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《合肥工业大学》 2007年
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大豆蛋白ACE抑制肽的酶法制备及分离纯化

张焱  
【摘要】: 由蛋白酶在温和条件下水解大豆蛋白而获得的大豆短肽可通过抑制血管紧张素转化酶(ACE)的活性而使血压降低,其食用安全性高,对高血压患者可以起到降压作用。 本文首先利用胰蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶和碱性蛋白酶水解大豆分离蛋白,进行大豆分离蛋白的酶解试验,预处理温度、反应时间、加酶量等因素均对酶解液水解度产生影响。五种蛋白酶单一及复合酶的大豆蛋白酶解产物对ACE活性有大小程度不同的抑制作用,对上清液进行ACE抑制活性测定,其中以碱性蛋白酶水解物的ACE抑制活性最高达到45%,胃蛋白酶次之,为40%。 采用截留分子量10K Da、3K Da、1K Da的超滤膜对大豆蛋白多酶水解液进行分级分离。不同蛋白酶解物配置相同浓度,样品分子量范围在1K Da以下的多肽混合物的含量分别为碱性蛋白酶和胃蛋白酶总水解物的71.25%和69.35%。不同分子量范围的水解物均对ACE活性有抑制作用,其ACE活性抑制程度随分子量的减小而增大。分子量范围在1K Da以下组分对ACE的抑制效果最高,其抑制率分别为64.57%和78.49%。胃蛋白酶水解物的<1K Da部分的ACE抑制率高于碱性蛋白酶,而中性蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶水解物<1K Da部分的ACE抑制率大致相当,且均小于胃蛋白酶和碱性蛋白酶。Tricine-SDS-PAGE电泳图谱表明,超滤分级效果明显,三分级组分在分子量上明显小于未水解的大豆蛋白,且三者的分子量分布呈现递减趋势。 对胃蛋白酶酶解大豆分离蛋白进行了正交优化实验,制备胃蛋白酶水解大豆蛋白ACE抑制肽的最佳水解条件为:底物浓度3%,加酶量2%,水解时间2小时,得到的最大水解度17.1%。PL1000在酸性条件下溶解性明显高于碱性条件下;溶解性随温度升高而逐渐提高。 经过凝胶色谱层析Superdex Peptide 10/300 GL、反相色谱层析Sephasil peptide 5μm C18 ST 46/250连续色谱分离技术,从大豆蛋白的胃蛋白酶水解物小于1K Da组分中分离出了ACE活性抑制肽P_D、P_J,其相应的IC_(50)值为0.714mg/ml,0.626mg/ml,但是电泳图谱无法确定其具体分子量。P_J的ACE抑制活性受pH值影响较大,经不同pH值缓冲液处理后,其ACE抑制活性损失程度不同,总体上酸性条件下损失大于碱性条件。P_J的ACE抑制活性在高温中具有优越的稳定性,经各种温度处理后,P_J的ACE抑制活性几乎没有损失,均保留了大于>90%的ACE抑制活性。
【学位授予单位】:合肥工业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:TS201

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