报;2001年
2 许永杰;“一专多能”的生长激素[N];中国医药报;2001年
3 王小衡;孩子长得慢查查生长激素[N];大众卫生报;2009年
4 张之简;注射生长激素,会让人患“疯牛病”?[N];新华每日电讯;2008年
5 程书权;生长激素对人体的不良影响[N];中国医药报;2000年
6 王骆义;春天来了,孩子快快长[N];大众卫生报;2003年
7 郝继亭;生长激素的临床新应用[N];中国医药报;2004年
8 朱惠娟;运动让孩子长高点儿[N];健康报;2006年
9 杨述华;骨科专家谈增高[N];家庭医生报;2006年
10 本报记者 郑莉;走进袖珍世界[N];工人日报;2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 周鑫淼;兴奋剂生长激素检测方法的研究[D];北京体育大学;2012年
2 顾卫东;生长激素在老年心血管手术围术期的应用[D];第二军医大学;2006年
3 殷保兵;急性坏死性胰腺炎脑损伤的发病机制以及生长抑素和生长激素治疗的保护作用[D];复旦大学;2004年
4 刘卫;手术前开始应用生长激素对肠外营养病人蛋白质代谢、肌肉功能、肠粘膜屏障和细胞免疫功能的影响[D];中国协和医科大学;1999年
5 蒿汉坤;外源性生长激素和生长抑素对结肠癌营养代谢、免疫功能及其生长影响的实验研究[D];复旦大学;2006年
6 刘建平;缺血性脑卒中易感基因与环境因素交互作用的分子流行病学研究[D];华中科技大学;2008年
7 李彦红;重组人生长激素和骨髓间充质干细胞移植联合治疗阿霉素性心肌病心力衰竭的实验研究及其机制探讨[D];山西医科大学;2008年
8 杨晓静;猪骨骼肌生长及肌纤维类型分布的分子机理研究[D];南京农业大学;2004年
9 朱文进;中国大、中型驴种遗传多样性分析及其生长激素基因序列的测定[D];山西农业大学;2005年
10 兰云贤;GHRP-2对猪GH分泌的作用规律及促生长效果研究[D];四川农业大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 陆思洁;佐米曲坦诱导鼠肝CYP3A2作用机理和米格列奈体外代谢的研究[D];浙江大学;2008年
2 陈晓东;原发性高血压患者血浆生长激素、胰岛素样生长因子-1、血管紧张素Ⅱ、一氧化氮的变化研究[D];重庆医科大学;2003年
3 王磊;生长激素对脓毒症大鼠保护作用的机制[D];天津医科大学;2004年
4 李爽;生长激素对阿霉素肾病大鼠肾损伤的促进作用及其机制探讨[D];苏州大学;2002年
5 于晓静;锌、生长激素和胰岛素样生长因子—Ⅰ与儿童银屑病的研究[D];青岛大学;2004年
6 田野;生长激素对梗阻性黄疸大鼠血浆内皮素-1、一氧化氮及肾功能损害的影响[D];中国医科大学;2002年
7 朱晗;生长激素对运动大鼠骨骼肌形态和代谢机能的影响[D];北京体育大学;2004年
8 郭豫涛;老龄充血性心力衰竭生长激素轴关系的研究[D];重庆医科大学;2002年
9 华向东;急性坏死性胰腺炎肠粘膜屏障功能障碍及生长激素的保护作用[D];中国医科大学;2004年
10 郑琳琳;饮食诱导雄性肥胖大鼠GH/IGF-Ⅰ轴变化的探讨[D];中国医科大学;2004年
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