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《安徽农业大学》 2010年
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PRRSV安徽株的分离鉴定及感染仔猪病理学的研究

姚雪静  
【摘要】: 猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种传染病,该病的主要特征是引起母猪繁殖障碍、仔猪和育肥猪呼吸系统疾病,并有较高的死亡率。1987年,该病在美国首次暴发,2006年夏秋季开始在我国大部分地区爆发流行,给我国的养猪业带来极大的经济损失。为了研究PRRSV流行毒株的来源和变异原因,探索相关的防控措施,本研究对2008年从安徽地区两个发病猪场采集疑似猪繁殖与呼吸综合征病料,进行PRRSV流行毒株的分离鉴定,并对其Nsp2、ORF7基因进行克隆与序列分析;同时用分离毒株接种健康仔猪,进行病理组织学的观察,并采用间接免疫组化法,分析PRRSV抗原的在感染仔猪体内和分布情况,为安徽省PRRSV流行株的来源、分子流行病学和变异情况等提供科学依据,为进一步研究病毒在动物体内的持续感染状况和阐明PRRSV的致病机奠定理论基础。 2008年从安徽地区两个发病猪场采集疑似猪繁殖与呼吸综合征病料,在Marc-145细胞上盲传4-5代,发现有明显细胞病变。用PRRSV (Nsp2 1594~1680变异株)RT-PCR检测试剂盒可扩增出目的片断;用间接免疫荧光试验可观察到特异性荧光;通过电镜观察可见直径50~80 mm的有囊膜的病毒粒子。证实分离到两株猪繁殖与呼吸综合征病毒,命名为HS08株和ZJ08株。 用RT-PCR扩增两个分离毒株HS08株和ZJ08株的Nsp2和ORF7基因,进行克隆和序列分析。结果表明这两个分离毒株核苷酸同源性99.0%;在Nsp2基因上,这两个分离毒株均发生30个氨基酸的不连续缺失,它们与CH-1a株之间核苷酸同源性分别为80.7%和80.2%;在ORF7基因上,它们与2007年国内高致病性蓝耳病毒株HuN核苷酸同源性较高,达到98.4%和99.5%,且ORF7基因均存在K46→R46,H109→Q109,V117→A117氨基酸突变。这些信息显示这两个安徽分离株属美洲型毒株,具有高致病性特征,与国内高致病性毒株位于同一基因群。 将6头60日龄的PRRSV抗原与抗体均为阴性健康仔猪随机分为3组,每组各两头。A、B两组经鼻腔接种分离株HS08株和ZJ08株的第12代细胞培养物2 mL/头,C组为对照组。试验组的仔猪在攻毒后第一天,体温就升高到41℃,并持续高热,最高时可达42.3℃,攻毒后第6天,就可以检测到PRRSV抗体,第10天抗体水平达到最高。通过对临床症状、剖检病变、病理切片的观察发现攻毒组猪只的各脏器眼观病变均轻于临床剖检所见,肺脏主要呈间质性肺炎,肺泡间隔明显增厚,大量炎性细胞浸润;肝脏淤血,肝细胞变性,炎性细胞浸润;肾脏、脾脏、淋巴结出血;免疫组化检测到肺脏、肝脏、肾脏、脾脏、淋巴结、扁桃体中均有不同程度的阳性反应,其中肺脏阳性最强。
【学位授予单位】:安徽农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:S858.28

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【参考文献】
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