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《安徽农业大学》 2003年
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石榴品种(系)选育和再生体系建立及RAPD条件优选

张水明  
【摘要】: 本文从石榴种质资源的调查、品种的选育、安徽省各主栽品种的经济性状分析、离体再生体系的建立、基因组DNA的提取以及RAPD反应条件优选等方面对石榴进行了系统的研究,结果如下: 通过对安徽省石榴种质资源的实地调查和田间栽培育种试验,筛选出三白石榴大果大子粒变异新品系“皖榴1号”;玛瑙籽大子粒着色新品系“皖榴2号”和玉石籽大子粒着色新品系“皖榴3号”。几年来的试验研究结果表明,变异母株及其无性系后代的遗传性状表现稳定,综合经济性状优异。 根据模糊数学基本原理,测定了安徽省主栽的23个石榴品种类型的产量、品质、成熟期、耐贮性、抗逆性等15个经济性状,对分析的品种经济性状表现优劣进行了综合评判,结果表明,皖榴三号、皖榴二号、玛瑙籽综合经济性状比较好;淮北软籽五号、中厚皮玉石籽、皖榴一号、厚皮玉石籽、大笨子、二笨子、火葫芦二号、三白石榴次之;薄皮糙、薄皮玉石籽、青粉皮一号、大果粉皮、淮北大青皮、美人蕉、黄里石榴、红粉皮二号、青皮糙一般;火葫芦、红粉皮三号、红粉皮一号较差。根据评判结果,笔者认为:安徽省发展石榴生产,早熟品种应以皖榴二号和玉石籽系列为主,其成熟期在9月15日左右,能满足中秋、国庆两节的市场需求,且综合经济性状较好;中熟品种以皖榴三号、玛瑙籽和皖榴一号为主,其中皖榴一号百粒籽重较为突出,平均达84.4g,大者超过100g,但由于其不耐贮藏,可适度发展;晚熟品种则以大笨子、二笨子为主;粉皮系列可逐步淘汰。各地应结合自身情况及市场行情合理搭配各类型品种。 通过对石榴休眠枝、成熟叶片及当年生新梢离体培养研究,建立了石榴组织器官离体培养再生体系。试验表明,休眠枝茎段培养,以MS为基本培养基,附加2.0mg/L BA+1.0mg/L GA,接种培养20天后,愈伤组织形成,继续培养15天后,愈伤组织上分化出不定芽;以成熟叶片为外植体,在MS中附加5mg/L BA+0.1mg/L NAA,培养25天后形成愈伤组织,继续培养20天后,愈伤组织上分化出不定芽;当年生新梢茎段培养,以MS+2.0mg/L BA+0.3mg/L NAA对茎段腋芽的增殖最适宜,平均每35d可增殖4.9倍;石榴试管芽苗诱导生根,用1/2MS为基本培养基,附加0.5mg/L NAA+0.1mg/L AC+20g/L蔗糖,接种10天后,生根率达95.8%,平均生根数为5.6条。另外,在培养基中附加0.1%AC, 对吸附酚类物质、防止外植体褐变、促进生札均有显著秃粟。 以石榴不同品系的成熟叶片和幼叶为材杠,采用SDS法提取基因组DNA,比较了不 同材料的提取效果,并以此为模板进行RAPD R应,优化”RAPD反应条件。试验表明, 用幼叶能提取高质量的基因组DNA,A260/A280=1.88,可亘接用于RAPD分析,而成熟叶 片由于酚类、丹宁、色素和多糖等物质的含量较高,对Taq酶的活性起抑制作用。这些 次生物质在植物生长的不同时期含量不同,一般幼嫩的组织器官含量较少,而成熟或老 化的组织器宫含量较多,所以用成熟叶片虽能提取到基因组DNA,但不能直接用于RAPD 分析。优化的 RAPD反应体系为:反应体积 SC ul,包含 8川g左右模板 DNA、5 ul市售 10 X PCR Buffer、2.ommol/L MgCI;、120 u m。1/L dNTPs、3U的 Taq酶、0.5卜。。1几 随机引物;热循环程序为94C预变性smiD。便模板DNA充分变性,然后进入下列温度循 环,94℃变性30see,36℃退火45 see,72OC延伸lmin30 see,循环数40,最后72 oC延伸7m1n。
【学位授予单位】:安徽农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:S665

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