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《浙江大学》 2010年
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胃腺癌中神经内分泌细胞克隆性起源及临床病理意义的研究

王玲玲  
【摘要】: 胃癌是严重危害人类健康的常见恶性肿瘤之一。普通型胃腺癌伴神经内分泌分化,是指胃腺癌中出现分化的神经内分泌(NE)细胞,但其数目在癌组织成分中所占比例较小,不足50%,并且这些分化的NE细胞多以单个或者细胞巢的形式分散存在。我们以往的研究结果显示,大肠腺癌、胃腺癌、前列腺癌、乳腺癌及胰腺癌中NE细胞的发现率分别为41.5%,39.6%,38.1%,21%和17.9%,并发现在大肠癌、前列腺癌、乳腺癌及胰腺癌中,高分化腺癌NE细胞的发现率明显高于低分化腺癌,而胃癌则相反,低分化腺癌中NE细胞的发生现率明显高于高分化腺癌。这些差异性是否与肿瘤所在部位的胚胎起源、肿瘤病因学、组织发生学的不同及遗传学改变有关,仍处于探索研究阶段。因此,通过分子生物学的方法认识NE细胞的性质,有助于更深入的认识胃癌发生、发展的机理,并为临床诊断和治疗提供依据。 目前国内外对非神经内分泌肿瘤中NE细胞的研究较少,特别是用分子遗传学方法研究普通型胃腺癌中单个NE细胞的起源方面尚未见报道。关于胃腺癌中NE分化的发生机制存在许多不同的假说,多数学者认为NE细胞和上皮细胞均来源于内胚层多潜能干细胞。在肿瘤发生及演进过程中,内胚层的多潜能干细胞受激素、局部微环境及基因组不稳定性的影响,使某些被抑制的基因组密码发生随机脱抑制,在RNA水平选择性激活两种以上调节机制,最终导致基因产生双向或多向分化。然而,这些推测仅建立在形态学观察的基础之上,缺乏可靠性。这些散在的NE细胞是否存在基因水平的改变,它们是肿瘤的实质成分,还是仅仅作为肿瘤的间质成分存在,尚无明确定论。激光捕获显微切割技术(Laser capturemicrodissection,LCM)可以使研究者可以获得形态完整的单一细胞或细胞群进行遗传学研究,解决了目的细胞的捕获难题。由于该技术在切除和提取细胞过程中不产生热量,对目的细胞没有任何损伤,即避免了邻近细胞的污染,又不会损伤DNA、RNA。目前国际上很多研究,其样本的获取都是利用了LCM技术。DNAMicro-kit试剂盒可以对微量组织或LCM捕获的细胞进行DNA抽提,联合应用Repli-g扩增试剂盒进行全基因组扩增,可以获得足量DNA用于后续的实验研究。 野生型p53(wt-p53)作为抑癌基因,在正常组织中参与了细胞周期调控、细胞凋亡等过程,发生突变或缺失时,将丧失上述功能,使细胞增殖失控,凋亡受阻,从而引发肿瘤。错配修复功能的完整是细胞DNA准确复制和基因组稳定的基本保证。该功能缺失与多种恶性肿瘤的发生发展密切相关。MLH1基因是错配修复基因家族的重要成员之一,具有修复DNA碱基错配,增强DNA复制忠实性,维持基因组稳定性降低自发性突变的功能。E-cadherin(上皮型钙粘蛋白)是一种介导同种细胞相互黏附的钙依赖性跨膜糖蛋白,对细胞极性的建立,维持上皮细胞正常形态至关重要。抑癌基因PTEN在正常组织中参与了DNA损伤修复、细胞周期调控、细胞凋亡、细胞间相互作用及抑制血管生成等过程。当PTEN发生突变或缺失时,将丧失上述功能,不但减少对细胞凋亡的调控,还可以促进细胞进入增殖周期,导致细胞的无限增殖。干细胞在分化过程中,染色体有丝分裂不均衡,可造成部分基因在两种分化的细胞中同时出现等位基因的改变(如增益、丢失、突变等),通过对微卫星改变(包括微卫星不稳定和杂合性丢失)及突变、CGH等的检测可推测组织细胞的克隆性来源。我们在全基因组范围内选取多个微卫星位点,联合p53突变检测,对普通型胃腺癌NE细胞进行分子水平上的研究,以期明确NE细胞的克隆性起源。我们制备了组织芯片,联合应用免疫组化方法检测CGA、p53、MLH1、E-cadherin、PTEN等5个指标在胃癌中的表达情况,结合随访资料,综合分析上述指标的表达与伴有NE分化胃癌的临床病理参数及预后的关系,为胃癌的诊断及预后评估提供理论指导。 材料和方法 本实验收集浙江省人民医院2001-2003年间胃腺癌及正常胃粘膜新鲜标本120例。