收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

基质VEGF-C和C-C趋化因子受体7介导前列腺癌淋巴结转移研究

黄昕  
【摘要】: 研究背景 肿瘤转移是恶性肿瘤致死的主要原因。近年来研究显示,淋巴系统对肿瘤向局部淋巴结和远端器官转移具有直接作用。本课题组前期研究结果提示,前列腺癌首先通过淋巴管向局部淋巴结扩散,而这一过程又为后续向远端器官转移提供了细胞富集库。淋巴内皮细胞生长因子-C (VEGF-C)是淋巴道新生及由此引起肿瘤细胞向淋巴结迁移的主要因素。趋化因子受体-配体间相互作用有助于肿瘤细胞实现向特定器官转移。 研究目的 本研究首要目标是构建一个由基质细胞来源VEGF-C诱导肿瘤淋巴道新生,引起前列腺癌淋巴结转移的动物模型。第二个目标是论证CCR7/CCL21趋化因子受体-配体作用轴是引导前列腺癌淋巴结转移的关键分子信号之一。 实验方法 1.为探索基质细胞来源VEGF-C在前列腺癌扩散中的作用,我们构建了一个由人类前列腺癌细胞LAPC-9与小鼠基质细胞株NIH 3T3以等比混合组成的皮下移植瘤动物模型。利用慢病毒载体在LAPC-9细胞标记编码Renilla luciferase (RL)的基因;在NIH 3T3细胞中标记编码人类VEGF-C (hVEGF-C)的基因,用含有标记GFP基因的慢病毒载体作为对照。LAPC-9/3T3混合移植瘤被植入重度联合免疫缺陷(SCID)小鼠皮下。用检测RL信号的CCD光学影像技术,在体和离体追踪移植瘤生长与扩散情况。原位移植瘤和肿瘤转移灶中趋化因子与受体的表达水平,分别由实时定量RT-PCR法、免疫组织化学法及western blot法进行分析。 2.为了进一步分析由上述动物模型所得结果,我们采用两株人类前列腺癌细胞株CWR22Rv1 (CWR)和LNCaP作为体外替代模型。并用慢病毒载体CMV-CCR7-IRES-GFP标记上述细胞株。用含有编码CCL21基因的腺病毒载体(Ad-CCL21)感染A549细胞株以生产含有CCL21的条件培养基,用Ad-firefly腺病毒载体作为对照。用趋化跨膜迁移实验(chemotaxis assay)检测上述表达CCR7的细胞株与条件培养基之间的相互作用。用实时定量RT-PCR和western blot法检测相关基因和蛋白产物的表达情况。 实验结果 1. LAPC-9/3T3-hVEGF-C移植瘤的边缘呈现大量新生淋巴管,并因此促进被标记的肿瘤细胞向局部淋巴结和肺进行转移(该组出现淋巴转移概率为66.67%)。与之相异,GFP对照组移植瘤均未见明显转移。通过检测两组样本中一系列与转移相关基因表达水平,我们发现hVEGFR-3、hMMP9、CCR7和CCL21淋巴结转移灶表达增加,CXCR4在肺转移灶中表达上调。另外,将淋巴结中分理出的部分转移灶重新移植入SCID小鼠皮下进行扩增,并检测相关基因表达水平。与对应原位移植瘤相比,扩增后肿瘤的CCR7基因表达增加11.62倍(P=0.0007),而CCL21基因表达增加11.37倍(P=0.001)。免疫组织化学实验检测进一步证实了上述结果。此外,分别从淋巴转移病灶和原位移植瘤分离制备单细胞悬液,前者在体外响应CCL21条件培养基发生趋化迁移的能力较后者明显增强(P0.000009)。 2.经基因修饰表达CCR7的CWR和LNCaP细胞株响应CCL21条件培养基进行趋化迁移的能力增强,并且这一现象可被抗-CCL21单克隆抗体拮抗。CCL21条件培养基刺激CWR/CCR7+细胞早期,其作用机制可能与激活促进存活的PI3K/Akt信号通路及NF-κB转录原件相关。 结论 上述结果提示,基质细胞来源的VEGF-C能引起肿瘤边缘功能性淋巴管新生,为前列腺癌转移提供途径。CCR7/CCL21作用在前列腺癌细胞上调,为肿瘤细胞经淋巴系统向局部淋巴结定向迁移提供趋化吸引信号。前列腺癌细胞在淋巴结的富集后经体内循环系统向远处转移与CXCR4受体上调有关。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 孙玥;冯罡;孙侃;;C-C趋化因子与糖尿病大血管病变研究进展[J];医学综述;2009年06期
中国重要会议论文全文数据库 前3条
1 吉松;黄海明;黄国;王超;;C-C复合材料与酚醛树脂的接触热阻试验研究[A];北京力学会第18届学术年会论文集[C];2012年
2 苏凌云;渠桂荣;李建平;郭海明;;钴催化的氮杂环化合物C-C键的形成[A];中国化学会第28届学术年会第6分会场摘要集[C];2012年
3 李志平;;铁催化C-H键和C-C键活化[A];第十六届全国金属有机化学学术讨论会论文集[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 徐润生;过渡金属催化有机小分子C-H键羟基化及C-C键断裂反应研究[D];浙江大学;2013年
2 张新民;系列含有糖基的新颖有机小分子催化剂的设计、合成及其在C-C键形成反应中的应用[D];吉林大学;2010年
3 黄昕;基质VEGF-C和C-C趋化因子受体7介导前列腺癌淋巴结转移研究[D];浙江大学;2010年
4 张向东;多芳基环戊二烯C-C键选择性断裂反应及产物发光性质研究[D];大连理工大学;2012年
5 袁红娟;官能化二硫缩烯酮的α-C-H键催化活化及C-C键形成反应研究[D];东北师范大学;2011年
6 何华锋;碳氢键活化/碳氢键官能团化在串联反应以及构建C-C、C-N、C-O键中的应用[D];浙江大学;2013年
7 李仁宏;光诱导活性C-H、C-C键的定向转化和无机催化材料表面结构重构[D];浙江大学;2014年
8 戴静;金属络合物、路易斯酸催化的C-C成键反应用于合成功能化烯烃的研究[D];浙江大学;2011年
9 申有名;基于叔胺α-C-H键活化及铟盐催化的C-C、C-O键形成反应研究[D];湖南大学;2009年
10 高健;铁催化的C-C、C-O键形成反应研究[D];南开大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 胡晶;拟正则映射在C-C空间的正则性[D];河北大学;2009年
2 钟延营;冷弯薄壁型钢C-C型梁柱钢板—螺栓节点力学性能研究[D];北京交通大学;2010年
3 赵妍;C-C电子商务中的信用风险和信用评级方法研究[D];北京邮电大学;2010年
4 王洪岩;金刚石刀具磨损与C-C原子键长[D];燕山大学;2012年
5 赵立兴;铜催化空气氧化选择性断裂乙二醇醚中饱和C-C键的研究[D];赣南师范学院;2012年
6 郭丽涛;有机相中水解酶催化C-C键形成[D];东华理工大学;2013年
7 程明珠;聚乙二醇和离子液体中钯催化C-C键形成反应研究[D];江西师范大学;2012年
8 张鑫海;双亲核试剂在杂环合成及C-C键形成中的应用[D];山东大学;2013年
9 苏虹;硅胶负载钯催化剂的合成及其在C-C偶联反应中的应用[D];南京理工大学;2013年
10 王小虎;含活泼氢化合物的C-H键参与的C-C键偶联反应的研究[D];扬州大学;2013年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978