收藏本站
《安徽工程大学》 2010年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

漆酶高产菌株的选育及其酶学性质研究

王诗然  
【摘要】: 近年来,有关漆酶的研究已引起人们的广泛关注。漆酶(Laccase. EC.1.10.3.2)是一种含铜离子的多酚氧化酶,广泛分布于真菌特别是白腐菌中。漆酶可与多酚类和芳香二胺类等多种底物作用,因此广泛应用于工业生产的各领域中。本文以漆酶产生菌灵芝菌(Ganoderma lucidum)U60为出发菌,采用低能N+束注入技术诱变选育得到漆酶高产菌株UIM-281,并对菌株产酶条件、漆酶的纯化、酶学性质进行了研究。主要研究结果如下: 1、利用低能N+束注入技术对漆酶产生菌灵芝菌(Ganoderma lucidum)U60菌丝体进行辐照诱变。通过研究15 keV能量下不同注入剂量与灵芝菌存活率及突变率的生物学效应关系,确定了在2.6×1015~3.9×1015 ions/cm2注入剂量范围内可获得高比例正突变株。选择3:12×1015 ions/cm2的注入剂量参数后,经多轮注入诱变,获得了遗传性稳定的漆酶高产突株UIM-281;发酵产酶实验表明,UIM-281的产漆酶活力峰值分别是出发菌株U60的1.7倍及2.28倍,且产酶发酵周期相对缩短24 h,是工业发酵中更加经济高效的灵芝漆酶发酵菌株。 2、通过单因素试验和Plackett-Burman设计法,进行灵芝菌UIM-281发酵产漆酶培养基主要因子的筛选,得到玉米粉、麸皮和ABTS的质量浓度三个显著因素。最陡爬坡实验逼近以上三因素最优水平后,应用中心组合设计以及响应面分析,建立了以漆酶酶活为响应值的二次回归方程模型,得到最优发酵条件为:玉米粉17.56 g/L,麸皮17.91 g/L, ABTS 0.0274 g/L葡萄糖10 g/L,豆粉10 g/L, KH2PO4 4.5g/L,经验证,在此条件下,漆酶酶活为6325.3 U/L,比化学合成培养基漆酶产量提高了将近1.27倍,该研究为工业发酵产漆酶提供了理论依据。 3、首先采用Plackett-Burman(PB)设计法筛选出影响灵芝菌G. lucidumUIM-281发酵产漆酶的主效应因素为装液量、摇床转速和培养时间。最陡爬坡实验逼近以上三因素最优水平后,应用中心组合设计以及响应面分析,建立了以漆酶酶活为响应值的二次回归方程模型,得到最优发酵条件为:装液量52 mL,摇床转速158 r/min,培养时间172 h,温度28℃,接种量10%,初始pH5.5,种龄96h。上述条件下理论预测值8342.6U/L,验证实验测得酶活为8387.7U/L,与预测值接近,说明预测模型可靠性较高,可应用于漆酶发酵条件的优化。 4、对UIM-281所产粗酶液进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE),活性染色结果表明该漆酶无同工酶。通过35%-65%丙酮二级沉淀和微孔滤膜过滤进行纯化后,由SDS-PAGE测得漆酶的表观分子量约为46 KDa。漆酶酶学性质研究结果表明:该漆酶的最适反应温度为50℃,最适反应pH为6。在10℃和pH 4.8时保存具有最佳的稳定性;金属离子Mn2+、Ba2+、Mg2+、Ca2+、Fe2+和抑制剂巯基乙醇、十二烷基硫酸钠和叠氮化钠对酶都有不同程度的抑制作用,其中Fe2+,十二烷基硫酸钠和叠氮化钠表现出强烈的抑制作用,而Co2+和Cu2+对酶有明显的激活作用,Zn2+和Na+则对酶活的影响不大;米氏常数Km为1.552 mmol/L。
【学位授予单位】:安徽工程大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:Q93

