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《杭州师范大学》 2012年
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石斛AP2/EREBP转录因子的基因克隆与功能初步分析

王瑜  
【摘要】:石斛属(Dendrobium)植物是兰科的附生植物,它是我国传统的名贵中药材,并且它还具有较高的观赏价值。AP2/EREBP家族转录因子是一类非常重要的转录因子,该家族成员都含有1-2个高度保守的AP2/EREBP结构域,与植物的生长发育和胁迫应答密切相关。 本研究从石斛文库中筛选得到3条AP2/EREBP家族转录因子cDNA,分别命名为TEREB5、JEREB1和AP1,其中本文的主体研究对象为TEREB5。根据TEREB5已知的序列信息设计特异引物,运用5'RACE法克隆得到长度为265bp的5’端序列,拼接得到完整序列。序列分析表明,TEREB5具有一个558bp的开放阅读框,编码186个氨基酸残基,含有一个AP2/EREBP保守结构域,其序列经Blast软件进行同源性分析,发现该转录因子基因与葡萄的ERF7基因(XM-002282279.1)、大豆ERF5基因(HQ896930.1)和拟南芥ERF9基因(NC_003076.8)分别具有81%、78%和75%的同源性。因此TEREB5属于ERF亚族转录因子基因。采用Gateway法构建TEREB5的超表达和RNA干涉载体,并分别转化拟南芥,利用Barstar和Genotyping对T,和T2代拟南芥进行筛选获得阳性植株。阳性植株的表型产生变化,RNAi拟南芥植株体积增大,叶柄变长,叶片变大,叶形较圆;超表达拟南芥植株体积缩小,叶柄变短,叶柄与叶片的分界较为模糊,叶形呈细长状,推测TEREB5可能在拟南芥的生长发育中起到一个负调控的作用。RNAi拟南芥的叶绿素含量高于野生型拟南芥,而超表达拟南芥的叶绿素含量又略低于野生型拟南芥,猜测TEREB5可能对叶绿素合成有影响,并且可能对叶绿素合成有一定的抑制作用。通过Real-time PCR分析,TEREB5的超表达会导致拟南芥同源基因ERF9的表达量出现一定程度的降低,推断TEREB5可能与同源基因ERF9存在功能互补。在RNAi拟南芥植株中TEREB5的表达会导致拟南芥同源基因ERF9的表达量出现明显降低,说明TEREB5能够明显干涉拟南芥同源基因ERF9的表达。
【学位授予单位】:杭州师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:S567.239

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【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前9条
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【同被引文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前6条
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