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《安徽农业大学》 2010年
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猪诱导性多潜能干细胞的建立

殷慧群  
【摘要】: 猪诱导性多潜能干细胞的建立 诱导性多潜能干细胞(iPS细胞)是指通过在分化的体细胞中表达特定的转录因子来诱导其发生重编程而获得的可不断自我更新和具有多向分化潜能的细胞。iPS细胞技术的产生和发展,是干细胞领域乃至整个生物学领域的一项重大发现,具有广阔的应用前景。本研究旨在应用限定因子建立猪iPS细胞诱导技术,为将来深入研究应用猪iPS细胞奠定基础。论文由三个试验组成,其内容如下: 试验一:携带限定因子的慢病毒表达载体的构建 以胎猪原始生殖嵴和囊胚为材料,用RT-PCR方法克隆出猪Sox2、Klf4和c-Myc基因的开放阅读框序列,人OCT4基因序列直接从质粒pMX-hOCT4中扩增获取。经限制性内切酶酶切,与逆转录病毒载体pLEGFP-N1连接,分别构建出限定因子EGFP融合蛋白逆转录病毒表达载体。再从重组逆转录病毒载体中扩增出CMV启动子,限定因子和EGFP序列,同时通过酶切从pLL3.7质粒中移除U6启动子、CMV启动子和EGFP序列,最后把扩增出的CMV启动子,限定因子和EGFP序列与改造后的pLL3.7进行重组,分别构建出限定因子EGFP融合蛋白慢病毒表达载体pLL-hOCT4/pSox2/pKlf4/pMyc -EGFP。重组慢病毒载体质粒转染293T细胞后,在荧光显微镜下观察限定因子表达情况。结果显示,猪Sox2、Klf4和c-Myc基因开放阅读框序列分别与已发表的猪Sox2、Klf4和c-Myc基因序列高度同源;重组慢病毒载体质粒转染293T细胞后表现为限定因子EGFP融合蛋白定位于细胞核表达,符合限定因子表达特点。这些结果证实,本试验的限定因子EGFP融合蛋白慢病毒载体构建正确。 试验二:慢病毒载体法诱导猪iPS细胞 采用组织块培养法从57d胎龄的杜洛克-长白-大约克三元杂交猪胎儿分离培养建立7株猪胎儿成纤维细胞系。通过磷酸钙法转染四种限定因子EGFP融合蛋白慢病毒表达载体质粒和包装辅助质粒,包装产生的四种限定因子慢病毒经浓缩后感染猪胎儿成纤维细胞,在含1000U/mL LIF和4ng/mL bFGF的干细胞培养液培养条件下进行培养传代,逐步分离培养出集落边缘界限清晰的细胞克隆,高倍显微镜下集落中的单个细胞呈现细胞核较大,核质比例较高。按1∶4比例每3~4 d传代一次,细胞集落生长稳定,核型正常,AP检测为阳性,免疫细胞化学和RT-PCR检测有关键性多潜能相关基因Oct4和Nanog的表达。此外,细胞集落中SSEA-1蛋白表达检测阳性,SSEA-3/4和TRA-1-61/81检测阴性。将其注射到BALB/cA裸鼠背侧皮下可形成含有外胚层、中胚层和内胚层组织来源的畸胎瘤。以上结果证实,本试验所获得的猪的细胞克隆具有ES细胞样特征,即成功地从猪胎儿成纤维细胞诱导出iPS细胞。 试验三:纯化蛋白穿膜法诱导猪iPS细胞 由于慢病毒携带外源基因的随机稳定整合会带来潜在的细胞癌化畸变等危害,因此根据慢病毒介导外源限定因子EGFP融合蛋白的试验结果,构建携带细胞穿膜肽外源限定因子的融合蛋白用于猪iPS细胞的诱导,将会为猪iPS细胞的安全生产、应用奠定基础。将体外表达、纯化的携带有细胞穿膜肽——九聚精氨酸(R_9)的限定因子-R_9融合蛋白添加到培养的猪胎儿成纤维细胞培养液中尝试建立猪iPS细胞。结果显示,在荧光显微镜下可观察到限定因子-R_9原核蛋白能进入猪胎儿成纤维细胞,且蛋白能定位于细胞核;在干细胞培养液培养条件下同时用限定因子-R_9原核蛋白处理6个周期后,能逐渐分离培养出集落边缘界限清晰的细胞克隆,重构克隆中的单个细胞呈现细胞核较大,核质比例较高,AP为阳性,免疫细胞化学检测ES细胞特异性分子标记Oct4和Nanog蛋白表达阳性。这些结果证实本试验的限定因子-R_9原核蛋白表达载体构建正确;细胞穿膜肽R_9可转导限定因子重组蛋白进入细胞核;重组限定因子-R_9原核蛋白可使猪胎儿成纤维细胞发生重构,且重构细胞具有ES细胞样形态,可表达AP、Oct4和Nanog蛋白。 综合以上三个试验的研究结果,可以得出如下结论: 1.