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《浙江工商大学》 2009年
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快速检测VP的丝网印刷电极酶免疫传感器研究

马超  
【摘要】: 电化学免疫传感器是一种集微生物学、免疫学、物理学、化学、信息学和电子技术等多学科相互渗透成长起来的新型先进技术,因其具有灵敏度高、特异性强、检测快速方便、可微型化、低成本和容易实现在线检测等优点,在医学、动物医学、环境和食品安全检测等多领域,成为有害微生物及其他有害因素快速检测的研究热点和发展前沿,具有广阔而良好的应用前景。但目前仍有支持电极的选择及修饰、抗原/抗体固定化技术是研究和开发免疫传感器最为关键和重要的工作,也是目前桎梏其发展的关键技术问题。 本论文以夏秋季节沿海地区引发食物中毒的首要病原菌——副溶血性弧菌作为实验模型,主要围绕以下几个方面开展了一些工作: 1壳聚糖-SiO_2杂化复合膜酶免疫传感器快速检测VP 为改善已有免疫传感器存在的关键技术问题——生物敏感元件的固定化方法及其生物活性的保持,采用溶胶-凝胶法制备了CS-SiO_2杂化复合膜,将辣根过氧化物酶标记副溶血性弧菌抗体(HRP-anti-VP)掺杂于该杂化复合膜中,制备副溶血性弧菌酶免疫电极。通过循环伏安法表征免疫电极和临测酶促反应,根据免疫反应前后还原峰电流下降的百分数(DP)来实现对VP的检测。在优化的免疫反应条件及电化学检测条件下,在10~4-10~9cfu/mL浓度范围内,免疫电极免疫反应前后还原峰电流下降的百分数(DP)与VP浓度C的对数呈线性关系,线性回归方程为DP=6.51gC-3.319,线性相关系数为0.9958,检测限为6.9×10~3cfu/mL(S/N=3)。该免疫电极具有较好的特异性、重现性(RSD6%)、稳定性(一周后电流响应为初始值的95%)和准确性(与GB/T4789.7-2003符合率96.7%)。因此,研制出的免疫传感器用于快速筛检VP效果良好。 2电沉积纳米金修饰4-SPCE电流型VP酶免疫传感器的研制 为改善免疫传感器的生物相容性和反应信号强度,采用恒电位沉积法将HAuCl_4直接还原成纳米金并修饰于四通道丝网印刷碳电极(4-SPCE)表面,优化选择了0.05g/L HAuCl_4浓度和30s电沉积时间为电沉积纳米金修饰4-SPCE的制备条件。利用静电吸附作用将辣根过氧化物酶标记副溶血性弧菌抗体(HRP-anti-VP)固定,制备副溶血性弧菌酶免疫电极。通过循环伏安法表征免疫电极和监测酶促反应,根据免疫反应前后还原峰电流下降的百分数(DP)来实现对VP的检测。在优化的免疫反应条件及电化学检测条件下,免疫电极线性检测范围为10~4-10~9cfu/mL,其线性回归方程为:DP=7.71gC-12.63,线性相关系数为0.9973(n=6),检测限为8.1×10~4cfu/mL(S/N=3)。该免疫电极具有较好的特异性、重现性(RSD6%)、稳定性(一周后电流响应为初始值的90%)和准确性(与GB/T 4789.7-2003符合率93.3%)。因此,研制出的免疫传感器用于快速筛检VP效果良好。 3基于戊二醛交联的4-SPCE电流型VP酶免疫传感器的研制 为了寻找一种简单、有效的固定抗体的方法来研制四通道丝网印刷碳电极(4-SPCE)免疫传感器,采用戊二醛交联法将辣根过氧化物酶标记副溶血性弧菌抗体(HRP-anti-VP)固定于4-SPCE表面,制备了副溶血性弧菌酶免疫电极。通过循环伏安法表征免疫电极和监测酶促反应,根据免疫反应前后还原峰电流下降的百分数(DP)来实现对VP的检测。在优化的免疫反应条件及电化学检测条件下,在10~3-10~9cfu/mL浓度范围内,免疫电极免疫反应前后还原峰电流下降的百分数(DP)与VP浓度C的对数呈线性关系,线性回归方程为DP=6.51gC-3.595,线性相关系数为0.9935,检测限为2.0×10~5cfu/mL(S/N=3)。该免疫电极具有较好的特异性、重现性(RSD6%)、稳定性(一周后电流响应为初始值的92%)和准确性(与GB/T 4789.7-2003符合率93.3%)。因此,研制出的免疫传感器用于快速筛检VP效果良好。
【学位授予单位】:浙江工商大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:TP212

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【引证文献】
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【参考文献】
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1 朱亚琦;电化学免疫传感器测定牛奶中残留青霉素的研究[D];首都师范大学;2007年
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