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《浙江工业大学》 2010年
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二氯甲烷降解菌的分离鉴定、微生物菌剂及基因文库的构建研究

胡志航  
【摘要】:本研究探讨二氯甲烷的微生物降解。从长期被卤代脂肪烃污染的曝气池中获得活性污泥,首先在对活性污泥进行定向驯化后,在特定的载体上进行了发酵扩大培养,制备了二氯甲烷生物处理复合微生物菌剂。实验制备得到复合微生物菌剂成品,可方便投加使用。通过对pH、烘干温度、载体比例的考察,利用正交试验,确定了复合微生物菌剂制备的最佳工艺,其最佳pH为7;最佳烘干温度为35℃;最佳载体比例(麦麸:纤维素:稳定剂)为85%:10%:5%。在二氯甲烷浓度为800 mg/L的水溶液中,经过168 h后可降解25.81%。制备的菌剂具有较好的稳定性,可在常温下稳定保存30 d的时间,4℃下可保存60 d甚至更长的时间而仍保持对二氯甲烷的去除效率。 从定向驯化的活性污泥中,分离筛选得到1株二氯甲烷降解菌株,通过菌株形态学观察、生理生化测试、16S rDNA序列同源性以及Biolog综合分析,确定为梭形芽孢杆菌(Lysinibacillus fusiformis),查阅相关文献,未发现该菌株具有降解二氯甲烷的报道,因此,可将该菌株视为二氯甲烷生物降解的新菌株,命名为WH22。当处于二氯甲烷浓度为800 mg/L体系中,WH22经过168 h,降解率为22.7%。 对筛选得到的菌株WH22进行~(60)Coγ射线和紫外线复合诱变育种,选育得到3株正突变株zt-4,zt-5,zt-10,在相同条件下,二氯甲烷的降解率分别达到了66.2%,52.9%,52.1%,较之原始出发菌株,分别提高了191.63%,133.04%,129.52%。以pH、温度和无机氮源为考察因素,通过正交实验考察了正突变株的最佳降解工艺,得到其最佳的降解条件为pH 7.0,温度30℃,无机氮源(NH_4)_2SO_4。同时,经过传代实验,zt-10的正突变株的遗传稳定性最好,而对于代号为zt-4和zt-5的正突变株,定期筛选和复壮是必要的。 对降解菌株WH22进行基因文库的构建,提取得到了符合构库要求的基因组DNA,有较高的纯度与浓度,呈典型的核酸吸收特征。通过梯度浓度酶切得到的最佳酶切体系,以pUC19质粒DNA为连接载体,经处理得到了连接需要的线性DNA。但最后没有得到有效的转化子。
【学位授予单位】:浙江工业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:X172

【引证文献】
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【参考文献】
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