收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

酿酒酵母蛋白Prp20p以及人源锌指蛋白DESR1的结构与功能研究

吴芳明  
【摘要】: 在此论文中我们分别用X射线晶体学(X-ray crystallography)和核磁共振波谱学(NMR spectroscopy)的方法解析了酿酒酵母蛋白Prp20p的β-propeller结构域(β-propeller domain)以及人源锌指蛋白DESR1的三维结构。本论文将分三个章节来阐述。 第一章先介绍一下Prp20p所参与的核质输运这一重要的细胞生理过程的背景综述。在真核细胞中,核质的不同物质组成是由具有选择性和方向性的大分子的跨膜运输所维持的。核蛋白经由一类称为输入蛋白(importins)的核转运蛋白(karyopherins)运送至核内,而大半部分的RNA则通过输出蛋白(exportins)转运出核。这种运输的方向性是由RanGTP的梯度(核内是高浓度的RanGTP,而细胞溶质中则是低浓度的RanGTP)决定的。在胞质中缺乏RanGTP的情况下结合货物蛋白,然后在核质中随着RanGTP的结合而将货物蛋白释放。相反在核内,输出蛋白与RanGTP以及货物蛋白形成复合物,运送到胞质中之后随着GTP水解成GDP而解离。GTP的水解需要存在于细胞质中的RanGAP(Ran GTPase-activating protein)。反过来,GTP到GDP的交换是由鸟苷交换因子(GEF,在哺乳动物中是RCC1,在酿酒酵母中是Prp20p)所催化,它存在于核内并与染色质相结合。 第二章则将着重介绍Prp20p这一蛋白质的基本信息,然后是我们所用的实验方法以及随后所得到的实验结果。Prp20p是RCC1(Regulator of Chromosome Condensation 1)在酿酒酵母中的同源蛋白,它是小GTP酶Gsp1p(Ran在酿酒酵母中的同源蛋白)的鸟苷交换因子(guanine nucleotide exchange factor,GEF)。Prp20p主要由类RCC1结构域(RCC1-like domain,RLD)和N端的核定位信号序列(nuclear localization signal)所组成。Prp20p的类RCC1结构域为典型的七叶螺旋桨结构(seven bladesβ-propeller)。在这个结构中,我们发现一个额外的β-wedge,而且随后我们也证明了这个区域参与了Prp20p和Gsp1p的相互作用。然后我们构建了Prp20p-Gsp1p的复合物模型,并用分子动力学模拟(molecular dynamics simulations)进行了优化。此外,我们还研究了Prp20p的组蛋白结合特性,意外地发现其与RCC1的组蛋白结合特性有显著的区别。 第三章则介绍人源锌指蛋白DESR1的溶液结构研究。人源DESR1属于一个高度保守的CSL锌指蛋白家族(Pfam: PF05207)。DESR参与了翻译延伸因子2(translation elongation factor 2,eEF-2)的翻译后修饰的第一步过程,使第715位的组蛋白(H715,在酵母中是H699)生成白喉酰胺(diphthamide),这是ADP核糖基化(ribosylation)的靶位点。另外有实验证实了DESR1在鼠中对于胚胎和胎盘发育的重要性。我们用三维核磁共振波谱的方法解析了这个小蛋白的溶液结构。随后拿它跟其在鼠和酵母中的同源蛋白(mDESR1和KTI11)进行了结构比较,显示出结构的保守性以及些许的微小差异。最后讨论了这一类CSL锌指蛋白的分类问题。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 刘智,朱定尔,谢慎思,朱小湘,肖广惠,陈汉春;K562细胞中锌指蛋白cDNA基因片段的克隆[J];中国生物化学与分子生物学报;1996年01期
2 王兆,应康,林盛榕,吴海,谢毅,毛裕民;一条KRAB型锌指蛋白全长新基因的克隆与功能初探[J];遗传;2000年04期
3 鹿培源,贾弘褆;锌指蛋白对肌肉发育的调节[J];生命的化学;2001年06期