运用RT-PCR技术可以从胎猪的原始生殖嵴和囊胚细胞克隆出猪Sox2、Klf4和c-Myc限定因子基因的开放阅读框序列;用基因工程技术将这些限定因子基因序列(包括人Oct4基因序列)与逆转录病毒载体pLEGFP-N1连接,再进行基因重组,能成功地构建限定因子EGFP融合蛋白慢病毒表达载体。应用这些重组限定因子EGFP融合蛋白可有效追踪掌握限定因子在细胞重编程过程中的作用机制和特点。 2.用限定因子EGFP融合蛋白慢病毒能诱导猪胎儿成纤维细胞重编程,建立猪iPS细胞。通过限定因子EGFP融合蛋白追踪发现,外源限定因子在猪iPS细胞集落中大多数不表达或低水平表达,少数细胞高表达,提示体细胞完全重编程形成iPS细胞后外源基因不表达,不完全重编程的体细胞外源基因仍处于高表达状态;不同的猪胎儿成纤维细胞可能需要不同的时间去完成重编程进程,或者不同的细胞可能是在不同的时间点上启动重编程进程。 3.将携带有细胞穿膜肽——九聚精氨酸(R_9)的限定因子重组蛋白用于猪胎儿成纤维细胞的重编程,获得了具有ES细胞样形态、可表达AP、Oct4和Nanog蛋白的重构细胞,为建立诱导猪体细胞直接重编程的新方法提供了新的思路。 本论文的创新点:首次应用含有猪源性限定因子EGFP融合蛋白慢病毒成功建立猪iPS细胞。首次尝试应用限定因子重组蛋白直接重编程猪胎儿成纤维细胞。
【学位授予单位】:安徽农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:S828;Q813

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【引证文献】
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【参考文献】
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1 杨玉艾,华进联,窦忠英;绿色荧光蛋白在胚胎干细胞研究中的应用[J];草食家畜;2004年02期
2 ;The molecular mechanism of embryonic stem cell pluripotency and self-renewal[J];Science in China(Series C:Life Sciences);2007年05期
3 胡笳,郭燕婷,李艳梅;蛋白质翻译后修饰研究进展[J];科学通报;2005年11期
4 刘爽;段恩奎;;诱导产生多能性干细胞(iPS细胞)的研究进展[J];科学通报;2008年04期
5 成志军;陶勇;章孝荣;;胎猪卵巢发生过程中的组织学变化[J];细胞生物学杂志;2008年03期
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1 张卫琴;猪Sox2和Nanog慢病毒表达载体的构建[D];安徽农业大学;2009年
2 薛奕杰;猪慢病毒载体pLL-Myc和pLL-Klf4的构建[D];安徽农业大学;2009年
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1 陈兰英,赵桢,王晓涛,屈二军,陈建南;HSP70基因在人胃癌、食道癌及宫颈癌中高表达和癌变关系的研究[J];癌变.畸变.突变;2005年04期
2 程烽;盛燕;施静艺;陈漪;徐潮;刘智;梁军;潘春明;朱忠勇;宋怀东;;重叠延伸PCR法构建UGRP1基因启动子的点突变表达载体[J];癌变.畸变.突变;2007年01期
3 温居一;张积仁;李鹏;张军;王斌;;NADH对二乙基亚硝胺所致L02人肝细胞株p53基因突变和c-erbB2基因表达的影响[J];癌变.畸变.突变;2009年05期
4 金艺凤;李铁臣;王莹;刘东华;孙珍贵;;ERCC1和XPD单核苷酸多态性与非小细胞肺癌铂类化疗敏感性的关系[J];癌变·畸变·突变;2010年05期
5 王继英;武英;郭建凤;呼红梅;张印;;莱芜黑猪保种群促卵泡素β亚基和雌激素受体基因、基因型变化情况[J];山东农业科学;2007年01期
6 陈静;胡晓辉;苗华荣;张建成;禹山林;;花生SRAP-PCR技术体系的优化[J];山东农业科学;2008年05期
7 陈长宝;朱树华;周杰;;改良CTAB法提取成熟肥城桃果实的总RNA[J];山东农业科学;2009年05期
8 葛宏华,肖亚中,姚建平;人心室肌球蛋白轻链1基因的克隆及其体外的表达与纯化[J];安徽大学学报(自然科学版);2004年06期
