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《浙江农林大学》 2014年
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黄连汤抗鸭疫里氏杆菌内毒素的活性成分初步分析

蒋昭君  
【摘要】:鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer, RA)是一种革兰氏阴性短杆菌,引起鸭疫里默氏杆菌病,多种禽类对该病易感,对养殖业的发展也是一个巨大的威胁。RA的血清型众多,且各血清型间缺乏交叉保护能力,因而免疫预防效果不佳。抗生素类药物对该病具有一定的治疗效果,但畜禽易产生耐药性。中药对RA的防治效果良好,无耐药性,无药物残留问题。RA的主要致病因子是内毒素(Lipopolysaccharide,LPS)。前期研究筛选出由黄连、黄柏、甘草按一定比例配伍而成的黄连汤水煎剂对RA的体内外拮抗作用均有良好效果。本论文选用系统溶剂法对黄连汤进行化学部位分离,综合比较黄连汤各化学部位的抗LPS作用效果。 取黄连、黄柏、甘草,按1:1:2比例配伍,采用水提醇沉法,获得含生药浓度为174.0g/L的黄连汤水提部位。根据此药液倍比稀释,配成含生药87×20、87×2-1、87×2-2、87×2-3、87×2-4、87×2-5、87×2-6、85.7×2-7、87×2-8、87×2-9g/L等10个浓度的黄连汤水提部位稀释液。 采用药敏纸片法和试管体外抑菌法研究黄连汤水提部位体外抗RA的效果。取上述制备的黄连汤水提部位药液各200μL制备药敏纸片。药敏纸片结果显示88×2-5g/L以上稀释度组无抑菌圈,88×20g/L组的抑菌圈最大,半径达约1.1cm。试管法显示87×2-1g/L浓度药物组的菌液最清亮。EeCrd药液的体外抗RA效果明显。 取各浓度EeCrd药液200μL与10μL从RA用酚水法提取的LPS在恒温振荡培养箱中,37℃、200r/min,孵育11h后,用显色基质鲎试剂法进行检测,观察EeCrd药液的抗LPS效果。结果显示,随着药物浓度的增加LPS的破坏量增多。药物浓度为87×2-1g/L的组别,LPS几乎被全部破坏。 取黄连汤水提醇沉部位依次用正己烷、乙酸乙酯、水饱和正丁醇微波萃取,减压浓缩至干得正己烷萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物三个不同极性部位,稀释成1、0.5、0.25mg/mL溶液。取各萃取物各稀释浓度药液200μL与10μL LPS在恒温振荡培养箱中,37℃、200r/min,孵育11h后,用显色基质鲎试剂法进行检测,观察黄连汤各不同极性部位的抗LPS效果。结果表明黄连汤乙酸乙酯部位具有良好的体外抗内毒素活性。 对三个萃取部位的薄层色谱生物活性成分检识,结果显示乙酸乙酯部位含有大量的黄酮类物质,和少量的生物碱和蒽醌类物质。
【学位授予单位】:浙江农林大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2014
【分类号】:S852.61

【参考文献】
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