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《浙江大学》 2007年
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副溶血弧菌海产品分离株的致病性和主要毒力基因结构分析

坎布  
【摘要】: 副溶血弧菌广泛分布于世界各地,是一种常见的海产品污染菌之一。该病原菌主要导致胃肠炎和败血症。副溶血弧菌的致病性与热稳定直接溶血素(Thermostable direct hemolysin, TDH,编码基因tdh)和TDH相关溶血素(Thermostable-related hemolysin, TRH,编码基因trh)有关。但并不是所有副溶血弧菌分离株都有致病性,目前为止环境和海产品分离株及临床分离株主要毒力基因的分布及其致病能力的相关性尚不清楚。大部分临床分离株都具有由TDH引发的神奈川现象(Kanagawa phenomenon, KP),只有少数环境和海产品分离株出现此现象。另外,携带trh基因的分离株均具有尿素酶表型。很多血清型的副溶血弧菌均可携带tdh和/或trh基因。自1996年在Culcata,印度发现新03:K6流行株以来,亚洲和美国等多次爆发由该血清型引起的胃肠炎中毒事件。其它血清型如O4:K48, O4:K68, O1:K25也有潜在的致病能力,而且与03:K6亲缘关系相近。因此,分离和收集不同来源的副溶血弧菌环境和海产品分离株以及临床分离株,比较其毒力基因的分布及结构特征并对其进行分型,有助于我们更好地了解副溶血弧菌的致病机理及其分子生态特征,从而可提出控制策略,有效预防副溶血弧菌病的发生。 从5个不同海产品加工厂和杭州海产品零售市场共采样766份,包括新鲜、冷冻和成品海产品以及海产品加工环节中的环境样品。经过碱性蛋白胨水的预增菌和选择性培养基(TCBS)的初步鉴定后,以具有副溶血弧菌种特异性的不耐热溶血素基因tlh和旋转酶B基因gyrB为靶目标进行双重PCR鉴定。检测结果显示163株(163/766,21.3%)为副溶血弧菌。上述结果表明,新鲜、冷冻海产品及其加工环境中均存在具有潜在致病性的副溶血弧菌。 比较三种不同限制性内切酶(ApaⅠ、SmaⅠ和NotⅠ)对54株副溶血弧菌环境、海产品和临床分离株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型。结果表明NotⅠ的分型效果优于ApaⅠ或SmaⅠ,在54株分离株中,有49株具有可分型性,而另外5株不能被分型。经PFGE指纹图谱分析,可将所有菌株划分为11个脉冲型(分别为A至K)。参考株BJ1997和5株海产品分离株属于Ⅰ脉冲型,其它环境和海产品分离株则分别属于A至H、J和K PFGE型。临床分离株主要集中于A、B、D、E、G和K脉冲型。B型为主要的脉冲型,包含4株临床分离株和4株海产品分离株,同时它又可分为3个亚型,其中2株临床分离株(ZJ1和ZJ5)和2株海产品分离株((ZJ6和ZJ7)分别属于B1和B3亚型。上述结果暗示杭州地区的食物中毒事件可能因食用未煮熟的已污染副溶血弧菌的海产品所致。同时也表明PFGE分型体系可用于不同来源副溶血弧菌的遗传多样性研究。 为深入了解不同来源副溶血弧菌的表型特征及基因分布情况,本研究对263株副溶血弧菌(包括4株参考菌株,32株临床株和227株环境和海产品分离株)进行表型分析和毒力相关基因的检测。结果表明,所有菌株都携带toxR和toxRS基因。28株临床菌株(28/32,87.5%)和3株海产品分离株(3/226 1.32%)为tdh阳性,3株临床株(9.4%)和7株海产品分离株(3.09%)为trh基因阳性。31 tdh-阳性的临床和海产品分离株中,30株(30/31,96.77%)为神奈川现象阳性,而10株trh-阳性中,7株(70%)为尿素酶阳性。1株海产品分离株和22临床分离株属于新流行株03:K6。比较新的03:K6流行株、01:KUT和04:K68与老的03:K6菌株toxRS序列,发现在第576至1244位碱基之间存在着6个碱基的突变。在32株临床分离株中,有26株为GS-PCR阳性,17株为orf-PCR阳性。而在海产品和环境分离株中,只有1株为GS-PCR阳性,5株为orf-PCR阳性。上述结果显示副溶血弧菌新流行株03:K6和其它具有致病性的类似血清型均存在于中国沿海地区。 选取16株具有不同表型和基因型的副溶血弧菌代表性菌株进行体内外致病性研究。结果表明不同来源的菌株其致病性存在着一定的差异。临床菌株的产肠毒素能力显著高于海产品分离株(P0.01,73.82%vs 62.07),经腹腔注射后临床菌株的小鼠毒力显著强于海产品分离株(P0.05),LD50分别为106.62和107.13。