收藏本站
《安徽农业大学》 2010年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

刀豆愈伤组织建立及愈伤组织中刀豆氨酸的形成

陈东芳  
【摘要】: 刀豆氨酸是一种天然非蛋白氨基酸,和精氨酸的分子结构非常相似,由于其能代替精氨酸被精氨酸tRNA合成酶误认为是精氨酸而合成到蛋白质中,而使含刀豆氨酸的蛋白质生理功能有缺陷,从而有良好的抗肿瘤性。刀豆氨酸是蝶形花亚科(Papilionnoidea)和豆科(leguminosae)植物种子中的可溶性氮的存贮库,它也被认为是一种保护植物不被病虫害等侵染的植物天然性次生代谢产物,这是因为刀豆氨酸对某些害虫表现出一定的毒性作用,由于其具有毒性而被认为是一种潜在的杀虫剂,其优点表现为低毒性,对自然界无污染,从它的作用机制判断,由于它不损害病虫的寄生性天敌,因此具有保护病虫天敌昆虫特性。刀豆氨酸的主要来源是通过人工合成和从植物中提取两种途径。而植物提取中通过组织培养技术可以获得次生代谢产物且一般是成本低,收取率高,对环境污染少,目前国内还未见关于刀豆愈伤组织的报道,本研究主要是利用刀豆种子诱导愈伤组织,以细胞鲜重、干重、细胞相对生长率以及刀豆氨酸含量为考察指标,进行多因素多水平的优化实验,分析液体悬浮培养过程中生理生化指标,且对其中的刀豆氨酸含量进行测定,通过研究拟建立一种新的简便、快速测定刀豆氨酸的方法,研究结果表明: (1)通过研究2,4-二硝基氟苯与刀豆氨酸在pH 9.5硼砂缓冲溶液中反应的最佳条件,建立了一种新的、快速简便的测定刀豆氨酸的方法,即运用了分光光度法测定络合物在571 nm处的吸光度。结果表明:在50℃水浴30 min后,刀豆氨酸与2,4-二硝基氟苯发生显色反应,即形成绿色1:1的稳定络合物。其最大吸收峰在571nm,表观摩尔吸光系数ε= 1.086×104L/(mol·cm),在13.75~220.00μg/mL范围内遵守比尔定律,对应线性回归方程为:y=0.0051x+0.0682;相关系数为:R2=0.9939。加标回收率为96.60 ~101.56%范围之内,相对标准偏差在1.768%之内,从而建立了刀豆氨酸简单、快速测定的新方法。 (2)以刀豆种子为材料,诱导刀豆愈伤组织,建立刀豆愈伤组织体系,并进一步培养和增殖,同时,测定了不同颜色愈伤组织中刀豆氨酸含量和不同生长时期愈伤组织中刀豆氨酸含量。结果表明:在MS培养基中可以诱导出浅绿色的刀豆愈伤组织,且在增殖培养基中刀豆愈伤组织的生长特点呈现“S”型曲线模式,生长周期为24d。研究发现在绿色愈伤组织中刀豆氨酸含量最高为43.462μg/gFW(细胞鲜重),其次是浅绿色的,接着是白色的,含量最少的是褐化的愈伤组织21.626μg/gFW。在愈伤组织组织生长过程中刀豆氨酸含量呈先上升后有所下降趋势。含量最高的时期为培养24d,其刀豆氨酸含量为30.675μg/gFW。 (3)运用正交试验设计方法,以鲜重、干重、细胞相对生长率以及刀豆氨酸含量为指标,对刀豆愈伤组织进行多因素多水平进行考察。结果表明:蔗糖对愈伤组织生长的影响最为显著。同时也对刀豆氨酸含量影响显著。如果以愈伤组织生长量为目标:最佳培养基为MS+3.0 mg/L6-BA+0.8 mg/LNAA+40g/L蔗糖+7.8g/L琼脂,最佳培养基条件下愈伤组织相对生长率为0.1016,干重达1.1318g.瓶-1;如果以愈伤组织中刀豆氨酸含量为目标:最佳培养基为MS+3.0 mg/L6-BA+0.2 mg/LNAA+20g/L蔗糖+ 7.8g/L琼脂,最佳培养基条件下刀豆氨酸含量为63.2432μg/L FW和617.5320μg/L DW。 (4)挑选质地疏松、生长状态均一、分散性好的刀豆愈伤组织作为接种材料进行悬浮培养,比较分析了悬浮培养过程中各种生理生化指标以及刀豆氨酸含量的变化。实验结果表明:刀豆愈伤组织悬浮培养呈“S”型曲线,生长周期为18d。胞内和胞外可溶性蛋白含量以及细胞活力呈先上升后下降趋势,而培养液中的pH变化和胞外过氧化物酶含量呈先下降再上升趋势;且刀豆氨酸含量先稍有下降然后再上升,最后又下降的趋势,表明培养液的pH值和胞外过氧化物酶活性与刀豆氨酸含量具有相关性。