9 侯新东;盛桂莲;张桦;腊萍;;质粒DNA提取方法的探讨[J];安徽农学通报;2006年13期
10 朱美霞,孟艳玲,陈良兵;大豆与棉花抗性基因类似物的同源性比较及其进化分析[J];安徽农业科学;2005年02期
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1 朱林;江昌俊;叶爱华;李叶云;余梅;邓威威;;茶树ATP硫化酶和硒半胱氨酸甲基转移酶基因植物表达载体的构建[A];现代农业理论与实践——安徽现代农业博士科技论坛论文集[C];2007年
2 王治国;袁耀明;;乳腺上皮细胞体外培养的研究进展[A];第三届中国奶牛发展大会论文集[C];2008年
3 徐波;张莉;李启云;王景会;姜媛媛;杨贞耐;;牛凝乳酶成熟肽基因在大肠杆菌中的表达[A];中国奶业协会年会论文集2008(下册)[C];2008年
4 刘冬光;廖娟红;于清龙;陈颖钰;陈焕春;郭爱珍;;融合蛋白Rv3872/CFP-10/ESAT-6的制备及在牛结核诊断中的初步应用[A];中国奶业协会年会论文集2009(上册)[C];2009年
5 郭勇;张西正;魏严;张永红;;新生大鼠心肌细胞的体外培养和工程化心肌组织的初步构建[A];第八届全国生物力学学术会议论文集[C];2006年
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8 李玫;廖宝文;;红树林湿地烷烃降解菌的分离筛选[A];第十三届中国科协年会第16分会场-沿海生态建设与城乡人居环境学术研讨会论文集[C];2011年
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1 岳奎忠,陈新,孙兴参,李子义,朱赫,卞志明,谭景和;猪卵巢体外保存温度对卵母细胞染色质构型和成熟能力的影响[J];动物学报;2005年05期
2 文端成,陈大元;2n/4n嵌合体胚胎的发育特点及其应用[J];动物学研究;2002年03期
3 文端成,戴丽军,黄莉,韦永芳,陈大元;卵裂球电融合方法制作小鼠多倍体胚胎[J];广州医学院学报;2003年01期
4 张立苹;王亚刚;李莉;刘西梅;乔宪凤;许生成;;成熟液中不同添加物对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎发育的影响[J];湖北农业科学;2009年10期
5 王红玲,刘铁铮,邢光东;血清及血清替代品对体外受精的影响[J];黑龙江动物繁殖;2004年04期
6 毛晶;李钟淑;蔡文莲;胡艳明;祖晶;王士勇;方南洙;;聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮和牛血清白蛋白对牛卵母细胞成熟及体细胞克隆胚胎发育的影响[J];黑龙江畜牧兽医;2008年10期
7 周俊波;唐修君;丁志丽;曹访;王杏龙;;L-谷氨酰胺、BSA对家兔卵母细胞体外受精及受精卵体外发育的影响[J];黑龙江畜牧兽医;2009年01期
8 罗虎;李泽桂;;诱导多能干细胞建系过程中关键转录因子的作用[J];基础医学与临床;2011年04期
9 蔡世忠;李芳菲;王亚平;;转录因子Oct4、Nanog及相关调控网络与多能干细胞特性的维持[J];解剖科学进展;2011年01期
10 刘忠华,谭景和,贺桂馨;小鼠1-细胞胚胎体外培养条件的研究[J];解剖学报;1999年04期
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1 张运海;利用体细胞核移植技术生产猪克隆胚胎的研究[D];中国农业大学;2005年
2 潘登科;影响猪体细胞克隆胚胎发育能力的因素研究[D];中国农业大学;2005年
3 徐小明;胎猪骨髓间充质干细胞核移植及核移植胚胎干细胞的分离[D];西北农林科技大学;2006年
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1 刘立新;猪胚胎干细胞(EG)嵌合体制作研究[D];中国农业科学院;2003年
【二级参考文献】
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1 杨晓菁,姚红军,王玉凤;哺乳动物卵母细胞凋亡的研究进展[J];动物学杂志;2004年06期
2 刘素娟;哺乳动物卵泡发生及发育调控[J];黄牛杂志;1995年03期