另外,临床菌株具有更高的体外培养细胞(HeLa和Caco-2)粘附能力和更强的细胞毒性(HeLa),但无显著性差异。Tdh阳性分离株与tdh阴性菌株相比能产生更高的肠毒素(P0.05,74.24%vs 60.55%’),对小鼠毒力更强,LD50分别为106.55和107.21,具有显著性差异(P0.05)。另外,tdh阳性分离株具有更高的细胞粘附能力和更强的细胞毒性。体内外毒力试验表明trh阳性分离株的致病性位于tdh阳性与tdh和trh阴性菌株之间。上述结果表明副溶血弧菌临床分离株或tdh阳性菌株的体内外致病性高于海产品分离株或tdh阴性菌株。 为进一步探讨tdh基因的染色体定位和结构特征,选取15株tdh阳性的副溶血弧菌代表菌株(12株临床株和3株海产品分离株)进行tdh基因的克隆和序列分析。结果表明10株临床株的tdh属于tdh1(相似性98%),2株临床株和1株海产品分离株的tdh为tdh2(相似性99.2%),另外2株海产品分离株的tdh则属于tdh3(相似性98%)。此外,采用长距离PCR (LA-PCR)对海产品分离株HZ34 12 kb长的tdh临近区域(位于全基因组的VPA1312至VPA1327;)进行克隆和序列分析。结果表明该区域位于染色体2中,含有两个主要毒力相关基因,VPA1321和VPA1327,分别编码细胞杀伤因子(cytotoxic necrotising factor)和胞外酶T (exoenzyme T)。同时采用基因步移试剂盒扩增菌株F22 tdh启动子区域及其3’区域(长为5.6 kb,tdh包括基因),该菌株同时含有tdh和trh基因,且无法用LA-PCR进行目的片段的扩增。结果表明,在tdh的5’端含有2个开放阅读框架,ORF1和ORF2为类似插入序列,与副溶血弧菌RIMD2210633高度相似性(97%),而ORF2与副溶血弧菌的TH3996的转座酶相似性为96%。另外在tdh基因的3’端发现两个未知基因,两者都编码假设蛋白(hypothetical protein)VP1767(相似性分别80.9%和55.5%),对应于副溶血弧菌RIMD2210633的染色体1中。 本试验结果为深入探索副溶血弧菌的致病性、分子生态特征及基因水平转移的可能途径奠定了良好基础。
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:S941

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 刘秀梅,陈艳,王晓英,计融;1992~2001年食源性疾病暴发资料分析——国家食源性疾病监测网[J];卫生研究;2004年06期
2 张蔚;潘劲草;孟冬梅;陈坤;;杭州地区2000-2002年副溶血弧菌的分子分型研究[J];中华流行病学杂志;2006年04期
【共引文献】
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1 周建平;;襄樊市肉食品大肠杆菌污染状况的检测[J];安徽农学通报;2008年13期
2 赵广英;邢丰峰;;基于琼脂糖和纳米金的电流型免疫传感器快速检测副溶血性弧菌[J];传感技术学报;2007年08期
3 李斌;陈碧鹃;方建光;张继红;蒋增杰;贾永超;;贝类食源性传染病病原及其消除方法的研究进展[J];水产科学;2009年10期
4 赵广英;申科敏;励建荣;;副溶血性弧菌增菌培养基及培养条件的改进[J];水产科学;2010年03期
5 顾冬花;;市售仔虾中副溶血性弧菌的检测[J];山东畜牧兽医;2012年04期
6 莫秋华;李强;林继灿;谭华;涂承宁;叶立青;刘志明;杜坚;孙虹;李书香;王献煌;杨泽;;食源致病菌96微孔板DNA诊断芯片的研制及在一起食物中毒突发事件中的应用[J];南方医科大学学报;2010年03期
7 朱炳林;张茜茜;方维焕;;瑞士乳酸杆菌HZ521株的分子鉴定及其部分生物学特性研究[J];动物医学进展;2009年02期
8 李巧苹;刘晓红;蒋德源;;副溶血弧菌耐热性直接溶血素的研究进展[J];福建畜牧兽医;2010年06期
9 谭海玲;李柏生;邓小玲;方伟;柯碧霞;柯昌文;;2008年广东省食物中毒副溶血弧菌分子特征研究[J];华南预防医学;2010年05期
10 郑泽红;赵洁玲;郑泽璇;卓菲;杨贵清;沈静媛;游杰;;深圳市罗湖区部分食品和加工环节样品中副溶血性弧菌污染状况分析[J];华南预防医学;2012年01期
