收藏本站
《安徽农业大学》 2005年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

茶氨酸和茶氨酸合成酶活性的毛细管电泳检测及酶学研究

李平  
【摘要】:茶氨酸是一种非蛋白质氨基酸,它在茶树新梢鲜叶的含量占茶叶干物质的1.2%-2.0%。迄今为止,茶氨酸仅被发现存在于山茶科植物和一种蕈体内,是具有生物活性的次生代谢产物。茶氨酸除了在生物体内发挥重要的生理、生化功能外,对人和动物还具有很好的保健功能和药理作用,因此不仅可以作为食品和保健品中的添加剂,而且在医药行业有潜在的应用前景。 在茶氨酸的测定、提取、分离、制备、合成和实际应用等方面已经取得了一些成果。1993 年 Abelian V.通过酶发酵法成功地实现了茶氨酸的工业化大规模生产,但所用的酶对乙胺的亲和力较低而导致了产物中的乙胺残留。为了从根本上解决茶氨酸的生物合成问题,探讨与茶氨酸合成关系密切的酶--茶氨酸合成酶尤显重要。早在1963 年 Sasaoka K.等就发现了该酶,并从生物化学角度作了较为系统的研究。但在随后的 40 多年里茶氨酸合成酶的研究报道甚少,尤其茶氨酸合成酶分子生物学的信息几乎没有。为了探讨茶氨酸在茶树体内的生物合成的调控机理,指导茶树的分子育种,探索茶氨酸生物合成的新途径,构建生产茶氨酸的工程菌,更好地开发茶氨酸在食品和医药上的功效,本论文主要在茶氨酸及其合成关键酶的检测和初步纯化等方面开展了一系列工作。 研究了茶籽的培育条件,从不同组织中分离、提取茶氨酸合成酶,并初步探讨一些理化因素对茶氨酸合成酶表达的诱导作用。试验发现以沙子为载体,茶籽在 20℃条件下培育 2 周时生长最好。通过制备丙酮粉,利用丙酮和硫酸铵沉淀法,从不同组织部位中提取茶氨酸合成酶。证实了丙酮粉粗酶液中,茶苗根中的茶氨酸合成酶活性约为茶籽苗和茶树鲜叶的 7.1 倍,而其蛋白质含量仅为后两者的 1/4。运用水杨酸浸泡、避光培养处理茶籽,茶苗表现出最高的茶氨酸合成酶活性,为自然光条件下培育的茶籽苗中的酶活的 4.7 倍,说明避光和水杨酸对茶氨酸合成酶表达具有诱导作用。 建立了胶束电动力学毛细管电泳技术定量茶氨酸的新方法,比国内目前报道的其它方法快速、准确、经济、自动化程度高。试验以 2,4-二硝基氟苯为衍生化试剂,在 50℃的 pH 9.5 硼酸缓冲液中作用 25min 后可以得到较稳定的在 360nm 处有最大吸收峰的衍生化产物。研究了影响毛细管电泳分离效果的主要因素,确立了毛细管电泳分离的最佳条件:以 0.03mol/L pH9.8 四硼酸钠为电泳缓冲液,内含 2.5%的 Brij35和 15%的异丙醇,压力进样时间为 5s,分离电压为 28kV,分离温度为 17℃,分离用
【学位授予单位】:

知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 廖凤贤;黎佳佳;余舜武;;CEL I酶的高效检测及其在Eco-TILLING中的高效应用[J];现代农业科学;2009年01期
2 王永芬;索江华;李华玮;吴学军;张俊英;;猪血超氧化物歧化酶联合提取工艺及其活性检测研究[J];安徽农业科学;2009年23期
3 王衡;刘博奇;尹航;唐丽;任晓峰;李广兴;;抗鸡传染性支气管炎病毒多克隆抗体的制备及其生物活性的鉴定[J];中国畜牧兽医;2010年01期
4 胡海艳;黄雅莉;梁志洲;周世宁;;工程菌所产黑色素对苏云金芽孢杆菌毒力的保护作用[J];农药学学报;2011年02期
5 王路迪;周一凡;刘春晓;贾凌云;;一种新的凝血酶活性检测方法[J];沈阳农业大学学报;2010年05期
6 昔奋攻;赵春江;李宁;吴常信;;人肥胖基因在大肠杆菌中的表达及生物学活性检测[J];农业生物技术学报;2006年01期
7 齐珂珂;康相涛;李国喜;孙桂荣;田亚东;韩瑞丽;;鸡白细胞中抗菌肽的分离纯化及活性鉴定方法的建立[J];西北农林科技大学学报(自然科学版);2008年09期
