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《浙江工业大学》 2002年
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应用原生质体融合技术选育核黄素高产菌

陆海鹏  
【摘要】: 核黄素(维生素B_2),是细胞中氧化还原型辅酶FMN与FAD的组成部分,常见于天然食物中。微生物发酵法生产的核黄素,广泛用于医药、食品、及饲料添加剂中。 对一株产核黄素的假丝酵母IO进行紫外线诱变并分别用含过量铁离子、发酵残液、核黄素生物合成途径中的前体结构类似物的培养基筛选抗性突变株。①菌株IO经诱变后,筛得抗高浓度铁离子的突变株F52,产量提高114%。②以F52为出发株,筛选抗发酵残液突变株,得到比出发株核黄素产量提高106%的菌株0-100-1。⑧以0-100-1为出发株,筛选D-脱氧葡萄糖(葡萄糖的结构类似物)抗性突变株,得到了核黄素产量提高36%的菌株G-1000-R。④以G-1000-R为出发株,筛选杀结核菌素抗性突变株,得到了核黄素产量提高14%的菌株TL-6、产量提高12%的菌株TL-2。⑤经连续传代后,突变株TL-2的核黄素产量最高,比原始出发株10提高4.2倍。 用菌株TL-2进行固体发酵试验,结果表明:采用物料A加入10%的麸皮作为培养基,在28℃温度,良好通风,保持一定含水量的条件下,培养10天左右,核黄素的产量可达12937.5μg/g。 用0.2%β-巯基乙醇、预处理20分钟、用Lyticase水解细胞壁,原生质体形成率YI131为98.4%,TL-2为97.2%;再生率YI131为3.90%,TL-2为1.89%。用促融剂聚乙二醇(PEG)使经热灭活的亲株TL-2的原生质体与另一亲株酿酒酵母YI131(His~-)的原生质体融合,在不含His的再生培养基上获得融合子。其中融合株YT-3的核黄素产量比亲株TL-2提高了25%。 对《药典》中核黄素含量的分光光度测定法做了改进,使之适用于发酵液中核黄素含量的快速、简便测定。①将避光操作改为在光强为400~10001背景下操作。②将酸溶法改为水溶法。结果表明改进方法测量结果的相对标准偏差在可接受的范围内。
【学位授予单位】:浙江工业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:Q939.9

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【引证文献】
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【参考文献】
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【共引文献】
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中国硕士学位论文全文数据库 前10条
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【同被引文献】
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中国硕士学位论文全文数据库 前1条
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【二级引证文献】
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1 张大为;张洁;洪磊东;金磊;高健;梁芳;;利用原生质体融合技术构建梨酒酵母工程菌[J];食品工业科技;2013年01期
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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中国硕士学位论文全文数据库 前10条
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9 王秀霞;膜技术在发酵法生产核黄素中的应用[D];中国地质大学;2004年
10 赵炜;利用原生质体技术选育聚β羟基丁酸高产菌株和发酵条件的研究[D];西北大学;2004年
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