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《浙江中医药大学》 2010年
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败酱有效部位PHEB抗肿瘤作用及其作用机理的研究

李娜  
【摘要】:目的 ①从败酱中分离纯化得到抗肿瘤的有效部位PHEB,并明确其成分组成。 ②通过体内外抗肿瘤实验,明确PHEB的抗肿瘤作用。 ③考察PHEB诱导肿瘤细胞凋亡,探讨其抗肿瘤作用的机理。 方法 ①采用硅胶柱层析分离制备PHEB,并采用薄层层析(TLC)和高效液相色谱法(HPLC)分析PHEB的化学组成。②采用MTT比色法,结合生长曲线以及集落形成实验考察PHEB对MCF-7、COLO-205、PC-3、SGC-7901、HepG2、C6、NB4和B16肿瘤细胞的体外增殖抑制能力。③采用S-180肉瘤和H-22肝癌荷瘤小鼠模型,观察PHEB对各模型小鼠移植瘤抑制作用。④通过倒置显微镜观察细胞的凋亡现象;AO染色荧光显微镜观察凋亡小体的形成;流式细胞术(FCM)检测各组细胞周期变化及细胞凋亡,进一步明确PHEB诱导PC-3细胞调亡的作用。 结果 ①从败酱醇提物中分离精制得到PHEB78g (4.0‰)。 ②MTT比色法表明PHEB对人源乳腺癌细胞MCF-7、人白血病癌细胞NB4、人前列腺癌细胞PC-3、人结肠癌细胞COLO-205、人胃癌细胞SGC-7901和人肝癌细胞HepG2;鼠源小鼠黑色素瘤细胞B16和大鼠脑胶质瘤细胞C6肿瘤细胞均有明显的抑制作用,IC50分别为3.47±0.5、8.40±0.5、10.0±0.4、12.3±0.9、13.9±1.3、24.7±2.6、33.5±3.7、41.2±3.5μg/ml,且具有明显的量-效关系;细胞生长曲线结果表明PHEB对COLO-205、SGC-7901肿瘤细胞的作用随着给药浓度的增加而增强,且在一定的剂量范围内随着给药时间的延长,其对两种肿瘤细胞的抑制作用增强,说明具有一定的量-效和时-效关系;克隆形成实验结果表明:随着PHEB浓度的增高,其抗肿瘤作用增强,亦呈一定的量-效关系。 ③PHEB给药组对小鼠移植性S-180肉瘤和H-22肝癌瘤的抑制率随着给药浓度的升高而增加,有一定的量-效关系。60mg/kgPHEB剂量组腹腔注射(ip)给药对小鼠移植性S-180肉瘤和H-22肝癌抑瘤率分别为53.6±4.9%和57.2±2.9%,与对照组比较差异有显著性意义(P0.01),表明PHEB对小鼠移植性肿瘤有一定的抑制作用。 ④倒置显微镜观察到PHEB能使细胞密度明显降低,细胞浆固缩,体积缩小,细胞皱缩,部分悬浮,细胞碎片增多;吖啶橙(AO)染色荧光显微镜观察形态,镜下可见:PC-3肿瘤细胞在经PHEB作用后,可见明显的核断裂和核固缩,还有凋亡小体的形成,同时揭示,随着PHEB给药浓度的增加,凋亡的形态学特征愈发明显;FCM结果显示:PHEB可以诱导人前列腺细胞PC-3的凋亡,40μg/mlPHEB作用8h后AnnexinV单阳性即开始增多,至32h, AnnexinV及PI双阳性即坏死细胞也开始增多。随着药物浓度的提高,各组凋亡细胞所占比例也随之升高。且流式细胞术和荧光染色的结果保持一致。 结论 ①PHEB体外对多种肿瘤细胞均有抑制作用,并有一定的细胞选择性。 ②PHEB对小鼠移植性肿瘤S-180肉瘤和肝癌H-22均有明显抑制作用。 ③在本研究中通过倒置显微镜发现随着给药浓度的升高,细胞凋亡数明显增多;通过荧光显微镜观察到PHEB可诱发PC-3肿瘤细胞的凋亡发生,通过吖啶橙(AO)荧光染色显示,PHEB诱发人前列腺癌细胞凋亡的形态特征是导致瘤细胞核断裂和核固缩,以及在瘤细胞内有凋亡小体形成;FCM观察到PHEB诱导PC-3肿瘤细胞凋亡作用呈时间、剂量依赖。
【学位授予单位】:浙江中医药大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R285

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