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《安徽农业大学》 2007年
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磷脂酶C高产菌株的筛选、鉴定和培养条件的优化研究

高林  
【摘要】: 本论文通过从全国各地进行广泛采样,分离和筛选出磷脂酶C(phospholipaseC,简称PLC)产量高、抗血小板功能强的微生物菌种,在此基础上对其进行种类鉴定,同时,还对产酶条件以及所产磷脂酶C的理化特性进行了研究,从而为今后将磷脂酶C研制开发成抗血小板聚集一类新药打下坚实的实验基础。 一、本研究采用的主要方法如下: 1.菌种分离采用卵黄琼脂LB平板分离法: 2.菌种筛选采用卵黄硼砂平板酶活定性检测、菌体生物量和用对硝基磷酸胆碱(p-nitrophehylphosphoryl-choline,简称NPPC)作为磷脂酶C的作用底物进行酶活定量检测以及抗血小板聚集率等多指标多轮次筛选。 3.菌种的分类鉴定采用菌株的个体形态学特征和群体形态学特征、生理生化特性及16S rRNA序列等依据进行。 4.培养条件的优化实验采用正交实验方法。主要考虑培养基、接种量、培养温度、培养时间及摇床转速等对磷脂酶C产酶活水平的影响。 5.磷脂酶C分子量测定采用不连续SDS-PAGE法。 6.磷脂酶C酶活力测定采用卵黄硼砂平板法和NPPC法。 7.磷脂酶C溶血活性测定采用血平板法。 二、主要实验结果如下: 1.从1268份土样中筛选获得了4株新的高产磷脂酶C优良菌株,分别将其分类鉴定为:Bacillus cereus Shenzhen 754-1、B.mycoides Shenzhen 779、B.mycoidesShenzhen 970和B.mycoides Shenzhen 1107。 2.B.cereus Shenzhen 754-1摇瓶培养产磷脂酶C的最佳产酶条件为:培养基(1%蛋白胨,0.3%牛肉膏),培养温度28℃,培养时间12h,接种量0.5%,转速200r/min。在此培养条件下,B.cereus Shenzhen 754-1磷脂酶C的产酶水平达到26U/ml。 3.纯化的磷脂酶C样品分子量为75100 Da,对热较敏感,70℃水浴处理5min即可使酶全部失活。 4.该纯化的磷脂酶C样品在血平板上不表现任何的溶血活性。在NPPC反应系统中表现出的酶反应最适温度为60℃,最适pH值在pH7.0-7.2左右。 5.通过本课题的研究,获得了4株新的高产磷脂酶C菌株,其中的B.cereusShenzhen 754-1产磷脂酶C水平超过了国内外文献报道的最高产酶水平。其所产磷脂酶C的特性与其它微生物磷脂酶C的特性不同。
【学位授予单位】:安徽农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:Q93

【引证文献】
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1 赵金星;张梁;顾正华;丁重阳;石贵阳;;重组大肠杆菌表达铜绿假单胞菌溶血性磷脂酶C[J];微生物学报;2013年03期
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1 司武阳;磷脂酶A1产生菌的选育[D];安徽工程大学;2010年
2 詹逸舒;产磷脂酶C菌株的筛选及其酶学性质的研究[D];湖南农业大学;2010年
3 刘菲菲;微生物产磷脂酶C的筛选、发酵优化及重组表达[D];江南大学;2012年
【参考文献】
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1 宋颖琦;杨谦;;磷脂酶在植物逆境胁迫信号传导中的作用[J];哈尔滨工业大学学报;2006年02期
2 吴昆;1991~1993年深圳特区50岁以上人群死因分析[J];河南预防医学杂志;1995年02期
3 舒勤;通州区1994~1997年人群死因分析[J];疾病监测;1998年12期
4 吴士尧;抗血小板药物的临床应用及其发展趋势[J];中国临床药学杂志;2005年04期
5 曹栋,裘爱泳,王兴国;磷脂及磷脂酰胆碱生物学功能[J];粮食与油脂;2002年11期
6 李严,张英华,王琛,安学勤;磷脂酶A_2水解卵磷脂研究的新方法[J];南京师大学报(自然科学版);2003年03期
7 庄颖,郑锦华;蚌埠市西区居民死因资料分析[J];中国全科医学;2001年02期
8 杨菊贤,殷兆芳;心血管疾病的危险因素与冠心病的预防分级[J];上海预防医学杂志;2005年01期
