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《浙江大学》 2009年
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促红细胞生成素抑制氧化损伤诱导RPE凋亡及其机制

汪朝阳  
【摘要】: 第一章促红细胞生成素抑制氧化损伤诱导RPE凋亡 目的:氧化损伤诱导视网膜色素上皮(RPE)细胞功能下降和凋亡被认为是老年性黄斑变性(AMD)的主要发病机制。最近研究表明,促红细胞生成素(EPO)是一种具有调节红细胞生成、抗氧化、抗细胞凋亡、抗炎、神经营养作用等多种生物学效应的细胞因子。本研究目的为确定EPO是否可以抑制氧化损伤导致的RPE凋亡及其分子机制。 方法:培养的人RPE细胞以各种浓度EPO(0.01-100 IU/ml)预孵育2h后用0.4mM H_2O_2或不同浓度的葡萄糖氧化酶(GO)处理24h。用MTT方法检测细胞活力;用Real-time PCR检测氧化损伤诱导的炎症细胞因子表达;若丹明异硫氰酸盐-葡聚糖(RD-70)染料检测RPE细胞屏障完整性;分别用荧光染料H2DCF和DHE检测细胞内活性氧(ROS)水平。细胞凋亡分别用Hoechst 33258染料、Annexin V/PI、TUNEL技术检测。Caspase-3活性、AKT(Ser473)磷酸化用western技术检测。荧光染料JC-1检测细胞线粒体膜电位变化;并同时加入P13K激酶抑制剂LY294002和Caspase-3抑制剂Z-DEVD-FMK孵育RPE细胞后检测上述改变以研究EPO作用的信号通路机制。 结果:EPO(1 IU/ml)预孵育2h可以增加细胞活力(从50%to 80%,P0.001),降低炎症细胞因子TNF-a和IL-1β的释放,恢复RPE细胞屏障完整性;显著降低H_2O_2诱导的细胞ROS水平45%(P=0.04),恢复细胞内抗氧化酶如总抗氧化能力、谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶和降低脂质过氧化反应产物丙二醛;并且降低氧化损伤诱导RPE细胞凋亡(从43±6%到12±3%,P=0.002),恢复线粒体膜电位,抑制Caspase-3的活化,并促进AKT磷酸化。LY294002可以部分阻断EPO对ROS、细胞活力、Caspase-3的保护作用,和Caspase-3抑制剂DEVD合用并未表现出协调作用。 结论:我们的研究结果显示,EPO可以保护氧化损伤诱导的RPE细胞死亡和线粒体功能下降,其机制可能包括直接降低细胞内ROS水平,调节AKT1活性,线粒体膜电位和Caspase酶活性。 目的:检测孔源性视网膜脱离(RRD)和增生性玻璃体视网膜病变(PVR)患者玻璃体EPO水平。 方法:前瞻性,对比对照研究。酶联免疫吸附法(ELISA)试剂盒检测64名患者玻璃体EPO含量,其中RRD患者40名,PVR患者13名,作为对照的特发性黄斑裂孔(IMH)患者11名。 结果:RRD组患者平均玻璃体内EPO水平54.6±7.3 mU/ml,PVR组患者平均玻璃体内EPO水平104.1±20.8 mU/ml,均显著高于IMH组(14.4±3.6mU/ml;P.001,P=.003)。PVR组EPO平均水平高于RRD组,但两者没有统计学差异(P=.112)。 结论:RRD和PVR患者玻璃体内EPO水平明显升高。 目的:检测各型青光眼患者房水内EPO水平,并分析其相关影响因素。 方法:前瞻性,对比对照研究。ELISA法检测75例患者房水EPO水平,其中青光眼患者55例(原发性急性闭角型青光眼14例,原发性慢性闭角型青光眼26例,原发性开角型青光眼11例,新生血管性青光眼4例),作为对照的年龄相关性白内障患者20例。 结果:青光眼患者房水内EPO浓度(71.0±12.0 mU/mL)显著高于白内障患者(6.4±0.8 mU/mL,P0.001)。原发性慢性闭角型青光眼组EPO水平(28.84±3.9mU/mL)和原发性开角型青光眼(20.2±2.0 mU/mL)没有显著差异(P=0.421)。但原发性急性闭角型青光眼组房水EPO水平(118.5±14mU/mL)高于前两组慢性青光眼(P0.001)。4名新生血管性青光眼患者房水内EPO水平异常升高(319.5±47.7mU/mL)。年龄、性别、眼别、体重指数等和房水EPO水平均未表现明显相关性(P0.05).原发性急性闭角型青光眼组和对照组血清和房水EPO水平均没有明显相关性(P=0.285,0.500)。 结论:我们的前瞻性研究结果提示青光眼患者房水内EPO水平明显升高。
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:R774.1

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