收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

ANXA1在肿瘤细胞多药耐药和药物代谢酶CYP3A4表达调控中的作用

朱逢佳  
【摘要】: 人细胞色素P450 3A4 (CYP3A4)参与50%以上临床常用药物的代谢和诸多典型致癌物的活化。其活性可以被许多物质所诱导或抑制,这使得临床上在药物合用时会产生毒副作用增加、药效降低甚至无效的结果。了解CYP3A4的调控将有助于指导临床合理用药,为减轻或避免药物的毒副作用提供科学依据。本文采用建立阿霉素体外逐步诱导的方式建立了多药耐药细胞K562细胞模型,蛋白质组学技术手段寻找与耐药相关蛋白,研究其在肿瘤多药耐药中的贡献,及与CYP3A4之间的关联,为理论及临床应用提供依据。 1.K562耐药细胞的建立及双向电泳法寻找分子靶点 采用建立阿霉素体外逐步诱导的方式建立了多药耐药细胞K562细胞模型,K562细胞与阿霉素ADR共存的初期,细胞总处于增殖死亡的动态过程中,直至半年后,药物一直维持在1 mg/L浓度下,细胞的耐药特性趋于稳定。细胞的形态转好,增殖周期加快,与母细胞无异。诱导的K562/ADR细胞与母细胞相比,不但表现出对ADR高度耐受,而且有多药耐药现象,尤其是长春新碱(VCR)和伊马替尼(imatinib), K562/ADR对ADR、VCR、imatinib的IC50分别提高了149、134和63.3倍,提示所建的耐药细胞获得了多药耐药特性。 应用高效液相色谱法测定耐药株细胞内阿霉素的积聚情况,结果显示,在2 hr时,K562细胞内的阿霉素含量约为2.925μmol/L·mg,比K562/ADR细胞内阿霉素的含量1.522μmol/L·mg高,p0.001,提示K562/ADR的P-gp外排泵可能发挥作用,将阿霉素排出细胞。1week后,K562细胞几乎全部死亡,而K562/ADR细胞内的阿霉素积聚显著升高但不影响其生理活性,提示K562/ADR细胞内除了P-gp药物外排泵还有其他耐药机制在发挥着作用。此外,由于阿霉素主要通过CYP3A4代谢酶进行代谢,故检测了K562与K562/ADR细胞内CYP3A4的表达变化,结果显示CYP3A4表达变化不是引起K562细胞多药耐药产生的原因。 为全面了解K562多药耐药产生的分子机制,利用蛋白质组学技术,用固相pH梯度等电聚焦双向凝胶电泳,对所建立的以转运蛋白高表达为主要耐药机理的K562/ADR细胞进行了研究,探讨细胞耐药后蛋白的变化,对只表达变化差异大的部分蛋白点进行MALDI-TOF/TOF分析,搜索Swiss-Prot蛋白库,鉴定了几个蛋白的身份,这些蛋白质表达情况的变化,是人白血病细胞K562从对药物敏感到接触到化疗药物ADR后转运蛋白高表达,以至产生多药耐药特性这一变化中细胞内一系列分子事件的直接体现,是转运蛋白及其表达调控的分子基础。这些蛋白根据功能的不同总体可分为钙结合蛋白、分子伴侣(chaperones)、代谢酶相关蛋白、蛋白合成或DNA合成相关蛋白等等。 2.ANXA1蛋白的调节对K562细胞耐药行为的影响 为证实双向电泳结果的可靠及真实,进一步利用Western blot与细胞免疫化学方法验证Spot1蛋白(ANXA1蛋白)在K562、K562/ADR细胞中的表达差异。应用pcDNA3.1(+)系统成功构建ANXA1的表达载体,并稳定转染得到经western blot鉴定的能稳定表达ANXA1的K562/ADR细胞系。之后以该细胞系完成了对ADR及VCR的细胞毒性的影响的研究。实验结果显示,表达上调的K562/ADR细胞对ADR及VCR的耐受程度显著下降。同时,应用人工合成miRNA技术手段,构建ANXA1发夹结构表达载体,并稳定转染得到经western blot鉴定的下调ANXA1表达的K562细胞系,对其ADR和VCR的IC50进行考察,结果显示,ANXA1表达下调的K562细胞对ADR的耐受程度显著提高,而对VCR的耐受程度几乎和表达空载体的空白细胞一致。同时检测稳定转染ANXA1的K562/ADR的DNAladder情况,结果显示ANXA1表达上调的转染细胞的细胞凋亡情况比对照细胞有所增加,提示ANXA1通过介导K562细胞凋亡发挥作用。 3.乳腺癌MCF-7细胞中ANXA1和CYP3A4表达调控研究 本部分实验分析乳腺癌细胞MCF-7敏感细胞与耐药细胞ANXA1的表达情况,与K562中ANXA1的表达情况相反,提示ANXA1在实体肿瘤细胞和血液系统肿瘤细胞中发挥的作用不同。检测MCF-7细胞中ANXA1、IL-6和CYP3A4 mRNA水平和蛋白水平,结果提示在MCF-7细胞中ANXA、IL-6及CYP3A4可能存在信号通路调控通路。