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《浙江农林大学》 2012年
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具有杀松材线虫活性的苏云金芽孢杆菌cry基因的克隆

刘娟  
【摘要】:化学农药在防治农业有害生物方面的应用效果显著,但是由于化学农药的过量使用,环境问题也随之产生。生物农药以其独显的高效低毒的特点,将在农业病虫害防治中得到越来越广泛的应用。苏云金芽孢杆菌制剂是目前研究最为深入,应用最为广泛的生物农药。其产物的结晶伴胞晶体蛋白对磷翅目、半翅目昆虫具有特异的毒杀效果。挖掘我国丰富的Bt资源,筛选出更多具有杀虫活性的Bt菌,分离克隆其编码杀虫蛋白的基因,对构建Bt工程菌,培育转Bt的抗虫植物具有深远的意义。 松材线虫是一种林业有害生物,对松树具有毁灭性的危害,它通过松墨天牛进行传播,松树一旦感染上松材线虫,将在很短的时间内死亡。目前,对松材线虫的防治主要是针对其媒介昆虫松墨天牛来进行的,主要以化学防治为主,直接针对松材线虫进行防治难度较大,国内外研究的较少。本实验室从环境中分离出80株苏云金芽孢杆菌,初步筛选出8株对松材线虫具有毒杀作用的菌株,进一步提取这8株菌株的伴孢晶体蛋白,对松材线虫进行毒力测定,最后筛选出一株对松材线虫具有最强毒杀活性的菌株,命名为ZJFC85菌株。 已经知道对松材线虫具有毒杀活性的是ZJFC85菌株编码产生的伴孢晶体蛋白,为了能为培育出抗松材线虫病的松树树种提供遗产材料,本实验室将克隆出ZJFC85菌株中能编码产生的伴孢晶体蛋白cry基因。通过查阅文献,设计9对cry基因保守区域的引物,以ZJFC85菌株质粒DNA为模板进行PCR扩展,扩增出一段保守区域序列cry1,对cry1基因进行克隆,克隆产物送出测序,测序结果分析该菌株含有cry1Aa基因,设计cry1Aa基因的特异性引物,PCR扩增得到cry1Aa基因的全长基因,对cry1基因的全长基因进行克隆,得到我们需要的遗产材料。
【学位授予单位】:浙江农林大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:S767.9

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