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《浙江工业大学》 2010年
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刺糖多孢菌基因组重排育种及快速筛选模型的研究

周淑芳  
【摘要】: 刺糖多孢菌(Saccharopolyspora spinosa)可产生一种具有触杀及摄食毒性的大环内酯类广谱杀虫剂——多杀菌素(spinosad)。本论文对刺糖多孢菌基因组重排育种进行了系统研究并构建了用于多杀菌素初筛的快速筛选模型。 利用多杀菌素对果蝇幼虫的致死率与多杀菌素浓度的相关性,本文中构建了以果蝇幼虫为指示动物、刺糖多孢菌菌块为检测对象的活体筛选模型,运用该快速初筛模型通过比较不同刺糖多孢菌菌块对果蝇幼虫的致死率可初步筛选出多杀菌素产量较高的菌株。最终选取对3龄果蝇幼虫处理时间2小时果蝇幼虫致死率达到50%以上的刺糖多孢菌菌株进行复筛。 刺糖多孢菌原生质体制备与再生的条件研究方面,本文综合考虑刺糖多孢菌原生质体的形成率和再生率两项因素,在含有0.75 %的甘氨酸的培养基中二次培养36h后采用4.3×10~4U/mL溶菌酶在36℃处理50min后培养于4号修改培养基再生培养基作为刺糖多孢菌的原生质体形成及再生条件。 在刺糖多孢菌诱变育种及突变体库的建立过程中,根据多杀菌素生物合成及代谢调节理论,通过原生质体紫外线诱变,分别筛选抗前体(鼠李糖、乙酸钠、丙酸钠)突变株、抗红霉素突变株和抗磷酸二氢钠突变株,最终获得抗25U/mL红霉素的高产菌株UV-405,其产量345.62mg/L比原始出发菌株(多杀菌素产量为188.68mg/L)提高了83.18%以及抗10mg/mL乙酸钠的高产菌株UV-502,其产量308.24mg/L比原始出发菌株(多杀菌素产量为188.68mg/L)提高了63.37%。 最后,选取原生质体紫外线诱变育种得到的高产菌株UV-405和UV-502同时作为亲本菌株,经过四轮循环的原生质体融合,获得4号菌株多杀菌素产量达到了479.16mg/L,比产量最高的亲本菌株UV-405提高了38.64%,比原始菌株提高了1.54倍。
【学位授予单位】:浙江工业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:S482.3

【引证文献】
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【参考文献】
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