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《安徽农业大学》 2010年
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山羊瘤胃微生物宏基因组文库的构建及功能基因的筛选

安娜  
【摘要】: 自然界中存在着大量的微生物,能够在实验室中纯培养的种类微乎其微,这就大大限制了人们对微生物的研究。宏基因组学可以在非实验室纯培养的条件下直接获取环境微生物DNA,对其基因组进行分析并将其克隆到合适的载体上,筛选所需要功能基因。为了研究山羊瘤胃微生物菌群降解纤维素酶的功能,本试验利用宏基因组学技术,从山羊瘤胃液中提取混合微生物DNA,经BamH I部分酶切后得到50~800 kb的DNA片段,将其连接到pCC1 BAC载体上,转化E. coli EPI300,建立山羊瘤胃微生物BAC文库,共获得12672个克隆。用Not I酶切后,经RFLP分析,该文库平均插入片段为61 kb,获得了0.7Gbp的基因组DNA覆盖,具有较高的研究价值。以七叶苷为底物的检测平板,进行β-葡萄糖苷酶的高通量功能筛选,获得了16个β-葡萄糖苷酶阳性克隆,对其中一个具有较高活力的阳性克隆进行深入分析,用Sau3A I对阳性克隆进行部分酶切后,回收2~5 kb之间片段进行回收连接到pUC 19载体上。转化到E. coli DH5α感受态细胞中,得到的阳性克隆,将其挑出培养成菌液,送至上海Invitrogen公司测序。测序得到4566bp的序列。经序列比对,该基因片段为来自E .coli基因组的纤维素酶基因。
【学位授予单位】:安徽农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:S852.6

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