首先用冰冻切片-嗜铬粒蛋白A(Chromogranin A,CgA)免疫组化方法对上述标本进行初筛,确定含NE细胞较多的组织,经红外线激光捕获显微切割获取500个左右单个NE细胞,应用DNA Micro-kit抽提试剂盒及Repli-g全基因组扩增试剂盒进行DNA抽提和全基因组放大,全基因组范围内选取26个微卫星位点,结合PCR-SSCP-银染色检测NE细胞和腺癌细胞微卫星改变情况,联合PCR-测序检测基因p53突变发生情况,推测胃腺癌中NE细胞的克隆性起源。收集浙江大学医学院附属第一医院和绍兴市人民医院手术切除胃癌标本共220例,另取31例同期非肿瘤胃黏膜组织作为对照。制备组织芯片,联合应用免疫组化检测CGA、p53、MLH1、E-cadherin、PTEN等5个指标在胃癌中的表达情况,结合随访资料,综合分析上述指标的表达与伴有NE分化胃癌的临床病理参数及预后的关系。 结果 1、免疫组化-激光捕获显微切割:120例胃腺癌新鲜组织中,含有中-大量NE细胞的占25.0%(30/120),在20倍物镜下捕获腺癌中单个NE细胞500个左右。 2、微卫星分析结果:30例样本中MSI总发生率为27.4%,LOH总发生率为17.9%,各样本MSI发生率高于LOH。从不同细胞微卫星改变发生率比较,NE细胞与腺癌细胞发生率无明显差异。各样本MSI及LOH发生率与胃癌的临床病理参数之间无明显相关性。从两种细胞LOH及MSI一致性来看,例2、3、5、6、11、12、18、24、27、30在NE细胞和腺癌细胞中发生了完全一致的微卫星改变,其余样本除例7和10外,其他18例微卫星改变的差异无统计学意义。 3、p53突变结果:30例样本中NE细胞和腺癌细胞p53突变主要集中在外显子7和8,从p53突变的一致性上看,样本4、14、21、27的NE细胞和腺癌细胞均发生了外显子7、8的一致性突变,例7的两种细胞突变不一致,例17仅腺癌细胞发生了突变。腺癌细胞p53突变有6例(20.0%),NE细胞p53突变有5例(16.7%)。临床病理资料显示多为浸润性低分化腺癌,TNM分期为Ⅲ-Ⅳ期。统计学分析显示p53突变与胃腺癌分化程度、TNM分期、血管浸润和淋巴结转移相关(P<0.05)。 4、结合微卫星改变及基因突变结果,30例伴NE分化的普通型胃腺癌中,27例NE细胞与腺癌细胞起源于同一干细胞,NE细胞作为肿瘤成分,本身具恶性且分泌激素促进肿瘤生长。其余3例微卫星改变及基因突变不一致,可能是激素或微环境作用的结果,有待于进一步研究。 5、胃癌中CGA蛋白表达率为47.7%,其表达与胃癌分化程度相关,低、未分化组的阳性率较高。在p53阳性组中NE分化占46.5%,且NE分化与胃癌浸润深度呈正相关,与患者的生存时间呈负相关,CGA阳性表达患者的预后较差。 6、p53蛋白在胃癌中的表达率为45.0%,明显高于正常对照组,其表达与胃癌TNM分期、浸润深度呈正相关。在NE分化胃癌中,p53蛋白表达与浸润深度和远处转移呈正相关。生存分析显示,阳性表达患者预后差。 7、在胃癌中E-cadherin蛋白阳性率为为15.5%,低于正常胃粘膜表达率,其阳性表达与TNM分期及脉管侵犯呈负相关,阳性表达患者的生存率显著高于阴性者。 8、MLH1蛋白在胃癌中的阳性表达率为15.9%,较正常对照组低。MLH1蛋白在NE细胞阳性组胃癌中的表达与TNM分期呈负相关,生存分析显示,阳性表达患者有较好的预后。 9、PTEN蛋白在胃癌中的阳性率为27.3%,阳性表达与胃癌各临床病理参数及预后之间均无相关性。 结论 1、在分子水平证实胃腺癌中NE细胞与腺癌细胞起源存在一致性。 2、NE分化与p53蛋白表达能促进胃癌的浸润和转移,提示预后不良。 3、MLH1、E-cadherin有抑制胃癌进展的作用,可为预后评估提供理论指导。
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R735.2

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【引证文献】
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1 刘博;;PTEN和E-cadherin蛋白在胃癌临床中的应用研究[J];内蒙古医学杂志;2013年02期
【参考文献】
