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急性肠损伤大鼠体内Ghrelin及受体的表达和电针干预作用的关联

吴建浓  
【摘要】:目的探讨急性肠损伤大鼠体内Ghrelin及其受体的表达以及电针足三里穴的干预作用。 方法①建立大鼠急性肠损伤(ABI)动物模型通过盲肠结扎穿孔术导致的腹腔感染来诱发急性肠损伤。将32只Wistar雄性大鼠分为两个实验组:急性肠损伤组(CLP组)和假手术对照组(Sham组),各16只。CLP组采用盲肠结扎穿孔术(CLP)的方法建立,取正中切口开腹,暴露盲肠并结扎根部,用16号针贯通穿刺盲肠4次形成肠瘘,再逐层缝合腹壁切口;假手术对照组以相同的方式暴露盲肠后回纳并缝合腹壁切口,并不行盲肠结扎和穿孔。于术后12h麻醉下留取血样本后处死,留取肠组织,测定大鼠血清TNF-α、HMGB1和肠组织含水率、肠组织髓过氧化物酶(MPO)活性和二胺氧化酶(DAO)活性,肠组织的大体及镜下病理组织学变化来确定ABI的形成。②急性肠损伤大鼠体内ghrelin及其受体的表达和电针足三里穴干预作用的关联将48只Wistar大鼠随机分为:假手术对照组(Sham组)、急性肠损伤组(CLP组)、电针治疗组(CLP+EA组)及ghrelin受体阻断剂组(CLP+GHSRA+EA组),每组各12只。假手术对照组取腹正中切口、暴露盲肠后回纳、缝合腹腔切口,急性肠损伤组采用盲肠结扎穿孔术(CLP)的方法建立,电针治疗组于建立大鼠ABI模型后取双侧足三里穴电针仪持续针刺30min, ghrelin受体阻断剂组于建立大鼠ABI模型后在尾静脉注射ghrelin受体阻断剂[D-Arg1, D-Phe5, D-Trp7.9,Leu11] substance P、再行双侧足三里穴电针仪持续针刺30min。于术后12h麻醉下留取血样本后处死,留取肠组织。测定血清ghrelin、TNF-α、HMGB1和肠组织含水率、肠组织髓过氧化物酶(MPO)活性和二胺氧化酶(DAO)活性,并通过western blot测定肠组织ghrelin及其受体、HMGB1蛋白表达,免疫组化测定肠组织ghrelin及其受体阳性的细胞数。 结果①CLP组肠组织结构明显破坏,肠组织含水率和病理评分明显高于假手术对照组(P0.05)。与Sham组相比,ABI模型组血清TNF-α、HMGB1两者均较对照组高,有统计学意义(P0.05)。CLP组肠组织含水率和髓过氧化物酶(MPO)活性明显高于Sham组、而肠组织二胺氧化酶(DAO)活性则低于Sham组,两者有统计学意义(P0.05)。②CLP组血清ghrelin水平、肠组织ghrelin阳性细胞数和蛋白表达量均低于Sham组(P0.05),肠组织ghrelin受体蛋白表达量在CLP组明显低于假手术对照组,有统计学意义(P0.05)。③CLP+EA组血清TNF-α、HMGB1水平以及肠组织MPO活性均较CLP组低,而肠组织DAO活性则高于CLP组,均有统计学意义(P0.05),与CLP组相比,CLP+EA组肠组织含水率和病理评分均有下降(P0.05)。④CLP+EA组血清ghrelin水平、肠组织ghrelin阳性细胞数和蛋白表达量均高于CLP组(P0.05),与CLP组相比,CLP+EA组肠组织ghrelin受体蛋白表达量明显升高,有统计学意义(P0.05)。⑤CLP+GHSRA+EA组血清TNF-α、HMGB1水平以及肠组织MPO活性均较CLP+EA组高,而肠组织DAO活性则低于CLP+EA组,均有统计学意义(P0.05),与CLP+EA相比,CLP+GHSRA+EA组肠组织含水率和病理评分均升高(P0.05)。⑥血液中Ghrelin水平和血清HMGB1水平呈负相关(r=-0.664,p0.001),血液中Ghrelin水平和肠组织DAO活性呈负相关(r=-0.423,p=0.003,血液中Ghrelin水平和肠组织MPO活性呈负相关(r=-0.404,p=0.004)。 结论①盲肠结扎穿孔术能诱发大鼠急性肠损伤模型。②急性肠损伤大鼠体内Ghrelin及其受体的血清水平和肠组织蛋白表达是下降的。③电针足三里穴能抑制急性肠损伤大鼠体内促炎因子(TNF-α、HMGB1)产生和改善肠粘膜屏障功能。④电针足三里穴能促进急性肠损伤大鼠体内Ghrelin的分泌和肠组织Ghrelin受体的表达。⑤Ghrelin受体阻断后,电针足三里穴就失去对急性肠损伤的保护作用,说明电针足三里穴对急性肠损伤的影响与大鼠体内Ghrelin及其受体的作用有关。


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