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《浙江大学》 2010年
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油茶蒲多糖的制备、组分分析及抗肿瘤活性初步研究

康海权  
【摘要】: 中国是世界上最大的茶油生产基地。油茶主要分布在我国的西南及湘、赣南部的山地丘陵,它是我国特有的油料树种,另外,油茶在东南亚、日本等国也有极少量分布。油茶果是油茶树的果子,它由油茶蒲和油茶籽构成,质量比分别为60%和40%左右。经油茶籽提炼出来的山茶油,由于油酸和亚油酸含量合计在80%以上,具有很强的保健功能。油茶蒲可用来提栲胶、糠醛以及木糖醇等,还可用用制取活性炭和碳酸钾等。我国虽然油茶资源丰富,但对油茶蒲的开发利用却非常薄弱。目前,国内外学者对植物活性多糖的研究报道很多,却未涉及有关油茶蒲多糖。本文重点对油茶蒲多糖的提取、纯化及其抗肿瘤活性进行研究,主要研究内容和结果如下。 (1)多糖的提取工艺优化研究 以油茶蒲为原料、多糖得率为响应值,在单因素试验的基础上,通过正交试验优化工艺参数。研究了提取时间、提取温度、料液比和醇沉乙醇浓度四个因素对多糖得率的影响。实验结果表明,提取温度的影响达显著水平,提取时间、料液比和乙醇浓度则无显著影响。经优化后的油茶蒲多糖提取工艺参数为:温度90℃、时间1.0 h、料液比1:15、醇沉乙醇终浓度80%。在此条件下油茶蒲粗多糖得率为5.93%。 (2)多糖的分离、纯化研究 采用Sevag法经7次去蛋白操作后,CPPS中多糖含量损失率达到49.8%,但蛋白质的去除率仅为16.8%,去蛋白效果不明显。采用静态吸附实验模型,以多糖损失率、蛋白去除率及多酚去除率为考察指标,确定了DA-201为最佳的除杂大孔树脂类型。静态吸附实验结果表明:DA-201对CPPS溶液中蛋白质的去除率达到55.0%,对多酚的去除率高达76.2%。DA-201大孔树脂能有效去除CPPS中的蛋白质及多酚,且去蛋白效果优于Sevag法。CPPS经大孔树脂除杂后,得到两个主要多糖组分:CPPS1和CPPS2。其中,CPPS1得率为48.2%,与CPPS相比,多糖含量提高了29.4%,蛋白质含量下降了36.6%,总酚含量下降了52.3%。进一步采用DEAE-52纤维素柱层析纯化CPPS1和CPPS2,分别得到主要多糖组分CPPS1-1、CPPS1-2和CPPS2-1、CPPS2-2。 (3)多糖的组分分析研究 采用高效液相色谱法测定油茶蒲多糖的分子量分布,气相色谱法分析糖基组成。结果表明,油茶蒲多糖分子量分布范围为在2.9×10~3~2.8×10~5之间,经纯化后,CPPS中小分子量和大分子量多糖片段得到了一定分离。糖基分析结果显示,CPPS至少由鼠李糖(Rha)、岩藻糖(Fuc)、阿拉伯糖(Ara)、甘露糖(Man)、葡萄糖(Glu)以及半乳糖(Gal)等6种单糖组成,其质量分数依次为:6.65%、19.07%、2.67%、7.05%、48.76%以及15.78%。CPPS1-1的单糖组成和CPPS的单糖组成种类相同,但组成比例不同,CPPS1-1的单糖组成质量分数依次为:4.66%、8.84%、4.37%、8.86%、57.19%、16.06%。葡糖糖是油茶蒲多糖的主要结构单元。 (4)多糖的抗氧化活性研究 应用DPPH法、TEAC法、FRAP法和Fenton反应分别评价油茶蒲不同提取物的抗氧化活性。结果显示,CPPS物表现出一定的抗氧化活性,并具有浓度依赖关系。不同提取物的抗氧化能力强弱依次为:抗坏血酸>水提物>醇沉上清>CPPS。 (5)多糖的抗肿瘤活性初步研究 依次采用体外四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)和小鼠体内S_(180)肉瘤模型,考察CPPS的抑瘤活性。结果表明,其对宫颈癌细胞Hela、肺癌细胞H460、肝癌细胞HepG2的增殖均有较明显的抑制作用,且呈良好的浓度依赖关系。当试样浓度在500μg/mL时,对HepG2的生长抑制率达到74.54%,对H460的生长抑制率达到51.38%,对Hela的生长抑制率达到63.42%。同时,CPPS对小鼠S_(180)肉瘤的生长也具有显著的抑制作用,当灌胃剂量为450 mg/kg时,对S_(180)小鼠的肿瘤生长抑制率达到38.38%。 研究结果表明,油茶浦多糖是一种极具研究价值和开发潜力的抗肿瘤活性多糖。
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R151;TQ461

【引证文献】
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