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《浙江工业大学》 2010年
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抗真菌剂的筛选

吴艳辉  
【摘要】: 植物真菌病害是植物病害中最严重的一种病害,是造成农业损失的主要原因之一,应用拮抗微生物对植物真菌病害进行生物防治具有巨大的应用前景。本文主要从菌株筛选及其发酵液的抑菌活性、稳定性、菌株的分类鉴定、摇瓶发酵条件和抑菌物质的理化性质方面进行初步研究,旨在从土壤中分离筛选出对植物病原真菌有良好拮抗效果的生防菌,探求用于植物病害生物防治的新资源。 采用稀释平板法,以高氏1号培养基为分离培养基,从杭州地区采集的11份土样中共分离到99株放线菌,筛选出9株对产核黄素的无名假丝酵母(Candida famata)有拮抗作用。采用平板对峙法复筛到4株对供试的多种植物病原真菌抑制效果较强的菌株W-04、W-01、25G和W2R,生长速率法测定4株菌的发酵滤液对西瓜枯萎病原菌的抑制作用,其中W-04的抑菌效果最好,抑菌率达到82.6%;W-01、W2R次之;25G抑菌活性最小,抑菌率为34.3%。 根据形态和培养特征、生理生化特性和16S rDNA序列分析结果,将4株菌均归属于链霉菌属,其中W-04、W-01和W2R为同一种,初步鉴定为淡紫灰链霉菌(Streptomyces lavendulae);菌株25G初步鉴定为浅绿链霉菌(Streptomyces viridans)。 为确定活性物质的基本理化性质,分别对发酵滤液存储稳定性、pH稳定性、温度稳定性以及光照稳定性进行了研究。结果表明,菌株W-04具有较好的存储稳定性,放置一个月后抑菌活性下降4.7%;4株菌对热不稳定,而对光照和酸碱具有一定的耐受性,其中W-04、W-01和W2R在pH 6~10变化范围内活性下降率不超过10%。 通过溶剂萃取和离子交换等方法对活性物质进行初步分离纯化,确定了活性成分为水溶性物质,并初步判断为碱性或盐基性物质,为进一步分离纯化奠定基础。 通过单因素和正交实验对抑菌活性较强的菌株W-04的发酵培养基和发酵条件进行研究,获得最佳发酵条件和最优培养基配方。培养基组成为(g/L):可溶性淀粉40,黄豆粉25,鱼粉6,葡萄糖5。在28℃,200 r/min振荡培养条件下,斜面菌龄为4 d,种龄为44 h,接种量在8%,装液量为70 mL(250 mL)时条件为最佳。
【学位授予单位】:浙江工业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:S482.2

【参考文献】
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