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《安徽农业大学》 2008年
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抗口蹄疫病毒单克隆抗体的制备和抗原模拟表位的筛选

赵磊  
【摘要】: 口蹄疫(FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)感染引起的主要侵害偶蹄动物的急性、热性、高度接触性传染病。口蹄疫病毒是小RNA病毒科口蹄疫病毒属的唯一成员,不含囊膜的病毒粒子包含有一个单链正股RNA基因组。目前OIE将其划分为七个血清型,分别命名为O、A、C、Asia1、SAT1、SAT2和SAT3。然而,研究者通过血清学试验发现,口蹄疫七个血清型的分离株存在广泛的抗原变异,每个血清型都含有众多亚型。在发展中国家,控制口蹄疫的关键是快速准确地诊断和使用有效的疫苗。因此,研发快速诊断试剂和高效疫苗,对口蹄疫的防控具有十分重要的现实意义。 单克隆抗体有着特异性强、重复性好的特点,可开发成诊断试剂及应用于各项基础研究。为制备抗O型口蹄疫病毒特异性单克隆抗体,用纯化的O型口蹄疫病毒免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经间接ELISA筛选和间接免疫荧光(IFA)验证,三次有限稀释法克隆,获得了3株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为289、5F7和8E8,抗体亚类鉴定其均为IgG1/κ类型;间接ELISA测定,3株杂交瘤细胞培养上清效价分别为1:256、1:512和1:512,小鼠腹水效价分别为1:8×10~3、1:1.6×10~4和1:1.6×10~4;型特异性检测结果显示,三株单克隆抗体仅与O型FMDV反应,不与Asia1型FMDV反应,推测它们均为抗O型FMDV的血清型特异性单克隆抗体;Western blot分析表明,单克隆抗体289和5F7与O型FMDV均没有特异性反应条带出现,表明它们所针对的抗原表位均为构象型表位;单克隆抗体8E8与病毒抗原有特异性反应条带,所以它识别线性表位。相加ELISA试验表明,289与5F7两株单克隆抗体识别的抗原表位相近或相同,但均不同于单克隆抗体8E8的识别表位;中和试验显示单克隆抗体8E8具有很强的中和活性,中和效价为1:1024。经硫氰酸盐洗脱法测定,289和5F7的相对亲和力指数均为1.5mol/L,8E8的相对亲和力指数为2.5mol/L。这3株单克隆抗体的获得,为研究O型口蹄疫病毒提供了重要的实验材料。 抗原表位,又称抗原决定簇,是抗原分子抗原性的基础。正确而详细地绘制抗原表位图谱对疾病的诊断、设计无毒副作用的多表位疫苗以及免疫治疗试剂等具有积极的意义。为研究Asia1型口蹄疫病毒的抗原表位性质,对本实验室制备的一株抗Asia1型口蹄疫病毒单克隆抗体3E11的识别表位进行鉴定。3E11为一株识别构象型表位的具有很强中和活性的单克隆抗体,利用噬菌体随机十二肽库对单克隆抗体3E11进行4轮淘选,前三轮采用固相吸附法淘洗,最后一轮淘洗采用蛋白G液相吸附法;经噬菌体ELISA鉴定,获得8个阳性噬菌体克隆,这些克隆与单克隆抗体3E11均发生特异性反应;序列测定及比对显示,5个噬菌体克隆的展示肽含有一致基序GSLxxL(x代表任意氨基酸),所以单克隆抗体3E11识别抗原表位的基序为GSLxxL,为单克隆抗体3E11识别的模拟表位;合成含基序的一种十二肽和该十二肽的随机打乱肽,肽ELISA显示该十二肽具有结合单克隆抗体3E11的活性,而随机打乱肽不能结合单克隆抗体3E11;分别合成肽对基序的氨基酸残基进行定点突变显示,这些氨基酸残基对于单克隆抗体3E11识别表位的抗原活性均为关键性的;肽竞争ELISA显示,该模拟表位能够抑制单克隆抗体3E11与病毒抗原的结合。 总之,本研究成功制备了3株针对O型FMDV的单克隆抗体,并且鉴定了Asia1型FMDV的一个模拟表位,这些研究将为口蹄疫病毒新型疫苗研制和诊断试剂开发奠定基础。
