收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

两种虫草无性型原生质体融合及蜂头虫草发酵条件的研究

陈晓琳  
【摘要】: 本文对古尼虫草小孢变种的无性型古尼拟青霉小孢变种蛋氨酸 缺陷型(G106M)和蜂头虫草的无性型蜂头层束梗孢(HS01)的原 生质体形成、再生条件和融合以及蜂头层束梗孢的发酵条件进行了 研究。主要内容包括:G106营养缺陷型的筛选;G106M和HS01 原生质体形成和再生最佳条件的确定;原生质体的融合;HS01发 酵条件的确定。 G106孢子悬浮液经紫外线处理90s后,培养12hr,滤除发芽 的菌丝体,再培养、过滤后,滤液用紫外线处理20s,可使突变率 增加4倍。对其中两株生长较好的突变株进行鉴定,结果为蛋氨酸 缺陷型(G106M)和亮氨酸缺陷型(G106L)。稳定性检验结果表明这两 株缺陷型均可作为原生质体融合时具有遗传标记的融合亲本。 酶解试验结果显示:G106M采用1%溶壁酶与1%蜗牛酶混合 液作为脱壁酶,0.6M的氯化钠为渗透压稳定剂,从摇床培养的16hr 菌龄的菌丝体,酶解1.5~2hrs后,产量可达3.74×1O~7/ml。HS01 采用3%溶壁酶作为脱壁酶,培养48hr菌龄的菌丝体,酶解3.5hrs 后,原生质体产量可达2.5×10~7/ml。 再生试验结果表明:G106M以培养12hr菌龄的原生质体在0.6M 氯化钠的SDAY培养基上再生率最高,为17.92%;HS01以48hr菌 龄的原生质体在添加 0.6M硫酸镁的黄豆粉培养基上再生率最高, 为0.4%;两个菌株原生质体液体再生率都高于固体再生率,分别 达31.245%和19%。 用助融剂PEG进行原生质体融合的结果表明这两个不同种的菌 株之间没有发生两套基因组间的接触和交换,从而没有发生基因的 遗传重组,实现基因杂交;它们之间可能存在着核质之间的不相容 性或者营养不亲和性。 通过对原生质体形成过程的观察发现,GI 06M原生质体形成有 三种形式,一种是菌丝顶端先膨大,然后释放出原生质体,二是从 菌丝的亚顶端或中部的侧壁形成;三是菌丝原位释放出原生质体。 而HS01 的原生质体形成只观察到两种方式,即顶端释放和原位释 放。原生质体的再生方式有两种,一种是原生质体直接萌发长出芽 管,然后形成菌丝体,另一种是原生质体形成酵母状物,然后形成 菌丝。在原生质体再生形态观察时发现,凡是没有再生的原生质体 往往是单个分散的,凡是密集在一起的原生质体,其再生都比较整 齐。 在供试的7种碳源和7种氮源中,HS01对白砂糖和黄豆粉的 利用最好。进一步的正交试验确定了最佳培养基组成为:白砂糖 3%,黄豆粉 3%,复合维生素 B 31.4mg几。非营养性因子中研究了 起始pH、装液量和接种时菌体形态。结果表明最佳条件为:起始pH 为 6.8,适宜装液量为 60ml/250ml三角瓶,接种菌体形态为被高度 分散的菌球。 HS01 放大培养结果显示:该菌不太适宜在机械搅拌罐中进行 深层发酵。在7升气升式发酵罐进行深层发酵,能使发酵周期大为 缩短,可在144b出罐,干菌丝收获量为28.兆会‘Lc本文还对发酵 过程中的pH、还原糖及总氮量的变化进行了研究。 成分分析试验结果表明:HS01菌丝体中氨基酸种类和冬虫夏草 生药一致,但氨基酸总量和人体所必需氨基酸总量明显高于冬虫夏 草生药。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 钱敏;曾纬;张德利;;冬虫夏草RAPD多态性分析[J];时珍国医国药;2011年07期
2 ;[J];;年期
3 ;[J];;年期
4 ;[J];;年期
5 ;[J];;年期
6 ;[J];;年期
7 ;[J];;年期
8 ;[J];;年期
