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《安徽农业大学》 2010年
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梨茎尖和叶片高效离体繁殖再生体系建立

宗娟  
【摘要】: 建立稳定、高效的叶片不定梢再生体系是梨转基因成功的关键环节。为此本试验以梨离体芽苞作外植体,在初代培养诱导试管苗成功的基础上,分别以MS、AS和1/2 MS培养基为基本培养基,附加不同的激素组合,根据培养基配方及培养条件,通过正交试验设计并结合方差分析和多重比较,研究不同培养基对梨试管苗芽增殖影响;叶片愈伤组织的诱导及愈伤组织的分化和试管苗生根的影响。试验研究获得的主要结果如下: 1、外植体消毒及初代培养 将外植体用75%酒精处理10 s后再用0.1% HgCl_2消毒4 min时,取得最佳消毒效果。外植体芽诱导的适宜培养基为1/2 MS + 6-BA 0.5 mg/L + NAA 0.2 mg/L。 2、增殖培养 鸭梨茎段增殖的适宜培养培养条件是以1/2 MS为基本培养基,附加0.8 mg/L的6-BA ; 0.3 mg/L的IBA及0.5 mg/L的GA3,增殖倍数为3.83;黄冠梨茎段增殖的适宜培养条件是以AS为基本培养基,附加0.8 mg/L的6-BA;0.1 mg/L的IBA及0.5 mg/L的GA3,增殖倍数为3.56;基本培养基对梨茎段增殖和生长无显著影响;不同浓度的6-BA处理,差异达到了显著水平。 3、愈伤组织的诱导与再生 试验从两个梨品种叶片上再生出不定芽,建立起黄冠和鸭梨叶片再生不定芽体系。叶片离体培养以1/2 MS培养基为基本培养基,附加不同浓度TDZ和IBA,结果以1/2 MS附加2.5 mg/L的TDZ及0.5 mg/L的IBA适宜鸭梨叶片诱导愈伤及分化的培养基组合;以1/2 MS附加0.5 mg/L的TDZ及0.5 mg/L的IBA为适宜黄冠叶片诱导愈伤组织及分化的培养基组合;在适宜条件下,鸭梨和黄冠叶片再生频率达到65.28%和66.67%,平均再生芽数为4.78和3.17。 4、梨苗生根 以1/2 MS + 1.0 mg/L IBA的培养基诱导鸭梨和黄冠的生根效果稍好,生根数、根长,统计均显著高于其他处理。
【学位授予单位】:安徽农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:S661.2

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