【学位授予单位】:安徽农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:R392

【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 姜志刚;FMDV中和表位在HBc上的展示及其嵌合蛋白在重组腺病毒中的表达[D];中国农业科学院;2010年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前7条
1 吴海波,邵军军,常惠芸;口蹄疫病毒抗原位点研究进展[J];动物医学进展;2005年09期
2 王刚,王琰,李春英,高天文,刘玉峰;用硫氰酸盐洗脱法直接测定噬菌体抗体的相对亲和力(英文)[J];生物工程学报;2004年03期
3 戴和平,高宏,赵新颜;噬菌体展示技术的原理和方法[J];水生生物学报;2002年04期
4 王春奕,马军武,伏小平;口蹄疫病毒的纯化及鉴定[J];中国兽医科技;2004年07期
5 林彤;杜惠芬;吴海波;邵军军;独军政;丛国正;常惠芸;;抗O型口蹄疫病毒单克隆抗体的制备及其生物学特性分析[J];中国兽医科学;2007年03期
6 段舒怡;姜平;李玉峰;马苏;杜以军;杨晓伟;;O型口蹄疫病毒VP1蛋白单克隆抗体的制备与生物学特性鉴定[J];中国人兽共患病学报;2007年03期
7 鲁会军,金宁一,韩松,郑敏,王凯,贾雷立,尹革芬,金扩世;O型口蹄疫泛亚毒株单克隆抗体的制备及抗原表位差异分析[J];中国兽医学报;2005年05期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 连京华,秦卓明,黄波;鸡传染性支气管炎研究进展[J];山东农业科学;2000年01期
2 钱凤芹,刘长梅,任红梅,李爱芹,庄文忠;鸡新城疫病毒山东分离株F蛋白基因的克隆与鉴定[J];山东农业科学;2001年03期
3 东野传现;史玉颖;黄中利;刘玉山;亓丽红;傅剑;;“禽喘康颗粒冲剂”对鸡人工感染新城疫病毒临床效果的研究[J];山东农业科学;2007年02期
4 李子剑;李云龙;陈苏;艾武;宋敏训;李玉峰;;鸭肠炎病毒US2基因的序列测定与分析[J];山东农业科学;2008年03期
5 黄星;余为一;仲大莲;;NDV F48E9株与LaSota株HN结构蛋白潜在抗原表位的预测分析[J];安徽农学通报;2008年12期
6 李祥辉;黄大鹏;黄玉兰;;鸡抗小鹅瘟病毒IgY提取方法的比较试验[J];安徽农学通报(上半月刊);2009年23期
7 张小飞,潘孝成,汪秀娟,赵瑞宏,蒋书东;绩溪县浩寨兔病毒性出血症的诊断[J];安徽农业科学;2002年02期
8 沈咏舟,沈乐平,程建整;鸡传染性法氏囊病病毒冻干保护剂热稳定性研究[J];安徽农业科学;2004年01期
9 沈咏舟,沈乐平,程建整;鸡新城疫病毒耐热冻干保护剂的研究[J];安徽农业科学;2004年02期
10 赵坤,张慧辉,郭东升;猪繁殖和呼吸综合征组织灭活苗的研制[J];安徽农业科学;2005年07期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 曾政;任远志;叶昭辉;凌洪权;杨泽林;熊仲良;;重庆市2009年犬狂犬病检测及流行病学调查[A];重庆微生物学会第九届会员代表大会暨学术年会论文摘要集[C];2009年
2 薛传华;何林;赵志模;;朱砂叶螨β-actin基因cDNA片段的克隆及实时荧光定量PCR方法的建立[A];庆祝重庆市植物保护学会成立10周年暨植保科技论坛论文集[C];2007年
