收藏本站
《浙江工商大学》 2011年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

硒的分析方法及泥鳅含硒蛋白的初步研究

徐庆兵  
【摘要】:硒是人和动物体必需的微量元素之一,具有多种重要生理功能。我国一些地区早先发生的克山病和大骨节病就是由于当地居民长期摄硒不足而导致的。硒的有益性和致毒性之间的浓度界限很窄,建立灵敏度高、准确可靠的硒元素分析方法具有重要的现实意义。硒在动物体内主要通过与蛋白结合的形式来发挥它的功能性,分析鉴定含硒的蛋白可以使我们更好地了解硒对人体健康的影响机理。 本文建立了微波消解-氢化物原子荧光光谱法(MD-HG-AFS)和微波消解-电感耦合等离子体质谱法(MD-ICP-MS)两种硒含量分析方法,并对其进行了比较分析。两种方法在各自定量限上均能获得准确可靠的分析结果。MD-HG-AFS法样品处理相对繁琐,工作效率低,但在在试验成本上占据一定优势,利于普及推广。MD-ICP-MS法所需仪器昂贵,但样品制备简便快速,线性范围宽,检测灵敏度比前者高约20倍,分析速度快,适于大批量样品的多元素高通量分析。 在硒元素的形态分析上,建立了在线分离测定硒代胱氨酸(Se-Cys)和硒代蛋氨酸(Se-Met)的液相色谱-电感耦合等离子质谱法(LC-ICP-MS)和液相色谱-电喷雾串联质谱法(LC-ESI-MS-MS). LC-ICP-MS法中,Se-Cys和Se-Met在1-100μg/L均线性良好,两者的检出限分别为0.576μg/L和0.839μg/L,精密度试验中RSD值10%,该方法能够满足快速检测Se-Cys和Se-Met含量的要求;LC-ESI-MS-MS法在优化条件下Se-Cys(定量子离子为248.1)和Se-Met(定量子离子为181.1)在2-100μg/L均线性良好,检出限分别为0.92μg/L和0.95μg/L。两种方法都能够应用于硒元素的形态分析,但前者在实际样品分析中基质干扰小,适于定量分析,而后者的定性分析则更加可靠,还可用于鉴定未知的含硒化合物,两种方法优势互补。 水产品中含有丰富的硒,采用已建立的分析方法对23种水产品中的硒含量进行了分析,最终以泥鳅为研究对象进一步分析。采用顺序提取法,依次对泥鳅肌肉中的水溶性蛋白、盐溶性蛋白、醇溶性蛋白和碱溶性蛋白进行了提取。结果未提到醇溶性蛋白,其它三者含量的相对百分比依次为碱溶性蛋白(63.27%)水溶性蛋白(24.44%)盐溶性蛋白(12.29%)。粗蛋白的分离纯化研究对比了两种阴离子交换填料(DEAE-Sephacel和DEAE sepharose FF),最终选用DEAE-Sephacel对粗蛋白提取物进行了初步分离纯化。经分离,从水溶性蛋白得到了W-1、W-2等六种蛋白组分;碱溶性蛋白分离得到了A-1、A-2等四个蛋白组分。采用SDS-PAGE分析,结果显示提取得到的蛋白样品分子量集中于4.1-66 kDa。由水溶性蛋白收集的六个组分中,W-5和W-6相对较纯,分子量分别处于35 kDa和20 kDa附近。W-1和W-2、W-3和W-4的分离效果欠佳,分别含有共同的蛋白组分。 硒在不同蛋白组分中分布情况的研究表明,三种蛋白粗提物中均含有一定的硒含量,含硒量依次为水溶性蛋白(1.866μg/g)碱溶性蛋白(1.801μg/g)盐溶性蛋白(1.607μg/g);结合各蛋白粗提物的提取得率,可知蛋白硒占总硒的57.62%,可见硒在泥鳅肌肉中主要以与蛋白结合的形式存在,其中水溶性蛋白的W-4组分硒含量最高,为1.278μg/g。硒在泥鳅蛋白中的赋存形态研究中,对样品的水解条件进行了优化,证实酶解处理蛋白样品效果均好于盐酸水解,几种酶解方式中Ⅻ(胰蛋白酶+风味蛋白酶)的酶解效果最好。将LC-ICP-MS法和LC-ESI-MS-MS法结合分析证实,Se-Met是硒在所有蛋白样品中的唯一赋存形态。 采用胶内酶解处理、基质辅助激光解吸飞行时间串联质谱分析方式对硒含量相对较高的水溶性蛋白组分W-4进行了分析鉴定。检索结果表明,匹配度较高的三种蛋白均属于肌肉组织中肌酸激酶。
