蜜环菌糖复合物的分离纯化、结构分析与生物活性的研究

【摘要】：本实验室对蜜环菌菌索发酵条件和胞内、胞外多糖的药效学已经有大量研究,本文以蜜环菌菌索胞内粗多糖AMG进一步纯化组分AMG-1B为研究对象,通过部分酸水解改造其化学结构,研究结构与生物活性的关系,从不同角度研究了其降血糖作用,由此探讨其降血糖活性的作用机理。内容包括:糖复合物AMG-1B的提取分离、纯化,理化性质,化学结构的改变及降血糖活性的研究。 1.糖复合物AMG-1B的提取分离、纯化 AMG的纯化路线:AMG粗提物→DEAE-纤维素柱色谱(cl~(-1)型)→SephadexG-75凝胶柱色谱→纯品AMG-1B。 AMG初步纯化采用离子交换层析法。选用阴离子交换纤维素DE-52(cl~(-1)型),洗脱剂为H_2O、NaCl 0.5mol/L,分离得到AMG-1和AMG-2。 AMG-1透析脱去小分子物质(分子量8000Da)后,经葡聚糖凝胶SephadexG-75进一步纯化得到AMG-1A和AMG-1B。分别采用Sepharose 4B凝胶柱层析、AKTA-purifier10快速层析纯化系统(FPLC)和聚丙烯酰胺圆盘电泳对AMG-1A和AMG-1B进行纯度鉴定,结果表明AMG-1B为均一组分。 2.理化性质和结构分析 对AMG-1A和AMG-1B进行定性分析:紫外扫描200nm～400nm,AMG-1A在260nm～280hm处有一小的吸收峰,AMG-1B几乎没有吸收;红外光谱结果表明,AMG-1B在4000cm~(-1)～650cm~(-1)区具有多糖类物质的一般特征,同时在980cm~(-1)、920cm~(-1)附近有皂苷的特征吸收峰。对二者组成成分定量分析:测定了蛋白质、多糖、糖醛酸、皂苷含量。用气相色谱检测AMG-1A、AMG-1B的糖链组成,分析得AMG-1A的糖链部分由D-鼠李糖,D-岩藻糖,D-阿拉伯糖,D-甘露糖,D-葡萄