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1 黄灵芝;刘淑静;赵敬湘;苏醒;周虹;王字玲;;CD147对白血病细胞U937侵袭能力的影响[J];中国实验血液学杂志;2008年02期
2 戴冬秋,陈峻青,徐惠绵,王舒宝,赵凤凯,王梅先;E-钙黏附素及α-链接素的表达与胃癌生物学行为及淋巴结转移规律的关系[J];中华肿瘤杂志;2001年01期
3 杨军,戴冬秋;胃癌原发灶与转移灶E-钙黏附素mRNA表达水平的比较研究[J];中华肿瘤杂志;2005年01期
4 姚根有,陈小青,陈培辉;356例腺癌神经内分泌标志物的研究[J];浙江大学学报(医学版);2002年04期
5 ;Reg gene family and human diseases[J];World Journal of Gastroenterology;2003年12期
6 Gen Tamura;;Alterations of tumor suppressor and tumor-related genes in the development and progression of gastric cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2006年02期
7 Sajjad Karim;Arif Ali;;Correlation of p53 over-expression and alteration in p53 gene detected by polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism in adenocarcinoma of gastric cancer patients from India[J];World Journal of Gastroenterology;2009年11期
【共引文献】
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1 郭培培;;枸杞多糖的抗肿瘤作用及其机理研究现状[J];北京联合大学学报(自然科学版);2011年04期
2 徐红;边鹏;;胃癌组织中Runx3的变化机制及其与p53突变的对比[J];吉林大学学报(医学版);2006年06期
3 陈漉;权铁刚;迟宝荣;;PTEN与消化道肿瘤关系的研究进展[J];吉林大学学报(医学版);2007年06期
4 ;The Role of Expression of Mismatch Repair Proteins hMSH2 and hMLH1 in Gastric Carcinogenesis and Its Clinical Significance[J];Chinese Journal of Clinical Oncology;2007年05期
5 ;Studies on the Relationship between Neuroendocrine Cellular Differentiation in Gastric Cancers and Post-operative Survival Time[J];Chinese Journal of Clinical Oncology;2007年06期
6 王军,韩德民,王植平,张勇;喉癌前病变恶变机理的探讨[J];耳鼻咽喉头颈外科;1999年02期
7 李明明;张卫东;宗志红;胡振华;王旭晖;;唑来膦酸对肺癌95D细胞增殖和侵袭抑制作用的研究[J];中国肺癌杂志;2009年03期
8 陈桂林;黄燕玲;陈炜;郭慈仁;张风贞;;P53、Ki67在宫颈癌中表达及意义的探讨(附83例分析)[J];福建医药杂志;2011年05期
9 廖凯兵;郑传胜;;肝癌基因治疗的现状与未来[J];放射学实践;2011年09期
10 林虹,黄应桂,曹军,黄冰;食管鳞状细胞癌中p53蛋白和PCNA表达与淋巴结转移的关系[J];广东医学院学报;2000年01期
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1 叶冰;彭成;;胃癌各阶段多基因变异的研究现状[A];第六次全国中西医结合实验医学学术研讨会会议论文集[C];2002年
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1 李亚卓;胃癌中化疗敏感性相关基因甲基化、LRP16和NF-κB活性的研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年