8 李蕾;朱道立;;家兔肌酸激酶的分离纯化和测定[J];安徽农业科学;2008年30期
9 何士敏;方平;周先容;唐飞;;豌豆种子萌发过程中脲酶活性的检测[J];种子;2010年05期
10 田虹;靖涛;;大鼠股骨成骨细胞的提取、鉴定及活性检测[J];广东农业科学;2010年10期
11 李银聚;吴庭才;张春杰;程相朝;刘一尘;王臣;赵战勤;;鸡IL-2基因在输卵管上皮细胞中的表达及其活性检测[J];药物生物技术;2009年05期
12 孔庆新;祝冬青;;高粱种皮中原花青素的提取及其活性研究[J];粮食与饲料工业;2010年01期
13 李春干,谭必增;历史调查数据参与森林调查因子遥感定量估测的研究[J];林业资源管理;2003年01期
14 王凤龙,银梅,日穆德玛;鸡肿瘤坏死因子的诱生及活性检测[J];动物医学进展;2003年05期
15 李平,宛晓春,李健,张正竹,沈佐君;茶氨酸的衍生化及毛细管电泳定量技术[J];茶叶科学;2004年02期
16 郁志宏,倪志华,李海军,张晓芳;机器视觉技术在禽蛋品质和孵化成活性检测中的应用[J];内蒙古农业大学学报(自然科学版);2004年03期
17 黄跃才;章桂明;刘作易;程颖慧;王颖;陈洪俊;;大豆猝死综合症病菌枝状镰孢的活性检测研究[J];菌物学报;2009年02期
18 赵盼;唐顺明;刘挺;覃光星;郭锡杰;;家蚕浓核病毒镇江株非结构蛋白2(NS2)的表达及活性研究[J];中国农业科学;2009年06期
19 廖娟;王红宁;田浪;张毅;;禽传染性支气管炎病毒M基因在毕赤酵母中表达与蛋白反应活性检测[J];中国兽医学报;2009年11期
20 朱桂艳;鱼粉检杂显微镜计数定量法探讨[J];黑龙江粮油科技;2001年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 岳凤鸣;杨慧;高福禄;赵焕英;赵春礼;徐群渊;;人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)的克隆,表达及活性检测[A];解剖学杂志——中国解剖学会2002年年会文摘汇编[C];2002年
2 胡晶雯;;合理定量的浮动机制[A];上海市烟草系统2010年度优秀学术论文集(经管类)[C];2011年
3 赵焕英;杨慧;岳凤鸣;苏月;张宇新;赵春礼;徐群渊;;人胚胎脑多巴胺D_2受体(D_2R)基因的克隆、表达及活性检测[A];解剖学杂志——中国解剖学会2002年年会文摘汇编[C];2002年
4 常毅娜;鞠现霞;崔琴;王坤林;周红文;;α-半乳糖苷酶A活性检测及临床意义[A];中华医学会第十次全国内分泌学学术会议论文汇编[C];2011年
5 周宇飞;袁汉英;吕红;;人超氧化物歧化酶-胸腺素α1在毕赤酵母中的表达、纯化与活性检测[A];2012年中国青年遗传学家论坛会议文集[C];2012年
6 何玮璇;习欠云;江青艳;张永亮;;β-1,3-1,4葡聚糖酶在CHO细胞中表达及活性检测[A];全国动物生理生化第十一次学术交流会论文摘要汇编[C];2010年
7 陈定虎;王锡锋;李莉;周广和;;酵母表达美洲商陆抗病毒蛋白的活性检测[A];中国植物病理学会第七届代表大会暨学术研讨会论文摘要集[C];2002年
8 胡文革;郝凤霞;陈创夫;曹旭东;王远志;;准噶尔雅罗鱼β-actin基因启动子的克隆和序列分析以及活性检测[A];中国鱼类学会2008学术研讨会论文摘要汇编[C];2008年
9 谭兵;王红宁;;鸡粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因克隆、真核表达及活性检测[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十四次学术研讨会论文集[C];2008年