结合国内外文献检索报道结果,推测实体肿瘤MCF-7细胞中,ANXA1表达通过IL-6调控下游CYP3A4行为,影响药物代谢情况,这也可能是肿瘤产生多药耐药的原因之一。这些结果为将来进一步利用本实验中建立的细胞体系对ANXA1和CYP3A4在肿瘤细胞多药耐药中的作用及表达调控研究、指导临床用药及初期诊断提供依据。 4.胃癌ANXA1核定位与腹腔转移的研究 肿瘤多药耐药现象是临床肿瘤恶性行为之一。除了多药耐药现象外,肿瘤的分化、浸润深度、淋巴结转移等也是肿瘤进程的重要指标。本文考察了浙江大学附属邵逸夫医院肿瘤科收集的104对胃癌病人组织样本中ANXA1的表达与定位。免疫组化结果显示,ANXA1在胃癌组织与正常组织中均表达。ANXA1同时存在胞浆定位和核定位。分析ANXA1胞浆定位和核定位与临床病理参数的关系后显示,ANXA1不仅与多药耐药的肿瘤临床恶性行为有关,ANXA1的核定位与肿瘤大小、腹腔转移和TNM分期高度相关。ANXA1可作为胃癌独立预后指标指导临床诊断与治疗。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 贺云霞,孙进,程刚;多药耐药性P-糖蛋白在药物肠道吸收中的作用[J];沈阳药科大学学报;2004年05期
2 舒焱,王连生,肖卫民,王伟,黄松林,周宏灏;定量5-羟奥美拉唑和奥美拉唑砜以探测中国人肝微粒体中CYP2C19和CYP3A4的活性(英文)[J];Acta Pharmacologica Sinica;2000年08期
3 张松波;段娟;闾四平;尚云峰;宋旭日;周宏灏;;天然维生素E对CYP3A4活性影响的体内研究[J];中国临床药理学与治疗学;2010年08期
4 杨仁池;多药耐药相关蛋白基因研究进展[J];中华血液学杂志;1995年07期
5 艾辉胜,杜耀斌,王桂林,楼方定,赖春宁,胡美茹,胡良平;三种方法检测急性白血病患者多药耐药基因表达[J];中华医学杂志;1997年11期
6 刘飞;胶质瘤细胞多药耐药研究进展[J];国外医学.神经病学神经外科学分册;1998年04期
7 李俐;Pgp与肿瘤的多药耐药性[J];中国肿瘤临床与康复;1998年01期
8 陈修煦;p53突变、微卫星不稳定性与多药耐药[J];国外医学.遗传学分册;1999年03期
9 王祥卫,杨唐俊,何斌,金欢胜,曾毅,刘素英;人膀胱癌BIU-87/ADM细胞中Bcl-2基因的原位表达[J];第三军医大学学报;2000年01期
10 周琦,徐建业,朱晓玲,卢萍;卵巢癌多药耐药基因表达的临床研究[J];重庆医学;2000年01期
11 彭华,程泽能;细胞色素P450-3A4相关的药物相互作用[J];中国临床药理学杂志;2001年05期
12 管俊;肿瘤多药耐药转运蛋白的研究进展[J];医学综述;2002年05期
13 彭佑群,赵禾;多药耐药相关蛋白与药物耐受性[J];现代医药卫生;2003年06期
14 谢小志,谢丽微,王宗敏,张海燕;多药耐药基因产物在胃癌中的表达及其临床意义[J];诊断病理学杂志;2003年01期
15 李佳平,李英勇,周洪贵,唐良萏,卞度宏;bcl-2基因与人卵巢癌细胞多药耐药机制的研究[J];四川肿瘤防治;2005年01期
16 李宏建,李贵海,孙付军,尹格平;苦参碱对肿瘤细胞获得性多药耐药的逆转作用[J];中国医院药学杂志;2005年05期
17 田庆锷,张慧,李玛琳,顾胜华;P-糖蛋白与多药耐药的关系[J];药品评价;2005年03期
18 孙爱民,袁亚维,陈龙华;蛋白激酶C活性、表达及亚细胞分布与KBV200细胞多药耐药相关性的研究(英文)[J];中国现代医学杂志;2005年18期
19 田怀平;;实体瘤多药耐药的发生机制[J];中国医院药学杂志;2006年05期
20 严煜林;林有坤;;银屑病和多种耐药因子表达的关系[J];医学综述;2006年20期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 刘晓秋;韩英;赵阿津;;脉冲磁场对白血病细胞HL60/ADR多药耐药逆转作用及分子机制研究[A];第九届中国生物毒素学术研讨会论文摘要[C];2009年
2 费新红;许小平;陈莉;高磊;;小鼠多药耐药白血病细胞系的建立及其生物学特性观察[A];第九届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2003年
3 朱健铭;姜如金;吴康乐;王建敏;;多药耐药鲍氏不动杆菌菌株亲缘性分析[A];2009年浙江省检验医学学术年会论文汇编[C];2009年
4 刘玉村;;应对多重耐药菌感染——措施与策略[A];中国医院协会第十六届全国医院感染管理学术年会资料汇编[C];2009年
5 陈信义;赵永晨;王继亮;刘清池;张文艺;;川芎嗪逆转急性白血病多药耐药临床研究[A];第六届全国中西医结合血液病学术会议论文汇编[C];2002年