【学位授予单位】:浙江工商大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R341

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 孙雅茹;刘春兰;裴蔼丽;黄本立;徐林;安汝国;姜鸿志;;ICP发射光谱法对氮化钛和钛材体内埋置试验有关生物样品中钛的测定[J];分析化学;1983年12期
2 陈杭亭,曹淑琴,曾宪津;电感耦合等离子体质谱方法在生物样品分析中的应用[J];分析化学;2001年05期
3 喻宏伟;陈春英;高愈希;李柏;柴之芳;;高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法分析生物样品中硒的化学形态[J];分析化学;2006年06期
4 杨莉丽,张德强,高英,苑春刚,张艳欣,孙汉文;氢化物发生-原子荧光光谱法测定中草药中的硒[J];光谱学与光谱分析;2003年02期
5 黄国清;肖仔君;;HG-AFS测定辣木中的Se[J];光谱学与光谱分析;2007年02期
6 杜明;赵镭;赵广华;胡小松;;生物样品中微量硒测定方法的进展[J];理化检验(化学分册);2007年09期
7 武晋孝;赵平伟;;微波消解-原子荧光光谱法测定饲料中硒[J];中国农业科技导报;2008年S2期
8 黄峙,向军俭,郭宝江;硒蛋白的分子生物学研究进展[J];生物化学与生物物理进展;2001年05期
9 阮新;耿金培;王晓洁;杨立红;曹鹏;;豌豆粉丝中硒含量的测定[J];食品科学;2008年11期
10 Juris MEIJA,Maria MONTES-BAYN,Joseph A CARUSO,Danika L LEDUC,Norman TERRY;Speciation of Volatile Selenium Species in Plants Using Gas Chromatography/Inductively Coupled Plasma Mass Spectrometry[J];色谱;2004年01期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王辰;刘芳;;酶法水解螺旋藻蛋白研究[J];安徽农业科学;2008年31期
2 陈永波;薛仁梅;马作江;向常青;王尔惠;刘二喜;;硒的检测技术研究进展[J];氨基酸和生物资源;2010年02期
3 田敏爵;李好;;富硒猴头菌中含硒蛋白提取工艺研究[J];现代农业科技;2010年19期
4 谷小伟;陈健;朱孔岳;;氢化物原子荧光法测定大米中硒的含量[J];现代农业科技;2011年06期
5 吕伟明;张洁;龚伟达;;ICP-MS测定地表水中多个元素的分析方法研究[J];环境科学与管理;2009年04期
6 吴丽萍,李楠,徐科,朱彬,刘哲;茶叶中痕量硒的测定[J];北京联合大学学报(自然科学版);2005年03期
7 蒲云霞;吴刚;;高效液相色谱-电感耦合等离子质谱联用技术在硒化学种态研究中的进展[J];包头医学院学报;2008年05期
8 姜延国,张兆瑞,张光早,张屹立;原子荧光光谱法测定灵芝孢子粉中硒含量[J];丹东纺专学报;2005年02期
9 田俊梅;张丁;付瑞娟;张锐;何伟;;大豆硒蛋白与亚硒酸钠生物利用的比较研究[J];大豆科学;2010年03期
10 吕苑苑;许荣华;赵平;谢烈文;李禾;;利用MC-ICPMS对水样中硼同位素比值的测定[J];地球化学;2008年01期
中国重要会议论文全文数据库 前9条
1 吴小勇;张湛;苏政权;;富硒灵芝液体发酵培养工艺及产物特性初探[A];“食品加工与安全”学术研讨会暨2010年广东省食品学会年会论文集[C];2010年
2 施宏景;梁凤霞;;富硒酵母类保健食品中有机硒测定方法研究[A];2009年卫生检验新技术学术研讨会会刊[C];2009年
