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《浙江农林大学》 2017年
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IBDV基因组dsRNA与宿主细胞RNA结合蛋白Staufen1互作调控IBDV复制及其机制

于朝丽  
【摘要】:IBDV属于双RNA病毒科,禽双RNA病毒属,是传染性法氏囊病(IBD)的病原体。IBD是一种急性、高度传染性疾病,可以导致青年鸡法氏囊出现炎症、萎缩,还会引起严重的免疫抑制。宿主细胞蛋白Staufen1(Stau1)属于双链RNA结合蛋白家族的一员,参与mRNA的转运、翻译以及降解。除此之外,还参与某些RNA病毒的生命周期。本文研究了Stau1蛋白与非己的IBDV基因组dsRNA相互作用调控IBDV的复制,并探究了其分子机制。为了研究鸡源Stau1蛋白与IBDV基因组dsRNA之间的关系,本研究首先克隆了鸡Stau1基因,构建真核表达载体以及相关的原核表达载体。本文采用IBDV dsRNA pull-down实验、凝胶迁移实验以及质谱鉴定来研究Stau1蛋白与IBDV基因组dsRNA是否相互作用以及Stau1与dsRNA结合的具体结构区域。利用间接免疫荧光反应探究了Stau1蛋白与IBDV基因组dsRNA在细胞中的共定位情况。我们通过建立IBDV细胞感染模型,利用RNA干扰技术、蚀斑实验以及RT-PCR实验研究了Stau1蛋白对IBDV复制的影响。另外利用荧光素酶报告基因系统,研究了Stau1对IBDV基因组dsRNA诱导产生IFN-β的影响。采用IBDV基因组dsRNA pull-down实验,比较了VP3、MDA5、Stau1与IBDV基因组dsRNA的亲和力。结果:(1)无论在体外还是在体内,鸡源Stau1蛋白都可以直接与IBDV基因组dsRNA相互结合,并在细胞中发生共定位,且N-端1-468个氨基酸负责Stau1结合dsRNA的功能;(2)下调Stau1蛋白的表达,可以抑制后期IBDV病毒复制,而Stau1上调表达则可以促进IBDV病毒复制;(3)下调Stau1表达会选择性的促进IBDV dsRNA诱导产生的IFN-β的表达,而对IFN-α没有影响;(4)Stau1可以通过结合IBDV dsRNA来抑制感染IBDV诱导的IFN-β的产生;(5)Stau1与MDA5竞争性结合IBDV dsRNA,来抑制IBDV诱导产生的IFN-β,并且病毒蛋白VP3与鸡Stau1协同发挥抑制IFN-β产生的作用。结论:本研究首次发现鸡Stau1蛋白可以与IBDV dsRNA相互作用,并可以通过与MDA5竞争结合dsRNA,来抑制IBDV诱导产生的IFN-β,并且病毒蛋白VP3与鸡Stau1协同发挥抑制IFN-β产生的作用,从而达到促进IBDV复制的目的。本次研究促进我们对IBDV致病和免疫机制的认知,为防控IBD提供新的思路。
【学位授予单位】:浙江农林大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:S852.65

【参考文献】
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