10 马高峰;张振书;陈学清;;重组hGM-CSF在乳酸链球菌中的表达及其活性检测[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编(上册)[C];2007年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 英国《金融时报》;定量宽松要来第三轮?[N];世界报;2011年
2 王松苗;责任“定量” 私企之路海阔天空[N];检察日报;2000年
3 本报记者 孙萌萌;定量宽松:射向中国的“经济霰弹”[N];人民政协报;2010年
4 晓文;降低成本 降低定量[N];中国包装报;2001年
5 靳元祥;中年人定量进食注意“四原则”[N];中国食品报;2010年
6 一德研究院 贾秋翌;新的定量宽松恐难使美国解“困”[N];期货日报;2010年
7 卜晓明;“定量宽松”再二还再三?咱们通胀就更难治了[N];新华每日电讯;2011年
8 中国国土资源经济研究院 侯华丽 孟旭光;地耗定量:变被动节约为主动挖潜[N];中国国土资源报;2011年
9 本报记者 闫巍 见习记者 朱振华;电子定量:传统行业的华丽转身[N];粮油市场报;2011年
10 浙江理工大学服装设计系主任 赵伟国;设计可以定量[N];中国服饰报;2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李平;茶氨酸和茶氨酸合成酶活性的毛细管电泳检测及酶学研究[D];安徽农业大学;2005年
2 陈琪;茶树体内茶氨酸合成酶的克隆与异源表达及一氧化氮信号对其调控的研究[D];安徽农业大学;2011年
3 芦永军;近红外光谱分析技术及其在人参成份分析中的应用研究[D];中国科学院研究生院(长春光学精密机械与物理研究所);2005年
4 刘军;罗氏沼虾两种不同的热休克蛋白70分子生物学特征和功能[D];浙江大学;2005年
5 王立新;草鱼MyoD基因cDNA克隆和表达研究[D];西北农林科技大学;2005年
6 印其友;小儿先天性胆管扩张症胆汁和血清胆汁酸代谢的研究[D];复旦大学;2005年
7 薛兴亚;复杂未知样品气相色谱分离分析理论基础研究[D];中国科学院研究生院(大连化学物理研究所);2004年
8 韩琤波;线粒体DNA损伤与胃癌发生及相关机制的研究[D];中国医科大学;2005年
9 孙健;黄连解毒汤抗肿瘤活性成分及作用机制研究[D];吉林大学;2006年
10 付广;泥质岩盖层对各种相态天然气封闭机理及其定量研究[D];大庆石油学院;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 刘征;Chediak-Higashi综合征的临床特征和基因诊断[D];重庆医科大学;2011年
2 张蓓笑;重组牛生长激素缓释制剂的活性检测及动物体内释放规律研究[D];南京农业大学;2007年
3 张东;猪链球菌潜在毒力因子SsnA和ADS的分子生物学研究[D];西南大学;2007年
4 姚英豪;定量PCR仪荧光检测系统研究[D];浙江大学;2011年
5 刘自强;LF炉定量加料系统优化控制方法及实现研究[D];东北大学;2009年
6 王剑峰;洪水超定量序列频率分析计算[D];西北农林科技大学;2010年
7 田文洪;一种新的miRNA活性检测方法研究[D];中国疾病预防控制中心;2010年
8 李公祥;荧光定量PCR检测HPVDNA与宫颈癌的相关研究[D];青岛大学;2005年
9 杨珺;股份制商业银行基于关键利益相关者决策模型分析[D];南京理工大学;2005年
10 黄世容;HrpN基因在毕赤酵母中的克隆表达与活性检测[D];武汉大学;2005年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978