石斛AP2/EREBP转录因子的基因克隆与功能初步分析

【摘要】：石斛属(Dendrobium)植物是兰科的附生植物,它是我国传统的名贵中药材,并且它还具有较高的观赏价值。AP2/EREBP家族转录因子是一类非常重要的转录因子,该家族成员都含有1-2个高度保守的AP2/EREBP结构域,与植物的生长发育和胁迫应答密切相关。本研究从石斛文库中筛选得到3条AP2/EREBP家族转录因子cDNA,分别命名为TEREB5、JEREB1和AP1,其中本文的主体研究对象为TEREB5。根据TEREB5已知的序列信息设计特异引物,运用5'RACE法克隆得到长度为265bp的5’端序列,拼接得到完整序列。序列分析表明,TEREB5具有一个558bp的开放阅读框,编码186个氨基酸残基,含有一个AP2/EREBP保守结构域,其序列经Blast软件进行同源性分析,发现该转录因子基因与葡萄的ERF7基因(XM-002282279.1)、大豆ERF5基因(HQ896930.1)和拟南芥ERF9基因(NC_003076.8)分别具有81%、78%和75%的同源性。因此TEREB5属于ERF亚族转录因子基因。采用Gateway法构建TEREB5的超表达和RNA干涉载体,并分别转化拟南芥,利用Barstar和Genotyping对T,和T2代拟南芥进行筛选获得阳性植株。阳性植株的表型产生变化,RNAi拟南芥植株体积增大,叶柄变长,叶片变大,叶形较圆；超表达拟南芥植株体积缩小,叶柄变短,叶柄与叶片的分界较为模糊,叶形呈细长状,推测TEREB5可能在拟南芥的生长发育中起到一个负调控的作用。RNAi拟南芥的叶绿素含量高于野生型拟南芥,而超表达拟南芥的叶绿素含量又略低于野生型拟南芥,猜测TEREB5可能对叶绿素合成有影响,并且可能对叶绿素合成有一定的抑制作用。通过Real-time PCR分析,TEREB5的超表达会导致拟南芥同源基因ERF9的表达量出现一定程度的降低,推断TEREB5可能与同源基因ERF9存在功能互补。在RNAi拟南芥植株中TEREB5的表达会导致拟南芥同源基因ERF9的表达量出现明显降低,说明TEREB5能够明显干涉拟南芥同源基因ERF9的表达。

【学位授予单位】：杭州师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：S567.239

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前1条

1	马鑫;苎麻花发育相关AP2/ERF类基因的初步研究[D];湖南农业大学;2017年

	【参考文献】
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前9条

1	张利;范明才;冯喜文;刘兴勇;魏然;;铁皮石斛中石斛多糖与石斛碱的纤维素酶法提取研究[J];化学研究与应用;2011年03期
2	张明;刘宏源;;药用石斛产业的发展现状及前景[J];中国现代中药;2010年10期
3	邹成勇;刘燕;;我国石斛属植物研究进展[J];安徽农业科学;2010年12期
4	;Cloning and Expression Analysis of an AP2/ERF Gene and Its Responses to Phytohormones and Abiotic Stresses in Rice[J];Rice Science;2010年01期
5	庄静;陈建民;彭日荷;高峰;朱波;付晓燕;熊爱生;姚泉洪;;一个小麦AP2/ERF转录因子家族单独亚族基因的克隆及分析[J];麦类作物学报;2009年05期
6	王伟;黄为昌;金荷仙;陈香波;;观赏石斛兰研究进展[J];安徽农业科学;2009年02期
7	;Arabidopsis RAV1 is down-regulated by brassinosteroid and may act as a negative regulator during plant development[J];Cell Research;2004年01期
8	;Structure and regulatory function of plant transcription factors[J];Chinese Science Bulletin;2001年04期
9	张明,夏鸿西,朱利泉,张玉进;石斛组织培养研究进展[J];中国中药杂志;2000年06期

