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《浙江大学》 2010年
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七藿通窍片的质量分析及其代谢动力学研究

邓桂凤  
【摘要】: 七藿通窍片是由三七提取物和淫羊藿提取物组成的复方中药制剂。近年来,采用淫羊藿或三七来改善老年痴呆患者临床症状以及动物AD(阿茨海默),VD(血管性痴呆)模型行为的研究时有报道,其中以淫羊藿为主伍用三七提取物对全脑缺血再灌注造模大鼠空间学习和记忆障碍有明显改善作用。三七总皂苷(Panaxnotoginseng saponins,PNS)在改善胆碱功能、抗细胞调亡、调节性激素水平等方面有显著作用。还有研究表明,淫羊藿苷具有显著的植物雌激素样作用,对由过氧化氢诱导损伤的人体脐静脉内皮细胞有保护作用。这些药理作用对防治老年痴呆药物的开发有积极意义。在此指导下,我院药理毒理与生化药学研究所根据药理实验结果,将三七提取物和淫羊藿提取物按一定比例投料制成片剂,得到防治血管性老年痴呆的中药新药,命名为七藿通窍片。为了配合该药物的研究开发,按照中药新药的申报要求,在三七、淫羊藿提取物和片剂的初步质量研究的基础上,本研究进一步完善七藿通窍片的质量考察,为其质量标准的制订提供实验依据。 三七和淫羊藿作为传统常用中药,其药动学和药效学研究已有文献报道,但将两药混合给药同时测定生物样本中的三七皂苷R_1、人参皂苷Rg_1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb_1和淫羊藿苷等活性成分的研究未见报道。本文采用UPLC/MS对这几个活性成分在大鼠体内的药物代谢动力学进行了研究;同时研究了两味中药配伍及单用时各活性成分的药动学行为的区别,为该药的临床应用及其新药的研发提供理论和实验依据。 1.七藿通窍片的质量分析 目的建立七藿通窍片中五种活性成分三七皂苷R_1、人参皂苷Rg_1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb_1和淫羊藿苷的含量测定方法;完善片剂的鉴别、检查内容;考察片剂的稳定性,为七藿通窍片的质量标准制订提供实验依据。 方法采用RP-HPLC法测定,Agilent SB-C18色谱柱(250×4.6mm,5μm),乙腈-水为流动相,梯度洗脱,检测波长203nm和270nm,进样量50μL,流速:1.0mL·min~(-1),柱温≤24℃。对含量测定方法进行方法学研究和实样测定,同时照《中国药典》2005年版要求,对片剂的溶出度、崩解时限、片重差异进行考察。并按照中国药典2005年版二部附录XIX C药物稳定性试验指导原则对供试片剂进行稳定性试验。 结果在考察的浓度范围内各组分均呈现良好的线性关系(三七皂苷R_1 r=0.9993,人参皂苷Rg_1 r=0.9998,人参皂苷Re r=0.9991,人参皂苷Rb_1 r=0.9992和淫羊藿苷r=0.9994),不同浓度的各种成分的回收率在96.0%~117.2%之间,RSD<5.0%,日内、日间精密度RSD均<5.3%。测得四批片剂含量,其中,三七皂苷R_1含量为0.007282~0.007883g/片、人参皂苷Rg_1含量为0.03288~0.03373g/片、人参皂苷Re含量为0.003632~0.003999g/片、人参皂苷Rb_1含量为0.02826~0.03013g/片、淫羊藿苷含量为0.007010~0.007466g/片。供试片剂在15min左右基本溶出完全,崩解时限和片重差异均符合药典要求。稳定性试验所得结果与零时结果进行比较,影响因素热、光、湿对本品的溶出度和含量均无明显影响,但湿度对本品外观性状有一定影响。加速试验结果对本品含量、溶出度、外观性状均无明显影响。长期留样24个月,溶出度、外观性状无明显影响,但12个月后淫羊藿苷含量略有下降。 结论建立的分析方法灵敏、准确、专属性强,可用于七藿通窍片的鉴别、检查及含量测定。溶出度、崩解时限及片重差异结果均符合药典要求。稳定性试验结果证明本品宜置干燥处保存,室温留样二年质量基本稳定。 2.七藿通窍片的药物代谢动力学研究 目的(1)建立UPLC/MS法同时测定七藿通窍片在大鼠血浆中的5个活性成分,对三七提取物与淫羊藿提取物配伍及单用时各活性成分在大鼠体内药动学行为进行研究,探索两味中药配伍与否的药动学差异,同时考察片剂辅料对活性成分的影响。(2)研究七藿通窍片在大鼠尿样中的代谢产物,结合主要活性成分人参皂苷Rg_1、Rb_1和淫羊藿苷在鼠肝微粒体中的代谢研究,比较结果。 