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《安徽农业大学》 2010年
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茶树离体增殖与再生体系的建立

雷樊登  
【摘要】: 本文以无性系品种茶树龙井-43腋芽为外植体,采用附加不同种类激素的MS培养基对其进行组织培养,系统地研究了腋芽离体培养的技术体系,初步探讨了影响腋芽培养的各种因素,初步建立了茶树离体增殖和再生体系。论文取得如下结果: (1)初代培养 腋芽初代培养采用1/2 MS为基本培养基,附加BA8.88μmo1-L~(-1)+IBA 0.49μmo1-L~(-1) IBA + GA_3 8.66μmo1-L~(-1)+蔗糖30 g-L~(-1)+琼脂7.0 g-L~(-1)。春季材料的外植体污染率、褐变率比秋季的低,腋芽萌发率比秋季的高;外植体留部分叶柄、接种前用2.0 g-L~(-1) PVP溶液浸泡30 min、接种后在8℃下避光培养16h可以有效降低外植体褐化率。春季材料、合适的外植体类型、培养温度及抗氧化剂的技术组合,有助于提高茶树腋芽初代培养的成功率。 (2)继代培养 龙井-43的最佳增殖条件是以1/2MS为基本培养基,添加0.05μmo1-L~(-1)或0.1μmo1-L~(-1)的TDZ,配合使用0.25或0.49μmo1-L~(-1)IBA,增殖倍数可以达到2.0以上。茶苗增殖倍数随着TDZ浓度的升高而降低,在含有TDZ的培养基中连续继代也不利于茶苗的增殖与伸长,茶苗在不添加任何植物生长调节剂培养基中能够良好地伸育。 (3)愈伤组织的诱导与再生 从茶树组培苗上取叶片与茎段接种于的1/2MS培养基上,植物生长调节剂为TDZ 0.1、0.5、1.0μmo1-L~(-1)与0、0.49、0.98、1.97μmo1-L~(-1) IBA的全组合。当TDZ 0.1μmo1-L~(-1)+ 0.49μmo1-L~(-1)时,对离体茎段和叶片愈伤组织的诱导效果最好,愈伤组织诱导率可达100%;单独使用0.1μmo1-L~(-1)TDZ也可诱导产生愈伤组织,但效果不及TDZ和IBA配合使用的效果,说明TDZ附加适量的IBA有利于愈伤组织的形成。当TDZ浓度大于0.5μmo1-L~(-1)时,不论是否添加IBA,离体茎段和叶片均未诱导出愈伤组织。以茶苗为外植体时,在所有的处理上,均可以从茶苗基部诱导出愈伤组织。 茎段和叶片在TDZ 0.1μmo1-L~(-1)+ 0.49μmo1-L~(-1) IBA培养基上诱导的愈伤组织在相同培养基上经过一次继代培养,取出愈伤组织转至新鲜的不同植物生长调节剂配比的器官分化培养基上,培养不同时间。离体茎段与叶片诱导出的愈伤组织在所有培养基上经过不同时间的培养均没有产生不定芽。来源于茶苗基部的愈伤组织在BA 8.88μmo1-L~(-1) + IBA 0.49μmo1-L~(-1)培养12周,愈伤组织再生率分别为52.6%。在不同的时间重复了4次,其再生率分别为67.4%、53.6%、45.3%、49.6%。说明茶苗茎段诱导出的愈伤组织的再生技术具有稳定性。 较小的再生芽不宜从愈伤组织上剪下单独培养,再生芽与愈伤组织一起培养有利于其成苗与生长,在1/2MS+ BA 8.88μmo1-L~(-1)+ IBA 0.49μmo1-L~(-1)培养基上培养6周,成苗率可以达到64.3%,且生长状况较好,叶片正常展开,叶绿苗壮。 (4)茶苗的生根与移栽 使用2450μmo1-L~(-1) IBA浸泡茶苗基部5min,诱导生根效果明显。诱导2周后就开始有茶苗生根,第6周生根率达到70.8%,茶苗平均根数3.8条,有44.6%的根长度大于1.5cm,茶苗基部无愈伤组织,根直接从茎上长出,有根毛。打开瓶盖,生根茶苗在室内进行炼苗7d。经炼苗后用镊子轻轻将茶苗取出,用自来水洗掉根部培养基,移栽至灭菌的基质中(营养土:蛭石=1:1),移栽后30d,茶苗成活率为63.6%。
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