3 何正文,刘运生,陈立华,曹美鸿,夏家辉;正交设计直观分析法优化PCR条件[J];湖南医科大学学报;1998年04期
4 张琦;忻珍桦;蔡引凤;高云霞;沙红英;刘思国;陈建泉;张爱民;成国祥;;人Sox2基因的克隆表达和纯化[J];华中师范大学学报(自然科学版);2008年01期
5 刘军,刘斌;人胎儿卵巢组织发生中的几个问题[J];解剖科学进展;1995年03期
6 刘爽;段恩奎;;诱导产生多能性干细胞(iPS细胞)的研究进展[J];科学通报;2008年04期
7 梁雪;粟永萍;孔佩艳;陈幸华;#彭贤贵;曾东风;徐辉;艾国平;;SDF-1慢病毒表达载体的构建和鉴定[J];免疫学杂志;2009年01期
8 钱慰,刘飞,朱俐 ,龚成新,金淑仪;蛋白质O-GlcNAc糖基化修饰对tau蛋白磷酸化修饰的影响[J];生物化学与生物物理进展;2003年04期
9 师伟,韩姝,李艳华,谢小燕,施双双,陈琳,白慈贤,闫舫,南雪,王韫芳,裴雪涛;Wnt3a转基因基质细胞的建立及其对脐血CD34~+造血干/祖细胞扩增作用的研究[J];生物化学与生物物理进展;2005年09期
10 陈艳玫,姚錱;转录因子Sox2的研究进展[J];生命科学;2004年03期
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1 李艳梅;罗施中;黄志平;陈永湘;赵玉芬;;利用MALDI-TOF鉴定蛋白质翻译后修饰位点的研究[A];中国蛋白质组学第二届学术大会论文摘要论文集[C];2004年
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1 曹贵方;山羊体形和卵巢发生及卵泡组织化学的研究[D];西北农业大学;1998年
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1 Akira Onishi,张贤群,潘雪男;利用胎儿成纤维细胞的核微注射技术培育克隆猪[J];国外畜牧科技;2001年03期
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3 黄奔,石德顺,蒙超衡,杨素芳;丝裂霉素C和γ射线对小鼠胎儿成纤维细胞饲养层制备的影响[J];中国兽医科技;2005年03期
4 丁国杰;王丹娜;柴华;任德强;;不同方法培养猪胎儿成纤维细胞的研究[J];畜牧兽医科技信息;2007年04期
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6 赵晶;董雅娟;柏学进;靳亚平;张廷龙;封纪武;;饲养层细胞的接种密度对分离培养胚胎干细胞的影响[J];中国兽医学报;2009年04期
7 李景芬;于浩;袁野;刘娣;;同源重组敲除MSTN基因的猪胎儿成纤维细胞的构建[J];中国农业科学;2009年08期
8 杨素芳,石德顺,韩杰,韦英明,韦精卫,陆凤花,牛向丽;供体核种类对水牛核移植效果的影响[J];广西农业生物科学;2004年03期
9 潘登科;张运海;孙秀柱;李燕;吴常信;李宁;;供体细胞对猪体细胞克隆胚胎早期发育的影响[J];畜牧兽医学报;2006年04期
10 李仕新;高萍;陈赞谋;张豪;王翀;李加琪;;猪胎儿成纤维细胞APOE基因的差异表达研究(英文)[J];Agricultural Science & Technology;2011年06期
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1 李仕新;陈松玲;张豪;李加琪;;猪SOD1在不同传代猪胎儿成纤维细胞中的表达[A];第十二次全国畜禽遗传标记研讨会论文集[C];2010年
2 巴雅斯古楞;冯书堂;;近交系五指山猪胎儿成纤维细胞(PEF)的转基因研究[A];第一届中国养猪生产和疾病控制技术大会——2005中国畜牧兽医学会学术年会论文集[C];2005年
3 侯健;安晓荣;苟克勉;杨国庆;陈永福;;兔胎儿成纤维细胞转外源基因二倍体单细胞克隆株的建立[A];中国生物工程学会第三次全国会员代表大会暨学术讨论会论文摘要集[C];2001年
4 周燕华;贾秀芬;刘慧雯;金明顺;;曲古抑菌素A对小鼠供体细胞组蛋白H3(Lys9)乙酰化水平的影响[A];中国解剖学会第十一届全国组织学与胚胎学青年学术研讨会论文汇编[C];2009年
