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《浙江大学》 2010年
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几种抗肿瘤活性成分的分离纯化及其致肝癌HepG2细胞凋亡的分子机制研究

罗可望  
【摘要】: 中草药以其悠久的历史和显著的疗效引起了国内外的广泛重视,成为新药开发的一大源泉。本论文在初级筛选的基础上,选择了两种具有较强体外细胞毒性的中草药,白芷和黄白粘盖牛肝菌,进行深入研究,为其抗肿瘤药物的开发和临床应用奠定了基础。 论文首先以细胞活性为指导来进行分离,从白芷中获得了具有较强细胞毒性的呋喃型香豆素,欧前胡素(Imperatorin)。然后我们选用9株人肿瘤细胞用MTT法检测欧前胡素对其的增殖抑制效果,发现对人肝癌细胞株HepG2有较好抑制作用;且其在动物模型中也显示出良好的抗肿瘤效果,荷瘤HepG2裸鼠经欧前胡素50mg/kg、100mg/kg灌胃14天后,抑瘤率分别达31.93%和63.18%,且对动物组织没有表现明显的肝脏和心脏毒性,小鼠体重也没有明显变化。对欧前胡素的抗肿瘤机制进一步研究发现,欧前胡素通过诱导HepG2细胞凋亡而有效抑制肝癌细胞HepG2的增殖,且其作用方式是浓度和时间依赖的,主要表现有:磷脂酰丝氨酸外翻,细胞形态学变化,DNA断裂,线粒体膜电位崩溃,释放细胞色素c,以及caspase-3,8,9的活化,同时,用western blot法检测到死亡受体Fas、受体FADD、蛋白p21和p53、促凋亡蛋白tBid、Bax、Bad含量增加,Bcl-2含量减少。表明欧前胡素诱导HepG2细胞凋亡是通过死亡受体途径和线粒体途径共同作用。 其次,论文考虑了黄白粘盖牛肝菌的细胞毒性原理。活性物质粘盖牛肝菌素(Suillin)对人肿瘤细胞有显著的增殖抑制作用,对肝癌细胞的细胞毒性尤为明显,经Suillin作用48小时后,对肝癌细胞的平均IC50为2μM。Suillin对肝癌细胞的增殖抑制作用主要通过诱导细胞凋亡实现的,主要表现有DNA裂解、磷脂酰丝氨酸外翻,caspase-3,8,9的活化及线粒体膜电位崩溃和释放细胞色素c。此外,Suillin诱导的HepG2细胞凋亡可被Caspase-8和Caspase-9抑制剂部分逆转,说明Caspase-8和Caspase-9在诱导细胞凋亡过程中发挥重要作用;经western blot检测到死亡受体Fas、受体FADD和促凋亡蛋白Bad和tBid的含量明显增加,Bid含量显著下降细。结果说明,Suillin诱导HepG2细胞凋亡是通过胞内和胞外途径的共同作用,是一种潜在的抗肿瘤新药。 这些研究表明,欧前胡素(Imperatorin)和粘盖牛肝菌素(Suillin)具有较强的体内外抗肿瘤作用,能够通过诱导凋亡途径而杀伤肿瘤细胞,是治疗肝癌的潜在新药物。
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R735.7;R285

【引证文献】
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