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《安徽农业大学》 2010年
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中草药提取物对小鼠乳腺上皮细胞增殖作用的研究

周凡  
【摘要】: 本研究通过对小鼠乳腺上皮细胞的培养方法的筛选,培养出生理功能正常的小鼠乳腺上皮细胞,以该细胞为模型,研究中草药提取物对小鼠乳腺上皮细胞生长的影响。从昆明白鼠乳房无菌采取乳腺组织,通过不同的方法分离、培养、纯化小鼠乳腺上皮细胞,研究小鼠乳腺上皮细胞的体外培养效果。显微镜下对分离纯化的乳腺上皮细胞进行观察,做形态学鉴定;绘制生长曲线并计算群体倍增时间;利用SDS-PAGE电泳检测上皮细胞酪蛋白的分泌情况。在小鼠乳腺上皮细胞培养液中添加复方和5味主要单药提取物,研究其对乳腺上皮细胞活力及凋亡的影响。 试验结果如下: 本试验中,组织块培养与胰蛋白酶消化法相结合可获得良好的小鼠乳腺细胞原代培养物;培养的小鼠乳腺成纤维细胞比上皮细胞对胰蛋白酶更敏感,据此可在传代过程中将二者分离纯化,获得纯细胞系;混合培养物先用0.25%胰蛋白酶在37℃消化3~5 min所收集的细胞主要为成纤维细胞;再加0.25%胰蛋白酶消化液在37℃继续消化5~7 min,所回收的细胞绝大多数为上皮细胞,经过2~3代,即可得到纯化的乳腺上皮细胞系。 中药复方提取物在试验浓度下(1.6 mg·mL~(-1)~0.2 g·mL~(-1))表现为促增殖作用(P0.05),在浓度为0.2 g·mL~(-1)时促细胞增殖作用最为显著,随着药物浓度的降低,对细胞的作用不显著(P0.05)。 中草药重楼在高浓度(0.2 g·mL~(-1))时抑制乳腺上皮细胞增殖(p0.05),但随着浓度的降低(40 mg·mL~(-1),320μg·mL~(-1))又出现明显的促增殖作用(p0.05),而其对细胞的促增殖作用与浓度未表现出线性关系;木芙蓉在试验中出现两个抑制生长的浓度(0.2 g·mL~(-1),8 mg·mL~(-1))和两个促进生长的浓度(1.6 mg·mL~(-1),40 mg·mL~(-1)),且与对照组差异显著(P0.05),抑制峰与促生长峰值所在浓度十分靠近;单味中药泽兰叶,在低于40 mg·mL~(-1)浓度下均表现出显著的促进乳腺上皮细胞增殖的作用(P0.05),而在高浓度时(0.2 g·mL~(-1))表现出显著的抑制效果(P0.05);半枝莲在浓度为0.2 g·mL~(-1)时抑制作用明显(p0.05),但随着浓度降低(1.6 mg·mL~(-1)~8 mg·mL~(-1)),也表现出显著的促进作用(p0.05),峰值浓度为1.6 mg·mL~(-1);紫花地丁没有表现出显著的抑制生长作用,其促增殖浓度的峰值在40 mg·mL~(-1)左右(p0.05),随着浓度的降低,该促增殖作用逐渐变得不显著。 试验证实,上述中药复方以及单味中草药提取物在适当浓度下促进乳腺上皮细胞增殖,但药量过高或用药时间过长会抑制乳腺上皮细胞增殖。
【学位授予单位】:安徽农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:S853.7

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