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《浙江农林大学》 2017年
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唾液中猪伪狂犬病毒荧光定量PCR和ELISA检测方法的建立与初步应用

位玉玲  
【摘要】:伪狂犬病(Pseudorabies desease,PR)是由伪狂犬病病毒(PRV)引起的危害家畜以及多种野生动物的一种以发热、奇痒和急性脑脊髓炎等为典型神经症状的急性传染病。猪伪狂犬病呈现典型的潜伏感染,任何年龄的耐过猪,均能形成潜伏感染,病毒在猪体内终生潜伏,在一定条件下潜伏的病毒可以激活,引起复发性感染并向外散毒,这种机制导致伪狂犬病很难根除,每年给养猪业造成了巨大损失。临床采集的猪唾液是一种唾液和黏膜渗出液的混合物,包含来自血清和唾液腺的抗体。由于采集简单、费用低廉,用唾液进行猪场疫病监测得到越来越多的应用。本研究旨在以改进猪群检测样品的采集为突破口,开发猪群伪狂犬病毒病原-抗体唾液检测技术,以期更好地服务临床生产。研究首次建立了利用猪唾液对PRV病原及其特异性抗体进行实验室检测的方法。其中,实时荧光定量PCR方法可有效的区分PRV野毒株和疫苗株,其特异性强、重复性好、灵敏性高,gB基因的检测灵敏度为1.49 copies/μL,gE基因的检测灵敏度1.46×101copies/μL。建立的间接ELISA方法,可有效地检测猪唾液中gB抗体及由野毒诱导的gE抗体。为进一步验证建立的唾液中PRV实验室检测方法的可行性,自2015年9月至2016年9月,从浙江某已知免疫背景的规模猪场,分3次采集样本,每次采集不同日龄商品猪以栏为单位的唾液与对应血清样本,并以横截面为模型,均通过检测两种体液中PRV的病原和抗体水平,对比分析病毒感染及抗体消长规律。3个临床案例的分析结果提示,利用唾液进行PRV病原及抗体检测的灵敏性比血清低,但PRV特异性抗体在唾液与血清中的消长规律基本一致,且唾液样本检测可以用于PR的早期诊断。研究证明建立的检测唾液中PRV病原及相应抗体的荧光定量PCR和间接ELISA方法具有实验室可行性。并通过临床案例分析力证了唾液作为采集样本进行实验室检测及临床免疫监控的潜力,也进一步为研究猪群唾液检测系统,提供了前期临床调查数据和依据。
【学位授予单位】:浙江农林大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:S852.65

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