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《安徽农业大学》 2010年
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双孢蘑菇褐化相关PPO基因的研究及香菇EST-SSR标记的建立

刘春滟  
【摘要】: 本论文共有两个部分。 (一)双孢蘑菇褐变相关多酚氧化酶(PPO)的研究 (1)双孢蘑菇在储藏过程中容易发生褐变,影响其食用价值和经济价值。本研究通过研究双孢蘑菇储藏过程中的褐变度、总酚含量、多酚氧化酶(PPO)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)酶活性变化,探讨其褐变机理,以期寻找抑制其褐化的途径。结果显示,PPO与双孢蘑菇褐化有着密切的联系,但其褐变机制有待于进一步的研究。 (2)从双孢蘑菇中分离和克隆了2个PPO同源基因的基因组序列,PPO~3和PPO4,长度分别为2080bp和2189bp,对其序列信息进行了分析,发现PPO~3和PPO4都有7个外显子和6个内含子,外显子和内含子的连接区高度保守,符合真核基因的GT-AG剪接法则,且含有典型的CuA,CuB结构域。 (3)利用染色体步移技术分别克隆2个PPO基因的启动子序列,长度均大于1.5kb,分析发现包含核心启动子的保守元件,如TATA-Box和CAAT-Box等,以及I-box、G-Box、AE-box、WUN-motif、ARE-motif、MYB等一些重要顺式作用元件。(4)半定量的结果再次证明了PPO基因与双孢蘑菇褐变之间的关系。 (二)香菇EST-SSR标记的建立 EST-SSR标记是基于公共数据库中的EST或cDNA序列开发的一种分子标记。开发香菇上可用的EST-SSR标记对于食用菌类的遗传育种研究有着重要的意义。 本研究利用生物信息学的数据挖掘技术,对公共序列数据库中香菇EST的SSR位点进行了鉴定和分析,建立了香菇EST-SSR标记,并将这些标记应用在香菇菌种遗传关系的研究中,获得了以下结果: (1)从NCBI中下载了12184条香菇EST序列,处理后得到全长3681177bp的4684个Unigene。在其中共发掘出142个SSR,分布于120条Unigene中,发生频率为2.99% (1/25.429kb)。其中,单,二,三核苷酸重复是主要的重复类型,A/T,AG/CT,ACG/CTG是单,二,三核苷酸的主要重复基序,分别占所有EST-SSR的78.57%,79.49%,25.42%。 (2)利用primer5.0设计了40对引物,并在35个香菇品种中进行检测。结果有36对引物显示扩增,占所有引物的90%,其中22对引物为多态性引物,其多态率为55%。 (3)应用NTSYS软件的聚类方法分析表明,35份材料遗传相似系数范围为0.125-0.781,PIC值为0.056 - 0.826,说明35个香菇品种间具有一定的遗传多样性。可以将其进一步地应用于香菇遗传育种的实践应用中。
【学位授予单位】:安徽农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:S646.1

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