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三叶青总黄酮的提取和纯化工艺研究

傅婷婷  
【摘要】: 三叶青是一种民间常用的中草药,具有清热解毒、祛风化痰、活血止痛的功能。据药理实验研究表明三叶青黄酮具有抗肿瘤、保肝等药理作用。但目前对三叶青黄酮提取和纯化工艺方面的研究报道还很少。为更好的开发利用该资源,本文主要围绕三叶青总黄酮的提取和纯化工艺进行研究。 用紫外/可见分光光度法建立了三叶青总黄酮的含量分析方法。三叶青黄酮在NaNO_2-Al(NO_3)_3比色法显色后,用紫外分光光度计在波长500nm处测定显色吸光度。采用传统的紫外分光光度法在该实验过程中显色后产生红色絮状沉淀,严重干扰了吸光度的测定。采用离心法改进后,排除了杂质的干扰,且简单可行。选择芦丁为标样,绘制标准曲线后得到芦丁含量C(μg/mL)与吸光度A的回归方程:A=0.01018C+0.00809,线性良好(R=0.99965)。实际样品的平均加样回收率为98.95%-100.51%。 用乙醇作为提取溶剂研究了三叶青总黄酮的提取工艺。通过单因素实验考察及正交实验优化得到三叶青总黄酮的较佳提取工艺为:提取溶剂60%(v/v)的乙醇溶液,液固比6:1,水浴沸腾提取两次,每次1.5h。在此适宜条件下,三叶青总黄酮得率约为26mg/g左右。 用大孔吸附树脂法研究了三叶青总黄酮的纯化工艺。选择了10种极性不同,孔径、比表面积等性能参数各异的国产大孔吸附树脂,比较其对三叶青黄酮的吸附量和解吸率等指标,筛选较优的树脂并对其进行静态和动态吸附解吸性能的研究。结果表明HPD826吸附树脂对三叶青黄酮有较好的吸附和解吸性能。优化后得到较佳的动态吸附和解吸工艺:上样浓度范围在3.2-5.0mg/mL内,上样流速2BV/h为佳;上样后先用水洗脱2BV,在用70%(v/v)的乙醇溶液以2BV/h的流速洗脱,可在3BV左右基本解吸三叶青黄酮,解吸后的三叶青纯化物纯度可达38.40%,较粗提物提高3倍。


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