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《安徽农业大学》 2010年
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HPLC-FLD法检测鸡体内阿奇霉素残留及消除规律研究

汪金菊  
【摘要】: 阿奇霉素是第二代大环内酯类抗生素的一种,尚未列入兽医临床用药,但在养殖业中的应用已较频繁,给动物源性食品安全带来了隐患。为加强对动物性食品中阿奇霉素残留的监控,本文建立了一种柱前衍生高效液相色谱荧光法,检测鸡体内阿奇霉素的残留。 试验样品(血浆、肌肉、肝脏)经过氢氧化钠碱化后,用正己烷提取净化,吸取适量有机层45℃氮气吹干,再加入衍生试剂9-芴基氯甲酸酯和硼酸盐缓冲液置于50℃水浴锅中衍生40min,最后加入甘氨酸作为终止液上机检测。试验采用AgilentC18柱(4.6mm×250mm)作为分离色谱柱;选择0.05mol/L磷酸盐缓冲液(含0.2﹪三乙胺):乙腈=29:71(V/V)pH值为5.8的混合液为流动相;设置激发波长(EX)为265nm,发射波长(EM)为315nm,流速1.2mL/min,柱温35℃,进样量为20μL。测得阿奇霉素最低检测限血浆为0.02μg/mL、肌肉和肝脏为0.03μg/g ,最低定量限三者均为0.04μg/mL(μg/g),标准曲线的线性范围为0.04~5μg/mL(μg/g)。当添加浓度为0.1μg/mL、1μg/mL、3μg/mL时, AZM在血浆中的日内变异系数范围在0.82﹪~1.04﹪之间,日间变异系数范围在1.03﹪~1.27﹪之间;添加浓度为0.1μg/g、1μg/g、3μg/g时,AZM在鸡肌肉中日内变异系数范围在0.91﹪~1.15﹪之间,日间变异系数范围在1.16﹪~1.31﹪之间,AZM在鸡肝脏中的日内变异系数范围在1.03﹪~1.81﹪之间,日间变异系数范围在1.20﹪~2.12﹪之间。分别添加0.1、1、3μg/mL (μg/g)三个水平的阿奇霉素到各空白组织液后,测得鸡血浆、肌肉、肝脏中阿奇霉素的平均回收率分别为95.2±0.20﹪、76.3±0.16﹪、77.7±0.93﹪。从以上试验数据可以看出,本试验所建立的高效液相色谱荧光法检测鸡体内阿奇霉素,具有简单易行、灵敏可靠的特点,可以为动物性食品安全监测提供一定的依据。 实际应用中,对鸡进行20mg/kg单剂量灌服给药后,分别在2、4、6、8、10、12、24、36、48、60、72h取鸡血浆、肌肉和肝脏样品,采用本试验建立的方法进行检测,血浆48h检测不出阿奇霉素,肌肉和肝脏中阿奇霉素消除较慢,到72h检测不到。阿奇霉素在各组织中的消除曲线方程分别为C_血浆=7.7224e~(-0.1362t),C_肌肉=21.668e~(-0.0732t),C_肝脏=21.052e~(-0.0567t)。药物的半衰期分别为:t_(1/2血浆)=1.91 (h); t_(1/2肌肉)=10.56(h); t_(1/2肝脏)=13.12(h)。由此可以看出阿奇霉素在鸡血浆中消除快,在鸡肌肉和肝脏中消除较慢,残留时间较长。
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