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6 冯小曼;侯海军;李加琪;;猪CAT基因克隆及在不同代次猪胎儿成纤维细胞中的表达规律[A];中国动物遗传育种研究进展——第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集[C];2009年
7 姜保春;徐世永;邹晓龙;刘筱;翟乐;秦岭;张秀娟;刘红林;;单质粒Tet-on基因表达系统调控猪GH在猪胎儿成纤维细胞中表达[A];第十二次全国畜禽遗传标记研讨会论文集[C];2010年
8 陆凤花;石德顺;韦英明;韦精卫;潘红平;杨素芳;;供体细胞来源对水牛体细胞核移植效果的影响[A];第三届广西青年学术年会论文集(自然科学篇)[C];2004年
9 马玉珍;刘东军;周平;阎真;旭日干;;利用体细胞克隆技术产生转基因绵羊胚胎的研究[A];第十届全国生殖生物学学术研讨会论文摘要集[C];2005年
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1 通讯员 刘旭林 记者 刘传书;华大基因老龄动物体细胞克隆技术获新突破[N];科技日报;2011年
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4 记者 顾春阳;吉大培育出世界首例赖氨酸转基因克隆牛[N];长春日报;2011年
5 王柏涛 于永生 记者 于宁;我省首批体细胞克隆羊诞生[N];吉林日报;2011年
6 记者 贾立君;一群转基因克隆绒山羊或掀起“绒革命”[N];新华每日电讯;2010年
7 记者 李秀萍;石河子大学转基因克隆绵羊研究取得突破[N];兵团日报(汉);2011年
8 本报记者 王冠;“织女”克隆牛:吃的是草,挤的是高赖氨酸牛奶[N];科技日报;2011年
9 记者 谭大跃 通讯员 刘旭林;华大基因妙手生“猪”“猪坚强”繁衍下一代[N];深圳特区报;2011年
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1 潘求真;利用体细胞核移植技术生产转基因山羊的研究[D];东北农业大学;2002年
2 张力;猪Nanog基因在成纤维细胞与克隆胚胎中的过表达研究[D];东北农业大学;2011年
3 徐小明;胎猪骨髓间充质干细胞核移植及核移植胚胎干细胞的分离[D];西北农林科技大学;2006年
4 郭旭东;绒山羊转胰岛素样生长因子Ⅰ基因体细胞核移植胚胎的制备[D];内蒙古大学;2008年
5 殷慧群;猪诱导性多潜能干细胞的建立[D];安徽农业大学;2010年
6 袁建龙;利用体细胞核移植技术生产转基因绒山羊的研究[D];内蒙古大学;2013年
7 田江天;转基因兔制备技术及影响因素研究[D];吉林大学;2011年
8 张德福;猪体细胞核移植及其相关技术研究[D];南京农业大学;2008年
9 安培培;WT1基因对猪肾成纤维细胞和睾丸细胞的凋亡及发育基因表达影响的研究[D];吉林大学;2013年
10 付博;猪体细胞核移植重构胚构建的影响因素研究[D];东北农业大学;2010年
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1 谢莹;转hTERT基因山羊胎儿成纤维细胞生物学特性及其基因表达分析[D];西北农林科技大学;2012年
2 周红梅;线虫fat-1基因在家兔胎儿成纤维细胞中的表达研究[D];浙江大学;2010年
3 刘莹;猪胎儿成纤维细胞和卵巢表皮上皮细胞重编程能力的比较研究[D];云南农业大学;2012年
4 汪薇;转人α-乳白蛋白基因的奶山羊胎儿成纤维细胞株的建立及转基因奶山羊的鉴定[D];南京农业大学;2013年
5 刘建;在山羊胎儿成纤维细胞中以山羊β-酪蛋白基因的调控序列为同源序列进行基因打靶的初步研究[D];扬州大学;2003年
6 郑聪颖;山羊胎儿成纤维细胞的培养鉴定及其转基因核移植效率的研究[D];西北农林科技大学;2010年
7 何允;小鼠早期胚胎及胎儿成纤维细胞性别鉴定方法研究[D];西南大学;2012年
8 黄兰兰;脂质体介导hALR转染绵羊胎儿成纤维细胞的研究[D];石河子大学;2007年
9 胡军和;猪体细胞核移植研究[D];西北农林科技大学;2005年
10 杨红;小鼠重构卵的制作及研究[D];扬州大学;2002年
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