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《安徽农业大学》 2010年
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转录因子OSPHD1的过表达提高水稻耐逆性的研究

刘雨  
【摘要】: 干旱、低温、高盐是影响植物生长和发育的主要环境因子。如何减少这些非生物逆境对植物的伤害,提高植物的抗逆能力,已成为目前农业生物科研工作者的一项重要课题。 在非生物胁迫条件下相关的转录因子能够调节功能基因的表达,它们在转基因植物中的超表达会激活许多抗逆功能基因同时表达,提高植物的抗逆性。因此,转录因子的研究对调节植物的抗非生物胁迫方面具有十分重要的意义,与逆境胁迫相关的转录因子的研究已成为植物分子生物学研究的热点。 本研究通过基因芯片技术获得抗逆相关转录因子基因OSPHD1。登陆TIGR Rice Genome Annotation数据库(http://rice.plantbiology.msu.edu/),利用OSPHD1基因ID序列号获取全长cDNA序列。基因序列BLAST分析表明其属于PHD-finger蛋白家族基因,对该基因的表达分析和转基因功能验证,取得了以下研究结果: 1.提取中花11水稻RNA并反转录成cDNA作为模板,进行半定量RT-PCR。结果发现内源基因OSPHD1呈干旱、高盐和低温诱导性,在水稻幼苗中的表达量明显升高。提取幼苗期水稻的总RNA,通过反转录得到cDNA,RT-PCR方法扩增得到全长基因,基因长度为2067bp。 2.利用农杆菌介导的转基因技术,将OSPHD1基因转入水稻中花11,获得OSPHD1的过表达植株。T1代植株逆境处理实验表明相对于未转基因植株,过表达植株的耐逆性显著增强。T2代的筛选结果与T1代筛选结果一致,表明抗性已在后代中得到稳定的遗传。荧光定量PCR分析转基因T2代单拷贝纯合体株系的表达量与表型筛选结果呈对应关系,这些结果表明,OSPHD1的过量表达导致了转基因水稻材料的抗逆能力的增强。通过对T1和T2代转基因植株的田间表型观察,转基因水稻的农艺性状与未转基因材料中花11没有明显差别。 3.通过基因枪法轰击洋葱表皮细胞研究OSPHD1转录因子的亚细胞定位,结果显示,用荧光显微镜在445-490nm激发光源照射下,转OSPHD1:: GFP融合表达质粒的细胞只在细胞核中有绿色荧光,而转只含GFP基因的质粒则在整个细胞中都有绿色荧光。表明OSPHD1蛋白定位于细胞核中。而利用酵母双杂交体系验证OSPHD1转录因子转录激活域试验中,含有OSPHD1-pGBKT7质粒的阳性酵母株不能在SD-Trp-Ade-His平板上生长,表明OSPHD1在酵母中无转录激活功能。
【学位授予单位】:安徽农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:S511

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【引证文献】
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【同被引文献】
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3 倪建平;我国水稻知识产权现状与发展方向研究[D];中国农业科学院;2010年
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5 胡国成;适合于水稻的激发标签载体的优化和水稻激发标签突变体库的构建[D];浙江大学;2002年
6 梁淑家;水稻正向控制系统获得抗性的调节基因的功能鉴定[D];广西大学;2002年
7 全东兴;吉林省主栽水稻品种组织培养体系的优化及抗除草剂基因转化研究[D];东北农业大学;2002年
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