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1 赵永刚;副溶血弧菌tdh、trh和tlh基因的克隆、表达及基因敲除对其溶血活性的影响[D];中国海洋大学;2010年
2 陈伶利;生物功能化粒子/核酸探针技术快速检测病原菌及ATP的研究[D];湖南师范大学;2010年
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5 陈春雷;肝脏移植术后肠道微生态状况的变化及相关干预的实验研究[D];浙江大学;2006年
6 李明成;产志贺毒素大肠埃希菌多重耐药分子机制的研究[D];吉林大学;2006年
7 王勇;感染性腹泻预防控制对策与实验室监测的研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2007年
8 寇晓霞;水体和贝类中食源性病毒分子检测研究及污染调查[D];中国科学院研究生院(武汉病毒研究所);2007年
9 秦迪岚;荧光纳米标记与编码技术用于几种重要病原菌检测的研究[D];湖南大学;2008年
10 杨雷;副溶血性弧菌的体外比较转录组学研究[D];中国协和医科大学;2009年
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1 王延昭;利用免疫磁珠技术富集肠炎沙门氏菌和金黄色葡萄球菌[D];华中农业大学;2010年
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7 ;科技动态[J];中国家禽;2007年07期
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1 孙淑红;崔治中;金文杰;王增福;张纪元;;1997-2001间31个不同传染性法氏囊病病毒分离株的致病性研究[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集(下)[C];2003年
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6 王永明;王晓丽;龙冬;马大亮;朱万光;李士成;;一株猪链球菌2型菌株的分离鉴定[A];首届中国兽药大会——兽医生物制品学、兽医微生物学学术论坛论文集(2008)[C];2008年
7 任艳;陈创夫;乔军;杨霞;张辉;王鹏雁;盛金良;倪伟;;牛病毒性腹泻病毒石河子株的分离与基因型鉴定[A];中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十六次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十五次学术研讨会论文集[C];2009年
8 刘晓峰;孙自勤;刘长江;尚瑞莲;贾爱芹;;幽门螺杆菌临床分离株的基因型与临床疾病关系的实验研究[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编(上册)[C];2007年
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3 Sagheer Atta;[D];西南大学;2011年
4 汤细彪;猪源多杀性巴氏杆菌的分子流行病学与致病性研究[D];华中农业大学;2010年
5 吴晓平;商品蛋鸡源J亚群禽白血病病毒分离株生物学特性研究[D];扬州大学;2010年
6 张青婵;A亚群禽白血病病毒不同分离株的基因组和生物学特性比较[D];山东农业大学;2010年
7 梁俊文;新城疫分离株P和HN基因分子进化与致病性的相关研究[D];山东师范大学;2010年
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9 刘丽华;关于禽脑脊髓炎病毒内蒙分离株基因组的研究[D];内蒙古农业大学;2003年
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1 陆静;布鲁菌内蒙古分离株部分外膜蛋白基因的克隆与序列分析[D];内蒙古农业大学;2010年
2 齐亚银;致羔羊脑炎肠球菌的分离鉴定及部分生物学特性研究[D];石河子大学;2005年
3 王志刚;三个CTV弱毒分离株的拮抗效果研究[D];西南大学;2007年
4 佘晓彬;鸽痘病毒分离株鉴定、致弱及免疫效力研究[D];扬州大学;2007年
5 熊素玉;酸马奶中乳酸菌的分离鉴定及其生物学特性的研究[D];新疆农业大学;2007年
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