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《浙江大学》 2010年
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全人源胃癌噬菌体单链抗体库的构建及其初步筛选

杨乃娣  
【摘要】: 研究目的:构建全人源胃癌噬菌体单链抗体库,并从中筛选出与人胃癌细胞特异结合的单链抗体,并对其进行鉴定分析。 研究方法和研究结果:首先分离胃癌病人外周血淋巴细胞,提取总RNA,RT-PCR合成cDNA第一链,采用兼并引物PCR扩增抗体重链(V_H)和轻链可变区(V_L)基因。经重叠PCR(SOE-PCR),将V_H和V_L连接成单链抗体(scFv)基因,并连接到噬菌粒载体pCANTAB-5E中,转化至E.coli TG1,经辅助噬菌体超感染,构建了全人源胃癌噬菌体单链抗体库,库容为2.6×10~6,质粒片段插入率95%。单链抗体库经与正常人胃黏膜上皮细胞GES-1孵育后,去除与正常细胞结合的噬菌体单链抗体,再以人胃癌细胞MGC-803为靶标对抗体库进行4轮富集筛选,结果显示富集了50倍。选取第四轮筛选后的菌落制备单克隆抗体,并进行ELISA特异性鉴定,获得五株与人胃癌细胞MGC-803有较强特异性结合的噬菌体抗体。送5株抗体进行测序,选取阳性值最高的单克隆对其序列进行分析并预测其空间结构。结果表明:可变区基因与人胚系基因有很高的同源性(大于90%)。 结论:成功构建了库容为2.6×10~6的全人源胃癌噬菌体单链抗体库,抗体库多样性良好。获得的噬菌体单克隆抗体具有较强的特异性,为胃癌的诊断和治疗提供了新载体。
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R392

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【参考文献】
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