方法①取5只雄性SD大鼠,灌胃给药七藿通窍片后分别于4,9,25,45,60,90,120,180,240,360,480,720,1440,2880,4320 min时尾静脉取血,血浆样品经处理后,用UPLC-MS法测定血药浓度,获得七藿通窍片中各组分的药时曲线及药动学参数。②取20只雄性SD大鼠,分四组,每组5只,分别灌胃给予三七提取物+辅料、淫羊藿提取物+辅料、三七提取物+淫羊藿提取物、七藿通窍片后,于上述同样时间点由尾静脉取血,血浆样品经处理后,用UPLC-MS法测定血药浓度,获得四组大鼠中各活性成分的药时曲线及药动学参数。③收集大鼠0-12h的尿样,UPLC/MS分析;采用HPLC法研究人参皂苷Rg_1、Rb_1和淫羊藿苷在鼠肝微粒体中的代谢情况。 结果UPLC/MS方法学研究结果:在考察的浓度范围内各组分均呈现良好的线性关系(三七皂苷R_1 r=0.9991,人参皂苷Rg_1 r=0.9998,人参皂苷Re r=0.9994,人参皂苷Rb_1 r=0.9990和淫羊藿苷r=0.9992),不同组分不同浓度的提取回收率78.6%~98.3%,RSD<13.7%,准确度87.2%~109.3%,日内、日间精密度RSD均<16.7%。七藿通窍片中5个活性成分在SD大鼠体内的药动学行为各不相同,淫羊藿苷在体内消除迅速,6h之后就无法检出,三七皂苷R_1和人参皂苷Re在12h之后仍能检测到。而人参皂苷Rg_1在大鼠体内持续的时间则较长,到24h仍能检测到。人参皂苷Rb_1在大鼠体内的药动学行为与其他几个组分截然不同,在体内72h仍能检测到。分别对每一组分在单味给药情况下获得的主要药动学参数和片剂给药下获得的参数进行比较,对每一参数进行单因子方差分析和双样本T检验(95%置信区间)。结果发现,辅料的添加对皂苷的T_(max)有影响,P小于0.05,有显著性差异,未添加辅料的情况下,皂苷更快达峰;而淫羊藿苷则无此现象。其余参数比较结果P值均大于0.05,统计学意义上没有显著性差异。大鼠尿样中检测到几个代谢产物,并推测代谢途径,与文献报道吻合。主要活性成分除淫羊藿苷在鼠肝微粒体中有一相代谢,其余组分均未观察到代谢。 结论所建立的UPLC/MS法快速、准确、灵敏,能在9分钟内将几个组分完全分离。能有效用于七藿通窍片中各活性成分在生物样本中的分析。七藿通窍片中各味中药单给和片剂给药结果,主要药动学参数无显著性差异。5个活性成分在大鼠体内代谢主要以脱糖基化为主。
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R286.0

【引证文献】
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6 高娟;糖苷酶转化人参皂苷的研究[D];东北师范大学;2012年
7 曲相如;拟人参皂苷Rh2诱导人胃癌细胞SGC凋亡作用及其研究机制[D];吉林大学;2012年
8 蔡宝祥;人参皂苷Rb1、CK对紫外线损伤的保护作用及其机制研究[D];南京医科大学;2009年
9 吕爽;人参皂苷Rh2衍生物体外促进IFN-γ分泌及CTLL-2细胞增殖的作用研究[D];吉林大学;2014年
10 刘启兵;活性氮介导的内皮细胞株损伤及人参皂苷Rg1对Aβ肽源性活性氮损伤保护机制研究[D];浙江大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 刘敏;纤维素、淀粉、氨基酸对人参皂苷转化的影响[D];中国农业科学院;2013年
2 李鹏;人参皂苷与药物依赖的相关性研究[D];北京中医药大学;2014年
3 赛佳洋;人参皂苷Re单克隆抗体的制备及其酶联免疫分析方法的建立[D];北京中医药大学;2014年
4 潘玉婷;人参皂苷Rb3对血管内皮细胞的类雌激素样保护效应研究[D];甘肃中医学院;2014年
5 刘欣;人参皂苷Rb_1水解酶的分离纯化及其性质的研究[D];大连医科大学;2003年
6 田旭;奥克梯隆型人参皂苷及其相关物质的研究[D];吉林大学;2012年
7 李萍;复方人参皂苷氨基酸的研究[D];吉林农业大学;2013年
8 刘荣华;人参皂苷注射液在大鼠蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的实验研究[D];中南大学;2010年
9 张道军;高活性人参皂苷催化酶的筛选[D];杭州师范大学;2013年
10 曹姗姗;人参皂苷Re对心肌缺血大鼠的保护作用及其机制的研究[D];吉林大学;2010年
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