3 刘雅琼;诸洪达;解清;王耐芬;刘海涛;刘虎生;王京宇;;ICP-AES测定中国成年男子肝脏中8种微量元素[A];国产科学仪器应用、创新和产业化学术研讨会论文集(一)[C];2007年
4 Emmie Dumont;Rita Cornelis;Pat Sandra;;Combining liquid chromatography with elemental and molecular mass spectrometry for the analysis of Se-compounds in natural products[A];Proceedings of Dalian International Symposia and Exhibition on Chromatography[C];2007年
5 于晓斌;李晓丽;魏丽丹;刘景华;;浅析硒的测定方法[A];中国微量元素科学研究会学术研讨会论文集[C];2004年
6 陈世焱;和振云;;电感耦合等离子质谱法测定光学玻璃中的稀土元素[A];甘肃省化学会第二十七届年会暨第九届甘肃省中学化学教学经验交流会论文摘要集[C];2011年
7 苏子鹏;叶剑芝;杨春亮;静玮;;溶液酸度对ICP-MS测定大米中镉和铜的影响[A];农产品质量安全与现代农业发展专家论坛论文集[C];2011年
8 叶剑芝;苏子鹏;杨春亮;查玉兵;林玲;韩志萍;;微波消解-ICP-MS法测定果蔬罐头中的锡、铅、砷[A];农产品质量安全与现代农业发展专家论坛论文集[C];2011年
9 展海军;沈小凯;赵贝贝;;富硒食品中硒的测定[A];河南省化学会2010年学术年会论文摘要集[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 高运川;大气颗粒物中溴和碘的浓度特征及来源[D];华东理工大学;2011年
2 刘希光;海蜇的化学组成及其生物活性研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2004年
3 赵洪进;富硒麦芽对二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌的影响及其机制研究[D];南京农业大学;2005年
4 周继昌;稳定性同位素评价彝、藏族成年男子代表性膳食中铁、锌吸收率及膳食影响因素[D];四川大学;2005年
5 胡圣虹;电感耦合等离子体质谱及其联用技术基础理论与地质应用研究[D];中国地质大学;2004年
6 胡兆初;有机基体改进溶液和激光剥蚀进样电感耦合等离子体质谱在大陆地壳疑难元素丰度研究中的应用[D];西北大学;2006年
7 铁梅;食用菌中硒的形态分析[D];华东师范大学;2006年
8 李彦萍;乌桕类可可脂氧化稳定性机理的研究[D];南昌大学;2002年
9 孙卫东;动物尿石症的临床和试验研究[D];南京农业大学;2006年
10 王蕾;DMT1腺病毒表达载体的构建和功能研究[D];青岛大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 田俊梅;低硒大鼠对三种硒强化剂生物利用效果的比较[D];郑州大学;2010年
2 任红英;纳米Si-HAP分离富集—原子吸收法测定痕量铅、铬、镉的研究与应用[D];湘潭大学;2010年
3 李改云;纳米SiO_2分离富集—原子吸收法测定环境水样中痕量银和钯的研究[D];湘潭大学;2010年
4 惠力;质谱式海水污染物快速测量系统的研究[D];中国海洋大学;2010年
5 宋世丘;烟草样品中微量金属元素含量测定及模式识别研究[D];郑州轻工业大学;2010年
6 胡兆初;有机介质中元素的电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)行为特性研究[D];中国地质大学;2003年
7 唐巧玉;大豆中硒的生理生化及其含硒蛋白的初步分离[D];湖南农业大学;2004年
8 曾艳;柱分离富集/等离子体质谱痕量元素及形态分析[D];武汉大学;2004年