4 洪洋;宋冰;王丕武;王贺;;锌指蛋白结构及其功能研究[J];才智;2010年35期
5 黄仲贤,顾伟强,胡红雨;锌指类基因调控蛋白──生物无机化学和分子生物学发展的新领域[J];生物化学与生物物理进展;1995年03期
6 赵楠;赵飞;李玉花;;锌指蛋白结构及功能研究进展[J];生物技术通讯;2009年01期
7 欧阳石文;植物TFⅢA型锌指蛋白[J];生命的化学;2001年05期
8 夏放,杨泉胜,应康,戴建凉,顾少华,谢毅,毛裕民;锌指结构基因ZNF302序列的克隆与表达谱分析[J];复旦学报(自然科学版);2000年06期
9 林燕;周小秋;;锌与锌指蛋白对机体贫血的影响[J];动物营养学报;2006年02期
10 普燕,李琦涵;KRAB锌指蛋白的研究进展[J];生命的化学;2004年02期
11 吴海,戴建凉,吴超群,应康,谢毅,和桂芬,陈菊祥;一个新C_2H_2型锌指蛋白的功能的初步研究[J];复旦学报(自然科学版);2000年06期
12 苗健,颜世铭,熊丽萍;元素与代谢调控[J];广东微量元素科学;1999年04期
13 王俊英,尹伟伦,夏新莉;胡杨锌指蛋白基因克隆及其结构分析[J];遗传;2005年02期
14 李慧,李亦平,慈宏亮;编码锌指蛋白的人类新基因TFL76的电子克隆[J];生物技术;2003年06期
15 黄骥,张红生,曹雅君,王东,王建飞,杨金水;一个新的水稻C2H2型锌指蛋白cDNA的克隆与序列分析[J];南京农业大学学报;2002年02期
16 张艳君;梁淑媛;王跃群;吴秀山;;pCMV-BD-ZNF424和pCMV-Tag2-ZNF424缺失突变重组质粒的构建[J];生命科学研究;2006年S2期
17 夏放,祁震宇,戴建凉,顾少华,马良霄,谢毅,毛裕民;锌指结构基因HKR1在脑胶质瘤中的表达分析[J];复旦学报(自然科学版);2000年06期
18 黄骥,王建飞,张红生;植物C2H2型锌指蛋白的结构与功能[J];遗传;2004年03期
19 王晓霞;;CCCH型锌指蛋白的研究进展[J];武汉生物工程学院学报;2007年03期
20 王小兰,祝彩磊,祝莉莉,何光存;褐飞虱诱导的水稻cDNA文库的构建及锌指蛋白基因的分离[J];武汉植物学研究;2004年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 刘娟;刘威;李艳军;;一种人工限制性内切酶的设计与表达[A];第七届全国酶学学术讨论会论文摘要集[C];2004年
2 朱莲珍;;锌指蛋白[A];中国营养学会第七届微量元素营养学术会议论文摘要汇编[C];2001年
3 邓增钦;张琦;刘钊;陈忠周;;UHRF1结合甲基化组蛋白的结构研究[A];第十一次中国生物物理学术大会暨第九届全国会员代表大会摘要集[C];2009年
4 李刚;邰付菊;骆娟;郑勇;李学宝;;两个新的棉花基因在NaCl胁迫下的表达调控分析[A];基因开启未来:新时代的遗传学与科技进步——湖北省遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编[C];2009年
5 朱炎;董爱武;;植物组蛋白分子伴侣NRP二聚体的功能研究[A];第二届上海市植物生理学青年学术研讨会论文摘要集[C];2008年
6 赵志虎;张用书;杨淑静;崔立斌;张艳红;于秀琴;刘传喧;马清钧;;锌指蛋白的DNA识别特异性研究[A];面向21世纪的科技进步与社会经济发展(下册)[C];1999年
7 郑一超;徐瑞敏;吕文蕾;黄荟杰;李金凤;刘宏民;;组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶1的生物学意义及原核表达[A];2011年中国药学大会暨第11届中国药师周论文集[C];2011年
8 刘俊;高立;孟运莲;李文鑫;;锌指蛋白ZNF268的表达与小鼠卵泡的发育[A];解剖学杂志——中国解剖学会2002年年会文摘汇编[C];2002年
9 韩昱晨;李墨;韩艳玲;刘俊;吴非;;MT1h与EHMT1结合调节组蛋白H3K9甲基化抑制细胞周期及运动[A];中华医学会病理学分会2010年学术年会日程及论文汇编[C];2010年