9 邢东琦,白桦,马铁民,吴立玲;Gαq/11介导的细胞信号转导在两肾一夹肾性高血压大鼠主动脉中的变化[J];生理学报;2001年06期
10 许霖水;;磷脂酶C家族与跨膜信号传递[J];生命的化学(中国生物化学会通讯);1992年04期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 和智君,汪旭;阿托品对中国仓鼠V79细胞有丝分裂过程的影响[J];癌变.畸变.突变;1999年03期
2 徐忠东,彭景中;线粒体与细胞凋亡[J];安徽教育学院学报;2001年06期
3 李桂霞;马汇泉;刘婧;董瑾;;番茄灰霉病高效拮抗菌株鉴定及抗菌活性研究[J];山东农业科学;2007年02期
4 解永梅;张成玲;赵永强;张薇;张广民;;山东省大白菜黑腐病病原的鉴定及其生物学特性的研究[J];山东农业科学;2007年06期
5 姚良同;丁延芹;刘尧;陈一然;杜秉海;李俊;;玉米秸秆低温快速腐熟菌的筛选、鉴定及效果试验[J];山东农业科学;2008年03期
6 朱彭玲;陈强;丁延芹;姚良同;杜志兵;王晶;杜秉海;;新疆地区棉花根际拮抗菌的筛选与鉴定[J];山东农业科学;2008年06期
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10 凌晨;刘波;;2,4,6-三溴苯酚降解菌的筛选[J];安徽化工;2012年03期
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1 窦瑞木;雷清泉;张改强;;番茄内生细菌TB-2生化特性及对番茄灰霉病菌的抑制作用[A];经济策论(上)[C];2011年
2 刘春;;鳢舒伯特气单胞菌内脏类结节病的研究[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
3 马镝;;产壳聚糖酶菌株的筛选、鉴定及抑菌活性研究[A];科学发展与社会责任(A卷)——第五届沈阳科学学术年会文集[C];2008年
4 徐超;周波;王晓红;谭冬梅;刘艳;郭连营;张卓;;钙摄入量对高胆固醇血症女性血脂影响的实验研究[A];中国营养学会第十次全国营养学术会议公共营养分会论文集[C];2008年
5 黄华伟;王印庚;陈霞;张凤萍;;渡夏期养殖刺参腐皮综合征的发生与环境因子间的关系[A];农产品质量安全与现代农业发展专家论坛论文集[C];2011年
6 朱利林;黄俊生;;香蕉枯萎病拮抗芽孢杆菌的筛选与鉴定[A];植保科技创新与病虫防控专业化——中国植物保护学会2011年学术年会论文集[C];2011年
7 王永;;三种药物治疗奶牛附红细胞体病疗效的比较分析[A];中国畜牧兽医学会家畜内科学分会第七届代表大会暨学术研讨会论文集(下册)[C];2011年
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1 王常高;李伟;干信;陈涛;;Bacillus mycoides磷脂酶C纯化制备研究[J];安徽农学通报;2007年08期
2 李立,傅景海;大豆磷脂的生理效用[J];大豆通报;1999年06期
3 宋玉卿;于殿宇;罗淑年;王世让;;大豆磷脂改性技术综述[J];大豆通报;2007年04期
4 侯云霞,罗深秋,冀群升;磷脂酶C-γ1在人胚组织中的表达[J];第一军医大学学报;2001年12期
5 沈齐英,刘录,申林波;紫外诱变选育高效降酚微生物[J];环境科学与技术;2004年01期
6 高永琳,郑大利,何艳,林德馨;C_2-神经酰胺诱导肝癌细胞凋亡[J];福建医科大学学报;2003年02期
7 曹瑞华,温海;新生隐球菌磷脂酶的研究进展[J];国外医学.皮肤性病学分册;2002年05期
8 王晓亮;彭志海;;磷酯酶C家族新成员—磷酯酶CE1[J];医学分子生物学杂志;2008年04期
9 侯丽莉,陈肖华;酸性神经鞘磷脂酶的生物学特性及其功能[J];国外医学(放射医学核医学分册);2005年01期
10 居乃琥;21世纪酶工程研究的新动向[J];工业微生物;2001年01期
中国硕士学位论文全文数据库 前4条
1 孙万成;固定化磷脂酶A_1、酶法改性卵磷脂及溶血磷脂微乳化性能研究[D];暨南大学;2004年
2 李彩风;哈维氏弧菌磷脂酶C的分离纯化及性质研究[D];中国海洋大学;2006年
3 杨宁;蜡样芽孢杆菌754-1株磷脂酶C基因的克隆、测序及表达[D];华中农业大学;2006年
4 詹逸舒;产磷脂酶C菌株的筛选及其酶学性质的研究[D];湖南农业大学;2010年
【二级引证文献】