【学位授予单位】:安徽农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:Q946

手机知网App
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 李杰;;光度法对磺基水杨酸铁配合物的组成及稳定常数的实验研究[J];赤峰学院学报(自然科学版);2007年05期
2 黄卓烈,李明,谭绍满,巫光宏,詹福建,龙腾;吲哚丁酸对桉树插条多酚氧化酶的影响及其与生根的关系[J];广西植物;2003年01期
3 汪文陆,程振衡;刀豆氨酸对亚洲玉米螟生长发育及生殖的影响[J];华南农业大学学报;1995年02期
4 谢亚军;胡海英;李鹏;;老瓜头悬浮细胞培养及其生长特性的研究[J];江苏农业科学;2008年06期
5 程振衡,朱志强;刀豆氨酸对亚洲玉米螟生长发育的影响[J];昆虫学报;1986年02期
6 郝赤;L-刀豆氨酸与克百威对大菜粉蝶幼虫毒力对比试验[J];昆虫知识;1998年02期
7 沈慧慧;易丽娟;何冬梅;李春;;基于无外源激素下肉苁蓉细胞悬浮培养的研究[J];石河子大学学报(自然科学版);2008年01期
8 李省云;杨毅萍;王朝风;;苏氨酸的荷移分光光度法测定[J];太原师范学院学报(自然科学版);2006年01期
9 吴莹莹;佟建明;张琪;萨仁娜;;苜蓿种子中刀豆氨酸含量的测定[J];中国饲料;2008年17期
10 李善文;张东向;;正交设计法优化三岛柴胡愈伤组织培养基[J];生物技术;2010年01期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张怀俊;六环教学模式探究[J];安徽教育学院学报;2003年03期
2 朱小茜;耿明;鲁红侠;;云南烤烟标样烟叶中多酚类化合物与等级的关系[J];合肥师范学院学报;2008年06期
3 隋娜,李萌,田纪春,孟庆伟,赵世杰;K~+对水分胁迫下超级小麦幼苗生理特性的影响[J];山东农业科学;2004年06期
4 魏秀俭;玉米自交系耐旱性的模糊隶属函数法分析[J];山东农业科学;2005年02期
5 郭淼;张廷婷;高建强;崔德才;;拟南芥PLDα1突变体的繁殖及形态和生理特性分析[J];山东农业科学;2007年02期
6 黄霄;杨秀梅;刘训言;孟庆伟;;转正义基因番茄类囊体膜脂不饱和度对抗旱性的影响[J];山东农业科学;2008年03期
7 王瑞英;李祥云;朱文峰;刘炳乾;;糯玉米保鲜加工储藏试验研究[J];山东农业科学;2008年05期
8 朱玉庆;唐薇;罗振;孙学振;董合忠;;转AhCMO基因棉花品系苗期耐盐性的比较研究[J];山东农业科学;2008年06期
9 王月明;李红梅;董建恩;郑福丽;江丽华;;石油污染物对小白菜生物量、生理指标的影响[J];山东农业科学;2008年06期
10 李凯;杨建平;马宁;殷昭平;冯其伦;;低温处理对裸仁南瓜幼苗抗寒性指标的影响[J];山东农业科学;2009年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 徐福利;王渭玲;;低分子活性有机酸对辣椒产量、品质及养分吸收的影响[A];2012新型肥料创制关键技术与新工艺、新设备交流研讨会论文集[C];2012年