9 ;[J];;年期
10 ;[J];;年期
11 ;[J];;年期
12 ;[J];;年期
13 ;[J];;年期
14 ;[J];;年期
15 ;[J];;年期
16 ;[J];;年期
17 ;[J];;年期
18 ;[J];;年期
19 ;[J];;年期
20 ;[J];;年期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 梁宗琦;刘爱英;董熙昌;李淑芳;;古尼虫草的应用价值评估[A];《中国虫生真菌研究与应用》(第二卷)[C];1991年
2 雷帮星;康冀川;梁宗琦;税小波;谭艾娟;张倩;;古尼虫草镇痛组分研究[A];中国菌物学会2009学术年会论文摘要集[C];2009年
3 曾冬;郭力;周静波;王颖;陈佳江;邹一可;;虫草染色化学物质的初步研究[A];2008年成渝药学学术年会论文集[C];2008年
4 梁宗琦;;我国虫草属真菌研究开发的现状及思考[A];面向21世纪的科技进步与社会经济发展(上册)[C];1999年
5 刘作易;梁宗琦;刘爱英;喻子牛;;虫草属真菌分子系统学研究[A];加入WTO和中国科技与可持续发展——挑战与机遇、责任和对策(上册)[C];2002年
6 韩燕峰;梁宗琦;初华丽;刘爱英;;拟青霉Paecilomyces Bain.,一类值得关注的真菌资源[A];中国第六届海峡两岸菌物学学术研讨会论文集[C];2004年
7 雷帮星;康冀川;何劲;文庭池;潘丽丽;;四种虫草菌丝体中腺苷和虫草菌素含量的研究[A];中国菌物学会第五届会员代表大会暨2011年学术年会论文摘要集[C];2011年
8 谷桓生;梁曼逸;赵国莉;赵玉明;;吉林省虫草种类调查初报[A];中国虫生真菌研究与应用[C];1991年
9 章卫民;李泰辉;李小康;徐学平;钟韩;;南岭及鼎湖山两自然保护区的虫草资源调查[A];《中国虫生真菌研究与应用》(第四卷)[C];1996年
10 李春如;;近十年虫草无性型研究进展[A];《中国虫生真菌研究与应用》(第五卷)[C];2003年
中国博士学位论文全文数据库 前3条
1 肖建辉;虫草发酵及其代谢产物的分离与生物活性研究[D];华东理工大学;2010年
2 刘作易;虫草属及其无性型关系研究[D];华中农业大学;1999年
3 陈璐;名贵中药冬虫夏草特征性蛋白质成分与鉴定方法研究[D];成都中医药大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 陈晓琳;两种虫草无性型原生质体融合及蜂头虫草发酵条件的研究[D];安徽农业大学;2001年
2 李电;古尼虫草液体发酵和多糖提取及其抗肿瘤活性研究[D];吉林大学;2011年
3 孟祥贤;古尼虫草生物学特性及其生理活性物质的研究[D];湖南师范大学;2001年
4 傅岚;古尼虫草液体深层发酵及化学成分的研究[D];湖南师范大学;2004年
5 张永明;古尼虫草益智作用及其活性物质的相关性研究[D];贵州大学;2007年
6 梅德强;古尼虫草菌丝发酵工艺优化及其多糖对肿瘤细胞免疫抑制因子的影响[D];贵州大学;2006年
7 黄华玮;保护血管内皮细胞的食药用真菌粗提物筛选及对高糖损伤内皮的保护作用[D];福建医科大学;2012年
8 杨柏松;长白山虫草属(Cordyceps Fr.)真菌物种多样性及保育生物学研究[D];吉林农业大学;2004年
9 方士英;虫草多糖对实验性肝损伤的作用及部分作用机制研究[D];安徽医科大学;2004年
10 鲁超;虫草多糖对非酒精性脂肪性肝炎的预防作用及部分机制研究[D];安徽医科大学;2005年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978