9 余景;极大和钝顶螺旋藻对Se(Ⅳ)的吸收和代谢[D];暨南大学;2004年
10 梁军;条斑紫菜光系统Ⅱ蛋白复合物的结构和功能在个体发育过程中的变化[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2004年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 郭晔;王军;张丽娟;;同位素稀释质谱法测定人血清中痕量硒[J];北京化工大学学报(自然科学版);2007年03期
2 朱世岭;;氢化物发生原子荧光谱法测定婴幼儿奶粉中硒[J];福建分析测试;2007年02期
3 黄本立;吴绍祖;王素文;袁甫;阎柏珍;;感耦等离子体光源的研究[J];分析化学;1980年05期
4 徐宝玲;;氢化物-原子荧光法测定硒时元素的干扰及其消除[J];分析化学;1985年01期
5 刘湘生;电感耦合等离子体质谱法测定稀土元素的状况与展望[J];分析化学;1995年10期
6 许卉,贺萍;催化动力学光度法测定海产品中痕量硒[J];分析化学;1999年05期
7 曹淑琴,陈杭亭,曾宪津;电感耦合等离子体质谱法测定生物样品中稀土元素[J];分析化学;1999年06期
8 孙亚莉,孙敏;等离子体质谱法测定珊瑚锶和钙[J];分析化学;2000年08期
9 申金山,李献锐,王昕;液相化学发光法测定微量硒[J];分析化学;2000年11期
10 贺萍,许卉,李静;双硫腙-四氯化碳萃取分光光度法测定海产品中痕量硒[J];分析化学;2000年11期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 ;泥鳅为我们的健康开路[J];农村.农业.农民(B版);2009年12期
2 叶朝兴,丁敬远,吴东昆,谢泉馨;活吞泥鳅治疗乙肝、肝硬化探源[J];中国民间疗法;1999年07期
3 叶青;;泥鳅变“土龙”[J];食品与健康;2000年07期
4 马帅;石头;;秋天泥鳅 水中人参[J];健康;2008年10期
5 邢湘臣;;“水中人参”——泥鳅[J];家庭中医药;2009年08期
6 回瑞华;侯冬岩;李红;刘俊会;华蕾;;野菊花中锗、硒的电感耦合等离子体-质谱法分析[J];鞍山师范学院学报;2007年04期
7 龙建波;;养生吃泥鳅养肾又补血[J];健康天地;2010年06期
8 张毅;;泥鳅为什么吹泡泡?[J];父母必读;1983年07期
9 ;生吃泥鳅,身体健康[J];剑南文学(经典阅读);2008年06期
10 谢娟平;吴星;;微波消解-氢化物发生-流动注射原子荧光光谱法测定犁头草等中药材不同部位的硒[J];光谱实验室;2010年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 孙晓萌;张志涛;王轶鹏;许强;;微波消解-原子荧光光谱法测定大蒜和富硒大蒜中硒含量[A];第十届中国化学会分析化学年会暨第十届全国原子光谱学术会议论文摘要集[C];2009年
2 程美琦;钱春燕;宋薇;;ICP-AES法测定富硒粉中硒的含量[A];中国化学会第六届全国微量元素研究和进展学术研讨会论文集[C];2004年
3 李满秀;王建伟;;微波消解-火焰原子吸收光谱法测定土壤中的锰铅铜铬[A];第十届中国化学会分析化学年会暨第十届全国原子光谱学术会议论文摘要集[C];2009年
4 邓义;辉永庆;龙素群;林涛;何小波;;微波消解-HG-AFS法分析空气中铅[A];2011中国环境科学学会学术年会论文集(第二卷)[C];2011年
5 姚射月;;微波消解石墨炉原子吸收法测定海洋鱼油中砷[A];第十届中国化学会分析化学年会暨第十届全国原子光谱学术会议论文摘要集[C];2009年
6 邓义;辉永庆;龙素群;林涛;何小波;;微波消解-氢化物发生原子荧光法分析空气中铅[A];中国化学会第27届学术年会第02分会场摘要集[C];2010年