	【共引文献】
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4	魏海超;刘媛;豆明珠;杨素欣;冯献忠;;大豆AP2/ERF基因家族的分子进化分析[J];植物生理学报;2015年10期
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7	谢吉容;陈媛;;铁皮石斛菌根研究进展[J];重庆文理学院学报;2015年05期
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9	赵金玲;姚文静;王升级;姜廷波;周博如;;杨树AP2/ERF转录因子家族生物信息学分析[J];东北林业大学学报;2015年10期
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1	薛丽君;苎麻性别分化相关基因的克隆、表达及遗传转化研究[D];湖南农业大学;2015年
2	吴惠俐;毛竹AP2/ERF基因家族分析及DREB类转录因子表达研究[D];中国林业科学研究院;2015年
3	王霁龙;疏水性处理改善苎麻纤维与聚丙烯树脂界面性能的研究[D];东华大学;2015年
4	周精华;苎麻bZIP转录因子基因的克隆、表达和亚细胞定位及遗传转化[D];湖南农业大学;2013年
5	刘文进;柽柳乙烯响应因子ThERF1基因应答高盐胁迫的调控机理[D];东北林业大学;2013年
6	王瑜;石斛AP2/EREBP转录因子的基因克隆与功能初步分析[D];杭州师范大学;2012年

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前10条

1	陈蕤;;石斛多糖提取工艺的研究[J];中国医药导报;2010年12期
2	王伟;黄为昌;金荷仙;陈香波;;观赏石斛兰研究进展[J];安徽农业科学;2009年02期
3	郑斯卓;葛小军;李小琼;金徽;唐彦萍;;金钗石斛多糖含量测定条件和提取工艺的优化[J];中华中医药学刊;2008年12期
4	王再花;朱根发;欧孟昌;王碧青;;植物生长调节剂促进春石斛提前开花效果研究[J];广东农业科学;2008年10期
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10	黄丽云;李杰;周焕起;马子龙;;药用石斛产业现状及其在海南的发展前景[J];中国热带农业;2007年02期

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1	谢永丽;;一类植物中特有的转录因子——AP2/EREBP转录因子家族[J];青海师范大学学报(自然科学版);2006年03期
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5	杜磊;张德春;邓治;刘向红;李德军;;巴西橡胶树一个AP2/EREBP转录因子的克隆及表达分析[J];植物生理学报;2013年11期
6	赵利锋;柴团耀;;AP2/EREBP转录因子在植物发育和胁迫应答中的作用[J];植物学通报;2008年01期
7	韩志萍;安利佳;侯和胜;;AP2/EREBP转录因子的结构与功能[J];中国农学通报;2006年03期
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10	李洁;植物转录因子与基因调控[J];生物学通报;2004年03期

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1	易可可;吴忠长;周洁;吴运荣;吴平;;植物耐低磷转录因子研究[A];中国植物生理学会全国学术年会暨成立40周年庆祝大会学术论文摘要汇编[C];2003年
2	金肆;;基于ELISA技术的转录因子检测方法[A];新观点新学说学术沙龙文集23：新药发现——寻找维护人类健康的武器[C];2008年
3	汪世臣;;拟南芥转录因子DREBs靶基因的计算预测[A];中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编（2004-2008）[C];2008年
4	卢志强;李根涛;张宥偲;;基于转录因子的靶向基因组法在药物安全评价中的应用[A];中国毒理学会第七次全国毒理学大会暨第八届湖北科技论坛论文集[C];2015年
5	张丽丽;宋云鹏;刘凯歌;龚繁荣;;番茄CBF1转录因子提高拟南芥抗性[A];第七届长三角园艺论坛论文集[C];2016年
6	陈明生;;水稻和拟南芥转录因子的全基因组比较分析[A];中国遗传学会植物遗传与基因组学专业委员会2005年学术研讨会论文摘要集[C];2005年
7	史庆玲;张飞;王启磊;周强;梁晓杰;李彦伟;薛晓静;张洋;邓飞;马智燕;董永彬;李玉玲;;玉米AP2/EREBP类转录因子ZmERF的克隆和表达分析[A];2012年全国玉米遗传育种学术研讨会暨新品种展示观摩会论文及摘要集[C];2012年
8	朱红文;;转录因子FosB在尼古丁成瘾中的作用[A];科技、工程与经济社会协调发展——中国科协第五届青年学术年会论文集[C];2004年
9	姜智;邹士涛;管思琪;吴士良;;转录因子c-jun对β3GnT8基因转录调控机制的初探[A];第七届全国医学生物化学与分子生物学和第四届全国临床应用生物化学与分子生物学联合学术研讨会暨医学生化分会会员代表大会论文集[C];2011年
10	魏海明;田志刚;;转录因子对Th1/Th2分化的调控作用[A];第七届全国肿瘤生物治疗学术会议论文集[C];2001年