手机知网App
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 慕娟;问清江;李叶昕;党永;;M-26碱性木聚糖酶的分离纯化及酶学性质研究[J];微生物学杂志;2011年03期
2 张波;殷燕;;一株嗜热菌木糖异构酶的纯化与性质研究[J];食品与发酵工业;2011年03期
3 于艳颖;董海莉;平文祥;葛菁萍;;米曲霉HDF-7蛋白酶的分离纯化及酶学性质研究[J];黑龙江大学工程学报;2011年02期
4 薛群;应向贤;杨池;汪钊;;荧光假单胞菌短链脱氢酶的克隆、表达及酶学性质分析[J];生物工程学报;2011年09期
5 邹由;付玲;江维;周玉玲;马立新;;毕赤酵母表达重组植酸酶酶学性质的比较研究[J];湖北大学学报(自然科学版);2011年02期
6 郑必胜;周萌;;裂褶菌产内切β-1,3-葡聚糖酶的特性研究[J];现代食品科技;2011年07期
7 马瑜;李勃;肖明;;蛋壳内膜分解菌的筛选、鉴定及其所产蛋白酶性质的初步研究[J];微生物学杂志;2011年03期
8 孙金鹏;钱圣一;敬科举;卢英华;;南极假丝酵母脂肪酶B在毕赤酵母的表达及酶学性质研究[J];厦门大学学报(自然科学版);2011年04期
9 严慧玲;蓝东明;王永华;杨博;;南极假丝酵母脂肪酶A的表面展示及酶学性质[J];微生物学通报;2011年07期
10 张美超;曹雅男;姚斌;周志刚;;高效表达N-乙酰高丝氨酸内酯酶-木聚糖酶融合蛋白及其酶学性质[J];微生物学报;2011年08期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 李洋;尹娇;王行国;;Klebsiella sp. 601细菌漆酶基因的克隆表达与酶学性质的研究[A];“环境与健康”学术研讨会论文摘要集[C];2007年
2 孙峥;许雷;;产漆酶细菌菌株的分离及基因克隆[A];中国生物化学与分子生物学会农业生物化学与分子生物学分会第八次学术研讨会论文集[C];2008年
3 孔祥菊;王智;王玉国;冯雁;曹淑桂;;脂肪酶工程菌的构建、表达、纯化及酶学性质的研究[A];中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集[C];2001年
4 胡长浩;施文芳;陈彦;刘燕雅;林琳;;脂肪酶菌种的筛选鉴定及部分酶学性质的研究[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2008年学术交流会论文摘要汇编[C];2008年
5 李艳丽;许尧兴;许少春;;碱性纤维素酶研究进展[A];浙江省生物化学与分子生物学学术交流会论文集[C];2005年
6 皮雄娥;费笛波;王龙英;冯观泉;袁超;;饲用酸性β-甘露聚糖酶酶学性质的研究[A];浙江省生物化学与分子生物学学术交流会论文集[C];2005年
7 李光伟;邱杨;詹少彤;兰敏;黄伟;周润华;冯小军;林涛;肖性龙;;微生物酯酶产生菌的选育、菌株Bacillus sp.EB-87产酶特性及酶学性质的研究[A];2006中国微生物学会第九次全国会员代表大会暨学术年会论文摘要集[C];2006年
8 陈建宏;赵建;曲音波;李雪芝;;Penicillium sp.ZCF57产木聚糖酶的纯化及性质研究[A];中国资源生物技术与糖工程学术研讨会论文集[C];2005年
9 李灵玲;张涛;余蓉;;可溶性固定化木瓜蛋白酶的制备及性质研究[A];2006年全国生化与生物技术药物学术年会论文集[C];2006年
10 陶毅明;安刚;龙敏南;陈清西;;曲霉Aspergillus glaucus内切葡聚糖酶的分离纯化及其性质的研究[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2008年学术交流会论文摘要汇编[C];2008年
中国重要报纸全文数据库 前3条
1 中国农科院生物技术研究所 张伟 博士;生产低聚半乳糖[N];中国食品质量报;2003年
2 本报记者 白锋哲;伍宁丰 用生物酶解毒国人餐桌[N];农民日报;2004年
3 中国农科院生物技术研究所 张伟 博士;新型乳糖酶的技术先进性[N];中国食品质量报;2003年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王志新;血红密孔菌的筛选、鉴定及其发酵产漆酶的研究[D];江南大学;2010年
2 赵丹;疣孢漆斑菌(Myrothecium verrucaria)NF-05漆酶的产生、特性及应用研究[D];东北林业大学;2012年
3 朱友双;杂色云芝液态和固态发酵产漆酶及离子液体对生物质预处理的研究[D];山东大学;2011年
4 张莉;白腐菌(Trametes pubescecs MB89)漆酶酶学性质及其对酚类化合物的降解特性研究[D];西北农林科技大学;2009年
5 张应龙;环境友好木质素降解新技术研究[D];山东大学;2012年
6 马林;嗜烟碱节杆菌烟碱脱氢酶性质及其在烟草加工中的应用研究[D];中国农业大学;2005年
7 丁长河;链霉菌高产木聚糖酶及其酶学性质的研究[D];中国农业大学;2003年
8 杨浩萌;来源于橄榄绿链霉菌A1的木聚糖酶XYNB的分子改良[D];中国农业科学院;2006年
9 冯冰;甾体皂苷生物转化及其特异性糖苷酶的研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2005年
10 范晓丹;新型纤溶酶得产生菌选育、发酵优化及酶学性质研究[D];华南理工大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 徐海涛;菌株B7和F4产木质素降解酶条件优化及酶学性质研究[D];吉林大学;2009年
2 赵玉良;灰树花漆酶高产菌株的发酵及其酶学性质研究[D];吉林农业大学;2008年
3 施晓燕;Phellinus sp. SYBC-L2固态发酵产漆酶条件的优化及其酶学性质的研究[D];江南大学;2008年
4 王诗然;漆酶高产菌株的选育及其酶学性质研究[D];安徽工程大学;2010年
5 王维乐;Paraconiothyrium variabile GHJ-4漆酶的发酵、分离纯化及其酶学性质的研究[D];山东农业大学;2011年
6 张田田;火红密孔菌发酵产漆酶培养基的优化、分离纯化及其应用的初步研究[D];吉林农业大学;2011年
7 赵亮亮;红芝发酵产漆酶及其在染料脱色中的应用研究[D];广西师范大学;2010年
8 张永辉;朱萁小菇漆酶发酵条件优化、酶学性质及脱色应用研究[D];福建农林大学;2012年
9 王伟华;聚β-羟基丁酸酯解聚酶发酵及酶性质研究[D];东北师范大学;2006年
10 嵇冶;枯草杆菌脂肪酶的定向进化[D];吉林大学;2006年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026