7 吕雪飞;邓玉林;周群芳;;镉在雄性泥鳅体内的富集分布[A];全国生物医药色谱学术交流会(2010景德镇)论文集[C];2010年
8 吴九如;;微波消解法测定土壤中汞[A];首届信息获取与处理学术会议论文集[C];2003年
9 龚文杰;马建明;赵立达;;微波消解-石墨炉原子吸收法测定小海鲜产品中的铅和镉[A];浙江省第十九届农村卫生改革与发展学术会议大会论文集[C];2011年
10 杨旭日;徐灵均;范琴琴;何胜利;周瑛;;微波消解电感耦合等离子体质谱法测定畜禽饲料中的微量元素[A];第十届中国化学会分析化学年会暨第十届全国原子光谱学术会议论文摘要集[C];2009年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 丰南市东田庄乡政府;泥鳅为何养不好[N];河北科技报(农村版);2000年
2 祝新华;泥鳅大王“中国乔”[N];中华合作时报;2003年
3 汤志鸿;泥鳅食疗好[N];大众卫生报;2005年
4 祝新华 于建斌 刘乃光;“泥鳅经”念到了国外[N];人民日报;2005年
5 本报记者 沙默 黄瑚 报道组 翁旭欧;泥鳅翻出细浪,产业能否拉长?[N];温州日报;2010年
6 介明;泥鳅苗种的快速培育法[N];山西科技报;2004年
7 夏艳洁;稻田泥鳅起捕及注意事项[N];吉林农村报;2010年
8 本报驻东京记者 张超;日本“泥鳅内阁”争议中启程[N];法制日报;2011年
9 苏农;睢宁泥鳅种苗人工繁育喜获成功[N];江苏农业科技报;2010年
10 张路 张时;稻田精养泥鳅效益翻番[N];江苏农业科技报;2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 雷红灵;恩施碎米荠富硒生理生化及其含硒蛋白的研究[D];湖南农业大学;2010年
2 游丽君;泥鳅蛋白抗氧化肽的分离纯化及抗疲劳、抗癌功效研究[D];华南理工大学;2010年
3 夏晓华;两种泥鳅SoxE亚族和DMRT1基因的结构与功能分析[D];河南师范大学;2011年
4 张晨晓;泥鳅多糖的免疫调节和抗肿瘤作用机理[D];华中科技大学;2005年
5 周小云;湖北省多倍体泥鳅分布格局及泥鳅育种基础研究[D];华中农业大学;2009年
6 向天勇;恩施碎米荠的生物学特性及叶片含硒化合物研究[D];湖南农业大学;2006年
7 余芳;富硒绿茶功能成分的抗氧化和抗肿瘤作用及其机理研究[D];南京农业大学;2007年
8 杨海澜;妊娠期糖尿病的相关因素研究[D];山西医科大学;2008年
9 郑克岩;谷胱甘肽过氧化物酶的人工模拟及其抗肿瘤活性研究[D];吉林大学;2007年
10 潘翠玲;有机硒源在蛋鸡生产中的应用及其机理研究[D];南京农业大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 徐庆兵;硒的分析方法及泥鳅含硒蛋白的初步研究[D];浙江工商大学;2011年
2 高勤芬;煤及煤燃烧中痕量元素砷、溴、碘的分布研究[D];上海师范大学;2008年
3 周霄;同位素稀释质谱法测量脱脂奶粉中Zn和IMEP-6样品中Cu的含量[D];北京化工大学;2003年
4 唐弥娆;中药元素的测定及研究[D];浙江大学;2005年
5 刘冬莲;药用植物中重金属形态分析及其生境土壤重金属地球化学特征研究[D];中国地质大学(北京);2006年
6 崔俊莉;两种泥鳅中CYP19基因的克隆及表达分析[D];河南师范大学;2011年
7 孔德营;微波消解ICP-AES法在甘草、山药中重金属残留检测的应用研究[D];西南大学;2007年
8 张翼;黄酒中矿质元素的测定及研究[D];浙江大学;2008年
9 马军红;丹参中重金属含量的研究[D];天津大学;2007年
10 黄霞;安徽地区克氏原螯虾及其水体五种重金属污染评价[D];安徽农业大学;2009年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026