3 孔繁德;王荣;陈琼;吴德峰;徐淑菲;;多重RT-PCR一步法技术同时检测猪瘟病毒和蓝耳病病毒方法的建立以及初步应用[A];第十届中国科协年会论文集(三)[C];2008年
4 邵西群;闫喜军;;貉源狂犬病病毒NeiMeng株的分离与鉴定[A];经济发展方式转变与自主创新——第十二届中国科学技术协会年会(第三卷)[C];2010年
5 崔保安;魏战勇;;猪细小病毒vaccine株VP2基因克隆与抗原性分析[A];河南省畜牧兽医学会第七届理事会第二次会议暨2008年学术研讨会论文集[C];2008年
6 韩勇;李文刚;;应用多重PCR方法检测猪伪狂犬病毒细小病毒和圆环病毒[A];河南省畜牧兽医学会第七届理事会第二次会议暨2008年学术研讨会论文集[C];2008年
7 郑玉姝;赵朴;王宪文;姚四新;刘兴友;;鸡培养细胞γ-干扰素的诱生[A];河南省畜牧兽医学会第七届理事会第二次会议暨2008年学术研讨会论文集[C];2008年
8 刘运超;陈玉梅;王爱萍;张改平;鲁琨;李乔木;王秋霞;;用RT-PCR技术快速检测猪瘟病毒[A];河南省畜牧兽医学会第七届理事会第二次会议暨2008年学术研讨会论文集[C];2008年
9 李雪华;崔金忠;江倩;王林;刘兴友;;鸡生长与免疫抑制综合征病毒检测方法研究[A];河南省畜牧兽医学会第七届理事会第二次会议暨2008年学术研讨会论文集[C];2008年
10 张晓根;郑鸣;任敏;;胶体金免疫层析法检测猪PRV gE抗体方法的建立及应用[A];河南省畜牧兽医学会第七届理事会第二次会议暨2008年学术研讨会论文集[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 赵冬敏;B亚群禽白血病病毒分离株的生物学特性[D];山东农业大学;2010年
2 赵鹏;猪繁殖与呼吸综合征病毒在抗体选择压下的变异[D];山东农业大学;2010年
3 刘栋;畜禽补体C3d基因克隆及序列分析和重组鸡C3d免疫佐剂效果研究[D];山东农业大学;2010年
4 张青婵;A亚群禽白血病病毒不同分离株的基因组和生物学特性比较[D];山东农业大学;2010年
5 宋翠平;H5N1禽流感和鹅Ⅰ型副粘病毒分离株的生物学特性及感染性的研究[D];中国海洋大学;2010年
6 张琪;KLT对中脑神经系统疾病的影响及KLT、NDV、SW联合抗肿瘤作用机制研究[D];西北农林科技大学;2010年
7 姜永厚;新城疫病毒F基因与鸡IL-2重组DNA疫苗的研究[D];东北农业大学;2000年
8 郭银汉;福州地区对虾病毒病的病原诊断及流行病学[D];福建农林大学;2000年
9 程坚;表达和共表达H9亚型禽流感病毒血凝素基因和鸡Ⅱ型干扰素基因的重组鸡痘病毒[D];扬州大学;2001年
10 王凤阳;重组逆转录病毒-精原干细胞介导的转基因研究[D];中国人民解放军军需大学;2001年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 许媛媛;鸭瘟的动态病理学研究和鸭CD4的克隆[D];华中农业大学;2010年
2 李爽;鸭源禽呼肠孤病毒感染雏鸭的免疫病理学研究[D];华中农业大学;2010年
3 徐珊珊;重组杆状病毒介导的高致病性猪繁殖与呼吸综合征基因工程疫苗研究[D];华中农业大学;2010年
4 胡智斌;湖北省高致病性猪蓝耳病活疫苗(JXA1-R株)试用报告[D];华中农业大学;2010年
5 许莹;H3N8型马流感血凝素核酸疫苗的初步研究[D];南京医科大学;2010年
6 张艳萍;蛋白质序列的数学描述及其应用[D];浙江理工大学;2010年
7 邬成业;禽流感病毒H5N1亚型河南分离株NP基因的原核表达及T细胞表位筛选[D];郑州大学;2010年
8 史平玲;猪FcγRⅢ介导PRRSV抗体依赖增强作用研究[D];郑州大学;2010年
9 巩艳艳;抗体免疫选择压作用下新城疫病毒HN基因和F基因的变异[D];山东农业大学;2010年