2 许钟;P53基因突变与胃癌临床病理关系的meta分析及P53抑制蛋白iASPP转录调控机制初步研究[D];重庆医科大学;2011年
3 谢忆山;重组人腺病毒p53联合盐酸表阿霉素抑制人胃癌细胞SGC-7901的实验研究[D];武汉大学;2011年
4 曹亮;乳斑微转移模型在胃癌干细胞及前驱细胞研究中的作用及临床意义[D];大连医科大学;2011年
5 刘希双;胃癌发生的分子机制及其临床意义[D];山东大学;2011年
6 郑志超;Heparanase、E-Cadherin及MMP-9在胃癌组织中的表达及其与胃癌侵袭转移的关系[D];中国医科大学;2003年
7 韩哲;胃癌前期病变的中医证候学特点和萎康胶囊的作用机理研究[D];北京中医药大学;2005年
8 黄宝俊;胃癌转移相关基因的优化筛检研究[D];中国医科大学;2005年
9 刘义辉;神经节苷脂GD1a对表皮生长因子诱导的信号转导的增强作用[D];大连医科大学;2005年
10 杨兆勇;以BMP-2为靶点的抗骨质疏松药物的筛选及其上调剂04-5195A、NO.39、NO.3的体内外活性研究[D];中国协和医科大学;2007年
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8 王续;食管癌组织中Cx32、RASSF1A和SFRPs基因异常甲基化检测及临床意义[D];河北医科大学;2011年
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2 桑海泉;王强;;胃癌组织中MTA1,PTEN,E-cadherin的表达及其相互关系[J];世界华人消化杂志;2007年10期
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1 李爱清;胶原在胃癌发病中的作用及机制探讨[D];浙江大学;2010年
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【二级参考文献】
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1 戴冬秋,陈峻青,徐蕾,赵凤凯,吴东瑛;胃癌组织中E-钙粘附素表达的定量检测及临床病理学评价[J];中华医学杂志;1997年09期
2 徐惠绵,王剑峰,王振宁;CEAmRNA、CEA蛋白及细胞学检测胃癌腹腔液中游离癌细胞的初步评价[J];中华肿瘤杂志;2000年01期
3 蒋建利,姚西英,周筠,黄勇,张阳,陈志南;HAb18G/CD147刺激人肝癌细胞分泌基质金属蛋白酶的机制探讨[J];肿瘤;2004年06期
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1 卢娟;汪晖;卢方安;;肉桂酸对胃腺癌细胞诱导分化的实验研究[J];中国药理学通报;2007年02期
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3 汤燕平,王建国;乙酰胆碱对人胃粘膜上皮细胞和胃腺癌细胞N受体β亚单位的影响[J];中国应用生理学杂志;2005年04期
4 汤燕平;韩喜明;王建国;窦拉加;张莉;;ACH对人胃腺癌细胞内蛋白激酶A及CAMP的影响[J];中国病理生理杂志;2005年12期
5 郭红;许德顺;;端粒酶hTERT在人BGC-823胃腺癌细胞中的表达[J];锦州医学院学报;2006年01期
6 潘素华;余倩;别明江;刘祥;张雪;陈欣;胡黎黎;;4株人源乳酸杆菌体外黏附及抑制幽门螺杆菌黏附SGC-7901细胞的效果研究[J];卫生研究;2007年05期
7 黄正华;邹移海;;川芎嗪对胃腺癌细胞bFGF分泌和表达的影响[J];辽宁中医药大学学报;2009年03期
8 汤燕平,王建国;乙酰胆碱对人胃粘膜上皮细胞和胃腺癌细胞N受体γ亚单位的影响[J];中国应用生理学杂志;2004年03期
9 周世英,刘晓云,汤燕平;Ach对胃腺癌细胞Gs蛋白α亚单位的影响[J];现代肿瘤医学;2005年06期
10 周晓丽;宋政军;王旭艳;;丹参酮ⅡA对人胃腺癌细胞SGC-7901增殖、凋亡的影响[J];西安交通大学学报(医学版);2007年05期