10 田春艳;张令强;贺福初;;新型KRAB型锌指蛋白分子KRANA的功能研究[A];中国细胞生物学学会2005年学术大会、青年学术研讨会论文摘要集[C];2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 吴芳明;酿酒酵母蛋白Prp20p以及人源锌指蛋白DESR1的结构与功能研究[D];中国科学技术大学;2010年
2 黄鸿达;组蛋白分子伴侣Rtt106以及人的Brd2蛋白结构与生物学功能研究[D];中国科学技术大学;2010年
3 戴津泼;RA诱导P19细胞神经分化中组蛋白去甲基酶Jmjd3对Mash1基因表达的调控作用[D];中国协和医科大学;2010年
4 郭大玮;自体乙酰化诱饵蛋白酵母双杂合筛选体系的建立[D];山西医科大学;2004年
5 阮建彬;组蛋白甲基化位点结合结构域的结构与功能研究[D];中国科学技术大学;2012年
6 邱为民;小鼠znf230和人TCP11基因的克隆和功能研究[D];四川大学;2004年
7 邵阳光;可逆性组蛋白乙酰化修饰在人WT1基因转录调控中的作用及其分子机制研究[D];东北师范大学;2005年
8 翁樑;超嗜热古菌Pyrococcus horikoshii OT3组蛋白的克隆、表达、性质表征及其在基因治疗中的应用[D];吉林大学;2004年
9 陶丹;组蛋白乙酰化修饰对黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)hsp22基因的表达及寿命的影响[D];东北师范大学;2004年
10 庄晓蕾;水稻小G蛋白Arf GTPase激活蛋白OsAGAP功能研究[D];中国科学院研究生院(植物研究所);2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 杨力侠;人工锌指蛋白的筛选系统的构建及其在牛β酪蛋白基因上的应用[D];西北农林科技大学;2012年
2 邢丹;喹赛多相关锌指蛋白的表达调控与其调节基因的研究[D];华中农业大学;2012年
3 薛红;HMT家族新成员SET07生化特性及功能研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2004年
4 张巨擘;组蛋白去甲基化酶LSD1协同转录因子GATA2调控红白血病红系细胞分化的表观遗传机制的研究[D];吉林大学;2011年
5 徐凤芹;小鼠锌指蛋白ZNFD生物学功能初探及ZBTB9克隆表达[D];苏州大学;2011年
6 雷陈;C_2H_2型锌指蛋白--ZNFD的生物学功能初探[D];苏州大学;2010年
7 秦智慧;紫花苜蓿锌指蛋白MsZFN作用机制研究[D];重庆大学;2010年
8 杨泽;组蛋白H3K4去甲基化酶AOF1及其酶活性非依赖的转录抑制功能[D];华东师范大学;2010年
9 袁林;锌指蛋白Apak对p53选择性调控机制的研究[D];安徽医科大学;2012年
10 郭洪峰;特异上调HO-1基因表达的人工转录因子构建[D];第三军医大学;2009年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 秋信;英利用锌指蛋白控制基因发挥作用[N];中国医药报;2008年
2 医学院;清华教师揭示组蛋白甲基化密码“读体”识别新机制[N];新清华;2011年
3 肖鑫;肝脏蛋白基因研究获突破[N];解放军报;2008年
4 白毅;我国锌指抗病毒蛋白研究获进展[N];中国医药报;2008年
5 本报编辑部编译;改写基因 造福人类[N];中国经济导报;2005年
6 余志平;DNA甲基化和组蛋白尾段改变[N];中国医药报;2006年
7 文新;英科学家发明“基因开关”[N];医药经济报;2008年
8 肖鑫;调控甲胎蛋白基因表达分子被发现[N];中国医药报;2008年
9 记者 毛黎;科学家成功解开大量基因沉默之谜[N];科技日报;2008年
10 通讯员 肖鑫记者 陈青;解密甲胎蛋白精细调控机制[N];文汇报;2008年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978