2 陈宇;黄志明;叶美兰;吴锦程;;不同枇杷品种果实发育过程中果肉细胞壁组分的变化[A];第五届全国枇杷学术研讨会论文(摘要)集[C];2011年
3 傅明连;林素英;蔡丽琴;黄志明;吴锦程;;不同枇杷品种细胞壁代谢与果肉质地形成的关系[A];第五届全国枇杷学术研讨会论文(摘要)集[C];2011年
4 栾添;杨秀珍;李英男;李美蓉;;氮营养水平对大花蕙兰‘绿世界'幼苗年生长的影响[A];中国观赏园艺研究进展2011[C];2011年
5 李婷婷;张秀新;吕英民;;盆栽芍药有机生态型无土栽培基质配方筛选[A];中国观赏园艺研究进展2011[C];2011年
6 李婕;高亦珂;向地英;;温汤处理对亚洲百合‘多安娜'耐热性的影响[A];中国观赏园艺研究进展2011[C];2011年
7 马宗骧;王奎玲;刘庆华;刘庆超;唐启和;;三桠乌药幼苗耐阴性研究[A];中国观赏园艺研究进展2011[C];2011年
8 王磊;卓丽环;李瑞发;;农业废弃物作为百子莲组培苗移栽基质的研究[A];中国球根花卉研究进展2011[C];2011年
9 唐蓉;张继花;韦梅芹;龚维红;汪成忠;;唐菖蒲试管苗与大田苗叶片解剖结构的观察与比较[A];中国球根花卉研究进展2011[C];2011年
10 杨轶华;梁鸣;;外源物质对元宝槭生长及生理特性的影响[A];2010植物免疫机制研究及其调控研讨会论文集[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 毕明娟;B型烟粉虱诱导的烟草防御信号途径及B型烟粉虱和烟蚜对烟草防御反应的生理适应性差异[D];山东农业大学;2010年
2 王齐;中水灌溉对城市绿地生态系统的影响及安全性评价[D];甘肃农业大学;2010年
3 李培英;新疆草坪用野生偃麦草种质资源评价[D];新疆农业大学;2010年
4 侯钰荣;伊犁绢蒿生理生态适应性的研究[D];新疆农业大学;2010年
5 彭祺;镧对UV-B辐射胁迫下大豆幼苗内源激素与类黄酮代谢影响[D];江南大学;2010年
6 盖玉红;盐生和中生植物对盐害的响应及其抗性结构机制研究[D];东北师范大学;2010年
7 王爱芳;干旱胁迫下白皮松苗木电阻抗及生理指标的比较研究[D];河北农业大学;2010年
8 周欣;铵离子对中国红豆杉细胞中紫杉烷生物合成的影响及其信号转导机理研究[D];华东理工大学;2011年
9 何小勇;翅荚木种源遗传多样性及其抗低温胁迫能力研究[D];中南林业科技大学;2007年
10 刘卫东;湖南假俭草遗传多样性、生理学特性及护坡性能研究[D];中南林业科技大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 陈小红;藜蒿硅窗气调保鲜研究[D];华中农业大学;2010年
2 刘吟;双孢蘑菇采后褐变的相关生理生化变化及其保鲜技术研究[D];华中农业大学;2010年
3 孙源蔚;中国李‘Nubiana’愈伤组织诱导、保存及植株再生研究[D];华中农业大学;2010年
4 邓姗;旱稻IRAT109辐照突变体的抗旱性鉴定和窄叶突变体(nal8)的初步定位[D];华中农业大学;2010年
5 汪晶;二倍体马铃薯原生质体融合创制抗青枯病的新种质[D];华中农业大学;2009年
6 张威;阿特拉津对几种水生植物的毒理效应及降解研究[D];华中农业大学;2010年
7 高胡静;百合离体条件下的耐盐性评价和EMS诱变育种初步研究[D];华中农业大学;2010年
8 刘鹍;苦瓜单倍体诱导的初步研究[D];华中农业大学;2010年
9 朱冬梅;盐碱胁迫下星星草(Puccinellia tenuiflora)根部转录应答的初步分析[D];哈尔滨师范大学;2010年
