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《安徽农业大学》 2010年
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戴氏虫草(Cordyceps taii)的化学成分及其清除自由基活性物质的研究

王金彬  
【摘要】： 本研究对采自安徽省金寨县的戴氏虫草的化学成分进行了分析,并对其中的清除自由基活性物质进行了系统研究。研究内容包括:核苷和麦角甾醇的定量测定;与戴氏绿僵菌RCEF4124的成分比较分析;清除自由基活性成分分析;清除自由基活性成分的提取条件的优化;清除自由基组分的分离纯化;清除自由基组分的抗菌活性研究。 利用反相高效液相色谱法测得戴氏虫草子实体中尿苷、鸟苷、腺苷及麦角甾醇的含量分别为0.79±0.15mg/g、0.36±0.01 mg/g、2.73±0.32 mg/g、2.67±0.27mg/g,虫体中尿苷、鸟苷、腺苷及麦角甾醇的含量分别为0.32±0.02 mg/g、0.28±0.02 mg/g、2.20±0.28 mg/g、3.08±0.15 mg/g。其中子实体中的核苷含量要显著高于虫体,而麦角甾醇则是在虫体中含量较高。 高分辨HPLC-DAD-MS分析结果表明,戴氏虫草子实体、虫体及RCEF4124人工培养菌丝体的甲醇提取物中均含有甘露醇和多种脂肪酸,且戴氏虫草中的脂肪酸主要存在于虫体部分。戴氏虫草子实体甲醇提取物中除了一些脂肪酸成分外,还含有C_(15)H_(22)N_2O_6、C_9H_(11)NO_2、C_(33)H_(42)N_2O_(19)、C_(26)H_(22)O_(13)等物质;RCEF4124人工培养菌丝体的甲醇提取物中除了C_(15)H_(22)N_2O_6外,还含有C_(33)H_(44)O_8。 在戴氏虫草子实体、虫体及RCEF4124人工培养菌丝体的二氯甲烷和乙酸乙酯混合溶剂提取物中主要含有亚油酸、软脂酸、油酸、硬脂酸、十八碳三烯酸、二十四碳烯酸(神经酸)等多种脂肪酸类物质。除了脂肪酸外,子实体中还含有C_(30)H_(26)O_(10)、C_(19)H_(42)N_4O_(10)等物质,虫体中含有C_(29)H_(37)NO_7、C_(33)H_(44)O_8,RCEF4124中含有C_(33)H_(44)O_8、C_(30)H_(26)O_(10)、C_(30)H_(24)O_(10)。 DPPH体外抗氧化模型实验结果表明,当提取物浓度为2.5mg/ml时,子实体和虫体乙酸乙酯提取物的自由基清除率分别为83.29±0.48%和14.77±1.73%。比较子实体和虫体提取物的清除自由基活性和薄层色谱,发现戴氏虫草中的自由基清除剂主要存在于子实体中。通过高分辨液质联用和活性联合分析,得出提取物中活性物质的可能分子式为C_(26)H_(22)O_(13)。经天然产物数据库查询,发现没有与之相匹配的已知化合物,因此该活性成分可能为一新化合物。 通过对戴氏虫草中清除自由基活性物质的提取条件进行优化,最终得出最佳提取条件为:以甲醇为提取溶剂,料液比1:58(W:V),超声功率66W,超声时间30min,浸提时间180min,浸提温度60℃,甲醇浓度93.5%。验证实验表明,按照最佳提取条件,提取物的自由基清除率平均可达到97.3% ,与理论预测值相比相对误差仅为0. 51 %。 利用半制备型高效液相对戴氏虫草中的清除自由基活性物质进行了初步分离制备,并用Sephadex LH-20凝胶柱层析对其进一步纯化,得到了组分D-1。用HPLC-DAD-MS和薄层色谱法进行纯度验证,结果表明,D-1为纯度很高的纯品。MS和DPPH-TLC分析证明了D-1即为戴氏虫草中的清除自由基活性成分C_(26)H_(22)O_(13)。 抑菌试验结果表明, D-1还对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均有明显的抗菌活性,抑菌圈直径分别为16.91±1.53mm、12.22±1.32mm。
【关键词】：戴氏虫草 成分分析 清除自由基 提取条件 分离纯化
【学位授予单位】：安徽农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：S567.35
【目录】：
  • 摘要4-6
  • Abstract6-10
  • 1 文献综述10-23
  • 1.1 虫草研究概况10-17
  • 1.1.1 虫草中的生物活性物质11-14
  • 1.1.2 虫草的药理作用14-17
  • 1.2 戴氏虫草研究概况17-18
  • 1.3 天然产物提取与分离纯化技术18-23
  • 1.3.1 天然产物的提取技术18-19
  • 1.3.2 天然产物的分离纯化技术19-23
  • 2 引言23-24
  • 3 材料与方法24-32
  • 3.1 材料24-26
  • 3.1.1 供试虫草及菌株24
  • 3.1.2 培养基24
  • 3.1.3 主要仪器和试剂24-26
  • 3.2 方法26-32
  • 3.2.1 培养方法26
  • 3.2.2 样品的处理26
  • 3.2.3 戴氏虫草中常见活性物质的测定26-27
  • 3.2.4 戴氏虫草与戴氏绿僵菌成分的比较分析27-28
  • 3.2.5 戴氏虫草中清除自由基活性物质的分析28
  • 3.2.6 戴氏虫草中清除自由基活性物质提取条件的优化28-30
  • 3.2.7 戴氏虫草中清除自由基活性物质的分离纯化30-31
  • 3.2.8 清除自由基组分的抗菌活性研究31-32
  • 4 结果与分析32-61
  • 4.1 戴氏虫草中常见活性物质的测定32-34
  • 4.1.1 核苷类物质的测定32-33
  • 4.1.2 麦角甾醇的测定33-34
  • 4.2 戴氏虫草与戴氏绿僵菌RCEF4124 成分的比较分析34-46
  • 4.2.1 甲醇提取物分析34-40
  • 4.2.2 二氯甲烷和乙酸乙酯混合溶剂提取物分析40-46
  • 4.3 戴氏虫草中清除自由基活性物质的分析46-49
  • 4.3.1 不同部位提取物的活性测定46-47
  • 4.3.2 活性提取物的TLC 分析47
  • 4.3.3 活性提取物的HPLC-DAD-HRMS-DPPH 联合分析47-48
  • 4.3.4 戴氏虫草子实体乙酸乙酯提取物中活性成分的鉴定48-49
  • 4.4 戴氏虫草中清除自由基活性物质提取条件的优化49-56
  • 4.4.1 提取条件的单因素实验49-52
  • 4.4.2 提取条件的响应面优化52-56
  • 4.5 戴氏虫草中清除自由基活性物质的分离纯化56-59
  • 4.5.1 活性成分的初步分离纯化56-57
  • 4.5.2 活性组分的进一步纯化57
  • 4.5.3 纯度鉴定及活性确认57-59
  • 4.6 清除自由基组分的抗菌活性研究59-61
  • 5 讨论61-64
  • 6 结论64-66
  • 参考文献66-73
  • 致谢73-74
  • 作者简介74
  • 攻读硕士期间发表的学术论文目录74

【参考文献】
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