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1 金焰;李明;孙文静;于旸;白静;陈峰;傅松滨;;人胃腺癌中肿瘤抑制基因ING4的表达抑制研究[A];北方遗传资源的保护与利用研讨会论文汇编[C];2010年
2 胡海霞;郑良朴;陈文列;林久茂;陈旭征;林薇;赵锦燕;;解毒消癥饮对胃腺癌细胞凋亡作用和线粒体膜电位影响的流式细胞术研究[A];第九届中国中西医结合实验医学学术研讨会论文汇编[C];2009年
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5 ;肿瘤细胞生物学[A];中国解剖学会2010年年会论文文摘汇编[C];2010年
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7 王建华;陈诗书;;人胃腺癌分化相关基因的克隆与鉴定[A];中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集[C];2001年
8 刘艳;陈瑞川;施文荣;郑微云;张鲁榕;陈奕欣;;化学合成抗菌肽tachyplesin对BGC-823细胞膜系的作用[A];第九次全国生物物理大会学术会议论文摘要集[C];2002年
9 吴洁;孙桂芝;;健脾益肾法干预非癌细胞阻遏胃癌转移前生境新策略机制研究述评[A];中华中医药学会第二十二届全国脾胃病学术交流会暨2010年脾胃病诊疗新进展学习班论文汇编[C];2010年
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1 张锦;肝肠钙黏连蛋白(CDH17)在胃癌发生发展中作用的研究及其相关蛋白的筛选[D];武汉大学;2011年
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4 应明真;P300/CBP相关因子在肠型胃癌中的表达及功能研究[D];第二军医大学;2010年
5 张文辉;胃远端腺癌miRNA表达谱及miR-204调控机制的初步研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2010年
6 陆航;RNAi沉默CXCR4基因抑制胃癌侵袭和转移的实验研究[D];广西医科大学;2012年
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8 严璐;14-3-3ε与RKIP相互作用对胃癌发生发展的影响及其机制研究[D];中南大学;2013年
9 连海峰;RNAi抑制NRP2表达对胃癌细胞SGC7901生长及侵袭转移的实验研究[D];重庆医科大学;2010年
10 史良会;LAT1信号在胃癌发展中作用及相关分子机制研究[D];重庆医科大学;2012年
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1 庄鹭花;PLC-γ1调节人胃腺癌迁移的机制研究[D];厦门大学;2014年
2 解燕川;MEK5在胃腺癌组织中的表达及对胃腺癌细胞生物学行为影响的初步研究[D];福建医科大学;2012年
3 王丽;Mcl-1在内质网应激介导的胃腺癌细胞凋亡中的作用及其调控[D];安徽医科大学;2011年
4 徐振;运用亚细胞蛋白质组学方法发现胃腺癌潜在标志物UCHL1[D];暨南大学;2010年
5 吴亚欧;Mcl-1对内质网应激介导的胃腺癌细胞凋亡敏感性的影响[D];安徽医科大学;2010年
6 刘立川;CerbB-2基因在胃腺癌中的表达与扩增及其意义[D];山西医科大学;2011年
7 高巍;胃腺癌2、3、11、20号染色体非整倍体与临床病理相关性研究[D];北京协和医学院;2012年
8 王剑威;基质细胞衍生因子-1及其受体CXCR4在胃腺癌中的表达及临床意义[D];青岛大学;2010年
9 吴成四;谷胱甘肽对胃腺癌SGC7901细胞化疗敏感性的影响[D];安徽医科大学;2013年
10 孔卫青;miR-181b和miR-182对胃腺癌细胞生长的影响及其靶基因研究[D];天津医科大学;2010年
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