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1 赵金星;张梁;顾正华;丁重阳;石贵阳;;大肠杆菌重组表达磷脂酶C的发酵工艺优化[J];食品科学;2013年09期
2 刘菲菲;张梁;顾正华;丁重阳;石贵阳;;蜡状芽孢杆菌磷脂酶C基因在大肠杆菌中的异源表达[J];食品科学;2013年11期
3 赵金星;张梁;顾正华;丁重阳;石贵阳;;重组大肠杆菌表达铜绿假单胞菌溶血性磷脂酶C[J];微生物学报;2013年03期
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1 刘菲菲;微生物产磷脂酶C的筛选、发酵优化及重组表达[D];江南大学;2012年
2 方春雷;植物纤维废渣生物法生产燃料乙醇中试技术研究[D];山东轻工业学院;2011年
3 赵梦梦;磷脂酶A1高产菌株的选育及其油脂脱胶性能初步研究[D];安徽工程大学;2012年
【二级参考文献】
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1 安广宇,王兆钺,阮长耿;血小板糖蛋白Ⅱb-Ⅲa受体拮抗剂及其临床应用[J];国外医学(内科学分册);2000年08期
2 曹鸿鹏,乔善义;对阿昔单抗在血管成形术中的评价[J];国外医学.药学分册;1999年05期
3 杨学义;抗血小板药物的临床应用[J];中国临床医学;1999年01期
4 凌关庭;从卵磷脂商品看中国保健食品市场培育和发展[J];粮食与油脂;2000年03期
5 孔灵芝;慢性非传染性疾病流行现状、发展趋势及防治策略[J];中国全科医学;2001年12期
6 杨菊贤,殷兆芳;原发性高血压危险因素的干预[J];上海预防医学杂志;2004年01期
7 ;应用阿司匹林和口服新的有效的抗血小板药治疗心梗后患者[J];天津医药;1999年06期
8 宋建华,童骁,陈明锴,苏垒,田华,孙松柏,陈涛;一株高产PLC的CW-W-90-3菌的鉴定[J];微生物学杂志;2002年02期
9 陈莉延,梁标;磷脂酶A_2的研究进展[J];国外医学(生理、病理科学与临床分册);2000年06期
10 王薇,赵冬,吴兆苏,姚丽,周美然;北京地区70万人群急性冠心病事件发病死亡趋势八年(1985-1992)的城乡对比分析─MONICA方案研究结果[J];心肺血管病杂志;1995年01期
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1 李夏兰;胡雪松;范韵敏;方柏山;;一株产阿魏酸酯酶青霉菌株的筛选、鉴定及生长特征[J];微生物学通报;2010年11期
2 ;降解DNA为5′-脱氧单核苷酸的菌种筛选[J];微生物学报;1975年04期
3 徐美娟;饶志明;沈微;方慧英;诸葛健;;一株以甘油为底物产二羟丙酮(DHA)微生物菌种的筛选及鉴定[J];微生物学通报;2008年03期
4 贺东生,刘福安,宋长绪,王星;新城疫病毒融合蛋白基因片段的构建与鉴定[J];中国兽医科技;1998年08期
5 谈华,李希娟,姜萍;骨的成分及物理性质鉴定实验研究[J];高师理科学刊;1998年04期
6 马成新,焦鹏,胡江春,薛德林,王书锦;蛭弧菌J26发酵生产维生素C前体产物的鉴定[J];微生物学杂志;1998年03期
7 蔡增林,陶三菊,范永星,陈伯权,解志刚,杨冬荣;从背点伊蚊体内检出Colti病毒[J];微生物学杂志;1998年03期
8 王长军,潘秀珍,李先富,唐家琪;微波介导的载体快速转化及克隆筛选方法[J];生物技术通讯;1998年02期
9 王旭珍,张秀香,徐士良;刺参酸性粘多糖的分离及鉴定[J];烟台师范学院学报(自然科学版);1999年03期
10 李秦,金昌德,李六金,张海,师长宏,赵世君;犬腺病毒Ⅰ型流行毒株的分离与鉴定[J];第四军医大学学报;2000年06期
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1 刘清津;叶俊华;杨松涛;夏咸柱;谌南辉;;犬细小病毒NJ-04株的分离与初步鉴定[A];第十三次全国养犬学术研讨会论文集[C];2009年
2 梁莉;李荣富;张来生;樊强;米志恒;;薄皮甜瓜早熟种质资源鉴定与筛选[A];中国园艺学会第七届青年学术讨论会论文集[C];2006年
3 段莎丽;孙亚琴;伍阳;龙用波;谢晴;邓仕槐;;两株耐碱性亚硝化细菌的初步鉴定和特性研究[A];第二届全国农业环境科学学术研讨会论文集[C];2007年
4 李月红;;嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)的分离培养和鉴定[A];吉林省畜牧兽医学会2007学术年会论文集[C];2007年