6 杨永红;李惠芳;石永进;王逸群;张英;王奕嘉;朱平;;转mdrl基因诱导CIK细胞耐药并保持肿瘤杀伤活性[A];第三届全国血液免疫学学术大会论文集[C];2003年
7 苏爱玲;陈宝安;陈宝安;丁家华;高冲;孙耘玉;程坚;赵刚;王俊;马燕;宋慧慧;;汉防己甲素对白血病细胞NF-κB表达的影响[A];第11次中国实验血液学会议论文汇编[C];2007年
8 翟宝进;邵泽勇;伍烽;王智彪;;超声波逆转肿瘤多药耐药的实验研究[A];庆祝中国超声医学工程学会成立20周年——第八届全国超声医学学术会议论文汇编[C];2004年
9 李冬云;陈信义;刘瑞娟;;单味中药成分逆转白血病多药耐药基础研究评述[A];中华医学会第八次全国血液学学术会议论文汇编[C];2004年
10 白庆咸;王仲倩;陈协群;;纤维粘连蛋白在多发性骨髓瘤细胞多药耐药形成中的作用[A];第九届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2003年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 朱逢佳;ANXA1在肿瘤细胞多药耐药和药物代谢酶CYP3A4表达调控中的作用[D];浙江大学;2010年
2 陈莉;白血病细胞多药耐药基因表达谱变化及其逆转策略的研究[D];第二军医大学;2002年
3 周晓冬;腺样囊性癌多药耐药机制的实验研究[D];天津医科大学;2005年
4 田彦璋;葡萄糖神经酰胺合成酶参与肝癌细胞多药耐药的实验研究[D];山西医科大学;2011年
5 王天晓;逆转肿瘤MDR的新药开发研究[D];吉林大学;2005年
6 王吉刚;TRAIL逆转白血病骨髓基质细胞粘附介导Jurkat细胞耐药的研究[D];第三军医大学;2005年
7 石琳熙;酪丝缬肽对多药耐药肿瘤细胞耐药性的逆转作用及其机制研究[D];天津医科大学;2008年
8 赵燕秋;肿瘤耐药的分子机制研究[D];第四军医大学;2002年
9 郭杨;肺癌多药耐药的分子机制研究[D];河北医科大学;2004年
10 赵园园;三氧化二砷对人胃癌耐药细胞株SGC7901/ADM的耐药逆转作用及机制研究[D];中国医科大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 尚东浩;蛋白激酶C(PKC)与肾细胞癌多药耐药相关性的研究[D];中国医科大学;2003年
2 姚学清;人大肠癌多药耐药细胞株LOVO/5-FU的建立及其生物学特性的研究[D];第一军医大学;2000年
3 闵婕;HBV感染与原发性肝癌生物学行为及多药耐药关系研究[D];第四军医大学;2005年
4 董会月;丹皮酚逆转人白血病耐药细胞系K562/ADM细胞多药耐药的作用研究[D];福建中医药大学;2010年
5 祝建勇;多药耐药相关蛋白1(MRP1)在梗阻性黄疸肝组织中表达及意义的初步研究[D];第三军医大学;2003年
6 梅朝蓉;溴泰君联合加温逆转MCF-7/ADM细胞株多药耐药的实验研究[D];四川大学;2005年
7 杨波;顺铂诱导人口腔腺样囊性癌多药耐药的形成及其机制的初步研究[D];第三军医大学;2004年
8 包明红;肺腺癌多药耐药细胞系的建立及耐药逆转剂的研究[D];安徽医科大学;2005年
9 朱丽波;大蒜素对胃癌细胞株SGC-7901 P-gp、GST-π表达的影响[D];中国医科大学;2006年
10 由蕾;银屑病患者皮损中RXRmRNA及MDRmRNA的表达研究[D];广西医科大学;2007年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 衣晓峰 李晓丽;肠癌多药耐药判断有新说[N];健康报;2003年
2 本报特约撰稿人 陆志城;CYP3A4晶体结构揭晓[N];医药经济报;2004年
3 傅德明;红霉素逆转乳腺癌多药耐药[N];中国医药报;2001年
4 记者 李天舒;纳米颗粒可对抗多药耐药菌[N];健康报;2010年
5 马武开 钟琴 刘正奇;中医药逆转类风湿多药耐药思路[N];中国医药报;2009年
6 陆志城;CYP3A4结构露峥嵘[N];医药经济报;2002年
7 记者 衣晓峰 靳万庆 通讯员 李晓丽;大肠癌多药耐药判断标准有新“尺度”[N];中国中医药报;2003年
8 论坛;中药逆转肿瘤多药耐药有新发现[N];北京科技报;2002年
9 陈汉桥;中药逆转肿瘤多药耐药有新发现[N];中国医药报;2002年
10 刘云涛;要优选耐药低的药物[N];中国医药报;2008年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978