10 杜连莹;实践八号搭载8个苜蓿品种生物学效应研究[D];哈尔滨师范大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 李永丽;周洲;李科友;;细胞培养生产药用次生代谢物研究进展[J];安徽农业科学;2006年02期
2 向太和,杨剑波,吴家道;水稻、玉米胚性悬浮细胞系的有效建立[J];安徽农业科学;1996年01期
3 刘自林,王艳,许伏新;安徽省中药材种植存在的问题及对策[J];安徽医药;2004年03期
4 罗慧玲,蔡体育,陈巧伦,梅承恩,李永强,黄民权;石斛多糖增强脐带血和肿瘤病人外周血LAK细胞体外杀伤作用的研究[J];癌症;2000年12期
5 胡张华,陈火庆,吴关庭,金卫,章锡良,郎春秀,黄锐之,陈笑云,刘智宏,夏正红,陈锦清;百慕大成熟胚的组织培养及植株再生[J];草业学报;2003年01期
6 卢宝伟;安凤霞;樊锐锋;胡宝忠;;分子生物学技术在药用植物研究领域中的应用[J];东北农业大学学报;2005年06期
7 宋关玲,杨谦,高兴喜,王琴,王岩;植物细胞培养中天然植物成分生产在工业上的应用[J];东北林业大学学报;2003年05期
8 付杨,陈凤清,孙冬雪,苏全平,王丽;大叶柴胡愈伤组织继代培养及其RAPD分析[J];东北师大学报(自然科学版);2005年02期
9 郭子彪,盖钧镒;内源激素IAA、ABA对大豆萌发子叶胚性愈伤组织诱导及其分化的调控[J];大豆科学;1997年03期
10 许建峰,谢健,李宁,冯朴荪;高山红景天致密愈伤组织颗粒悬浮培养结构化动力学模型[J];大连理工大学学报;1999年01期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 程振衡,汪文陆;刀豆氨酸对亚洲玉米螟的生理生化效应[J];昆虫学报;1993年04期
2 郝赤;L-刀豆氨酸与克百威对大菜粉蝶幼虫毒力对比试验[J];昆虫知识;1998年02期
3 程振衡,朱志强;刀豆氨酸对亚洲玉米螟生长发育的影响[J];昆虫学报;1986年02期
4 蔡文通;蔡韬;张江;郑会明;钟增涛;朱军;;毛萼田菁茎瘤菌被种子浸提物诱导表达基因的筛选及其功能[J];微生物学报;2009年09期
5 沈惠娟;;多胺生物合成抑制剂对番茄幼苗根伸长和小米种子发芽的影响[J];植物生理学通讯;1990年01期
6 ;基因标记、转化、表达与检測[J];生物技术通报;1992年01期
7 吴显荣;非蛋白质氨基酸的结构与功能[J];氨基酸和生物资源;1989年03期
8 陈伟;在CGB培养基上生长的A型和D型新生隐球菌[J];国外医学.皮肤性病学分册;1999年01期
9 刘秋云,Jay C.Dunlap;arg-13可能参与鸟氨酸在粗糙脉孢霉线粒体的过膜转运(英文)[J];实验生物学报;1998年04期
10 金崑,崑李庆;植物对动物的化学防卫[J];植物杂志;2003年03期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 蔡韬;氨基酸外运系统MsiAR在中慢生型天山根瘤菌和其宿主甘草初期信号交流中的生态学作用[D];南京农业大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
1 王春艳;刀豆组织悬浮培养体系的建立及刀豆氨酸的诱导、分离提取[D];安徽农业大学;2012年
2 陈东芳;刀豆愈伤组织建立及愈伤组织中刀豆氨酸的形成[D];安徽农业大学;2010年
3 黄笃厚;优良黄酒酵母的选育[D];江南大学;2013年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026