5 马艳;和春英;罗琼;赵雁;曾千春;张陶;张中义;;中国炭疽菌属(Colletotrichum)的分类研究Ⅳ[A];中国植病、菌物学会杭州联合年会论文集[C];2008年
6 伍诚意;步卫东;陈小玲;王小莺;季海峰;;一株副猪嗜血杆菌的分离鉴定[A];中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会论文集[C];2008年
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8 郝运申;;误服甲醛中毒致死1例[A];广东省法医学会成立两周年暨学术交流会论文集(2)[C];2004年
9 游银伟;尤升波;岳寿松;;产角蛋白酶芽孢菌YYW-1的鉴定及产酶性质分析[A];中华预防医学会微生态学第二届特种医学暨河南省、山东省预防医学会微生态学学术研讨会论文集[C];2006年
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1 李新龙;广济药业实现天然色素规模化生产[N];湖北日报;2007年
2 本报记者 阿荣;“金双歧”之父[N];内蒙古日报(汉);2008年
3 本报记者 史文婕;李东:逆境中成长[N];北京科技报;2005年
4 郑伟;生物法脱除废水氨氮技术可望应用[N];中国化工报;2008年
5 石磊;生物法脱除废水氨氮技术通过评议[N];医药经济报;2008年
6 华南理工大学食品学院 郑建仙;乳链球菌素发酵法生产的关键技术(上)[N];中国食品报;2008年
7 王占武;降低饲料成本棉粕可代豆粕[N];河北科技报(农村版);2000年
8 孙加平 记者  于忠斌 孙昊;本源微生物技术取得新突破[N];黑龙江日报;2006年
9 本报记者  李忠峰;三大难题困扰我国益生菌乳制品市场[N];市场报;2006年
10 记者 满学杰;新型采油术 老井产量增[N];新华每日电讯;2001年
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1 渠慎春;转番茄铁载体蛋白基因(LeIRT2)八棱海棠的鉴定[D];南京农业大学;2005年
2 黄晓琴;山东茶树冰核细菌的分离、鉴定及其与霜冻害关系研究[D];山东农业大学;2009年
3 苏永春;表皮生长因子受体介导肌醇磷脂水解信号通路的模型研究[D];第一军医大学;2004年
4 王海英;缺磷胁迫导致高等植物叶片中磷脂酰甘油(PG)含量降低的机理研究[D];中国科学院研究生院(植物研究所);2005年
5 常维山;肾型鸡传染性支气管炎病毒的鉴定及其S_1基因核酸分析[D];南京农业大学;1997年
6 吴利先;屎肠球菌毒力基因hyl的鉴定和功能研究[D];重庆医科大学;2007年
7 沈继红;融合微藻Tetraselmis sp.-1的鉴定、培养及动力学研究[D];青岛海洋大学;2002年
8 王鹏;一种耐药变形杆菌的分离、鉴定及其免疫学效应的实验研究[D];第一军医大学;2007年
9 刘迎春;成年绒山羊皮肤干细胞的分离、纯化、鉴定与诱导[D];内蒙古农业大学;2007年
10 郝志敏;玉米大斑病菌G蛋白和磷脂酶C基因的克隆与功能分析[D];河北农业大学;2008年
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1 高林;磷脂酶C高产菌株的筛选、鉴定和培养条件的优化研究[D];安徽农业大学;2007年
2 张雨;木材蓝变菌的分离及其控制菌种的筛选与对蓝变菌拮抗性的研究[D];广西大学;2008年
3 周玉长;中国1995~2004年鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定及致病性研究[D];中国农业科学院;2006年
4 戚亭;两株猪细小病毒的分子特征及其主要蛋白的原核表达[D];中国农业科学院;2008年
5 王晓斐;中国对虾(Penaeus chinensis)主要过敏原的鉴定及性质研究[D];中国海洋大学;2008年
6 徐宗香;口蹄疫病毒VP2蛋白B细胞线性表位的鉴定[D];东北农业大学;2009年
7 徐婉茹;小胶质细胞的纯化分离培养与鉴定方法[D];山东大学;2009年
8 金羽;三七病毒病病原的初步研究[D];东北农业大学;2005年
9 张艳艳;禽脑脊髓炎病毒的鉴定与弱毒疫苗的研制[D];西北农林科技大学;2005年
10 张玉梅;控水条件下小麦不同抗旱性鉴定指标的研究[D];莱阳农学院;2006年
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