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1	记者张盖伦;植物应答干旱胁迫新路径揭示[N];科技日报;2017年
2	白毅;UXT蛋白可增强转录因子NF—κB活性[N];中国医药报;2007年
3	记者宋喜群通讯员刘晓倩张发起;发现调控杨树抗病性关键转录因子[N];光明日报;2015年
4	记者杨艳鹏李继洪;龙陵县：生态石斛种植助力绿色扶贫[N];云南日报;2019年
5	本报记者谢大强;村民致富村貌变美石斛“种出”幸福路[N];海口日报;2019年
6	记者计思佳孙慧;特色小镇为啥特？石斛“嫁接”互联网[N];海南日报;2018年
7	陆英王定春;麻栗坡：石斛产业有“斛”同享[N];云南经济日报;2019年
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9	本报记者张钰斌实习生陈思莹;从“补镬仔”到“石斛王”[N];玉林日报;2017年
10	本报记者鲁宽;石斛：龙陵生态特色产业的脱贫样本[N];云南经济日报;2018年

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1	段梅;脂锚定转录因子MfNACsa响应干旱胁迫的分子机制研究[D];中国农业大学;2016年
2	吴波;Desulfovibrio vulgaris Hildenborough的销酸盐适应机制及抗压全局转录因子功能研究[D];华中农业大学;2016年
3	潘阳露;番茄转录因子SlbZIP38响应干旱和高盐胁迫的功能研究[D];西南大学;2018年
4	赵盼盼;番茄R2R3MYB转录因子家族鉴定及SlMYB41和SlMYB64基因功能研究[D];山东农业大学;2017年
5	周泉;小鼠组织器官及NCI60癌症细胞系转录因子蛋白质组学研究[D];军事科学院;2018年
6	何莉;转录因子CTCF的功能研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2004年
7	王雪根;以转录因子为靶的抗肿瘤药物DECOY寡聚核苷酸研究[D];南京工业大学;2003年
8	张洪博;ERF转录因子TSRF1的功能分析[D];中国农业大学;2005年
9	于新凤;转录因子c-Jun/AP-1对食管鳞癌分化相关基因转录调控机理研究[D];中国协和医科大学;2006年
10	周洁;水稻低磷胁迫相关转录因子OsPHR1和OsPHR2的功能研究[D];浙江大学;2007年

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1	王瑜;石斛AP2/EREBP转录因子的基因克隆与功能初步分析[D];杭州师范大学;2012年
2	周翰林;水稻AP2/EREBP型转录因子的克隆与功能的初步研究[D];四川农业大学;2008年
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6	贾树芹;用Real-time方法筛选及验证水稻AP2/EREBP转录因子家族中可能抗虫的基因[D];曲阜师范大学;2014年
7	王金萍;长穗偃麦草中一个AP2/EREBP类转录因子的克隆[D];河北农业大学;2009年
8	卢合均;棉花AP2/EREBP基因家族的全基因组分析[D];中国农业科学院;2014年
9	边金艳;拟南芥一具亮氨酸拉链的转录因子的功能研究与表达分析[D];山东师范大学;2008年
10	周婵;‘雪梅’低温响应MYB转录因子的克隆、表达和功能分析[D];华中农业大学;2016年

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