10 裴兰英;HSP_(70)与MDV肿瘤的发生发展相关性研究[D];山东农业大学;2010年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 张中旺;张永光;;抗原表位的研究方法及口蹄疫病毒抗原表位的研究进展[J];微生物学通报;2008年08期
2 邵军军;常惠芸;;口蹄疫多表位疫苗的研究进展[J];中国兽医科学;2008年11期
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陈士友,陈溥言,蔡宝祥,钱建飞;禽呼肠孤病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立[J];病毒学报;1991年03期
2 薛景山,赵启祖,何建新,李德珍,唐薄泽,李树春;猪水泡病病毒的提纯电镜观察及电泳分析[J];病毒学报;1993年02期
3 田纯见,毕英佐;泛亚株流行理论与世界口蹄疫的形势[J];广东畜牧兽医科技;2003年03期
4 钱琨,秦爱建,邵红霞,刘岳龙,金文杰;抗禽流感病毒H9亚型血凝素特异性单克隆抗体的研制[J];扬州大学学报;2003年03期
5 赵宇,陈文学,孟继鸿,季晓辉;抗戊型肝炎病毒重组蛋白单克隆抗体的制备和初步应用[J];南京医科大学学报(自然科学版);2002年05期
6 郭慧琛,刘在新,孙世琪,卢增军,周广清,祁淑云,靳野,刘湘涛,谢庆阁;口蹄疫病毒多基因重组质粒在BHK-21细胞中的表达[J];生物工程学报;2003年03期
7 许正平,李伯良;噬菌体展示系统的研究进展[J];生命的化学(中国生物化学会通讯);1996年03期
8 梁荣,伊岚,李健强;小鼠IgG类单克隆抗体三种纯化方法的比较[J];细胞与分子免疫学杂志;1996年01期
9 胡北侠,吴艳涛,刘秀梵,张如宽;新城疫病毒融合蛋白单克隆抗体的研制[J];畜牧兽医学报;2003年05期
10 肖昭彭,杨福荣;用紫外分光光度计检测口蹄疫病毒的研究[J];中国兽医科技;2000年11期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 宋芳;周玉;卢士英;任洪林;李岩松;柳增善;刘文迪;郝亚明;;β-酪蛋白单克隆抗体的制备及鉴定[J];中国实验诊断学;2011年08期
2 谢晓玲;;恶性血液肿瘤的单克隆抗体靶向治疗[J];中外医学研究;2011年18期
3 吕大伟;;抗体的临床应用及类风湿性关节炎的抗体治疗[J];中国医药指南;2011年22期
4 裴冀男;;单克隆抗体制备例谈[J];高中生学习(高二版);2011年05期
5 罗莎;;单克隆抗体成功治疗由出血性大肠杆菌引起的溶血性尿毒综合症[J];基因组学与应用生物学;2011年03期
6 孔桂美;张小荣;黄瑶;高巍;廖月霞;卜平;;人VEGF受体Ⅱ胞外Ⅲ区单克隆抗体研制与生物学活性测定[J];扬州大学学报(农业与生命科学版);2011年02期
7 曹黎黎;刘丹丹;卫娜;高明春;王君伟;;牛IFN-γ单克隆抗体的制备及鉴定[J];中国兽医科学;2011年07期
8 孙厚良;魏大鹏;张小洪;刘彦君;章崇杰;;抗hMOF单克隆抗体的制备与鉴定[J];四川大学学报(医学版);2011年05期
9 杜春红;王鹏;张建中;唐雪;宋志忠;;鼠疫耶尔森氏菌Pla蛋白单克隆抗体的制备与鉴定[J];细胞与分子免疫学杂志;2011年09期
10 ;新药速递[J];药学与临床研究;2011年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王传彬;田新生;王宏伟;孙明;曹振;遇秀玲;金萍;陈西钊;田克恭;;单抗阻断ELISA检测口蹄疫病毒NSP抗体方法建立[A];第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会论文集(下)[C];2005年
2 田纯见;曹永长;毕英佐;;口蹄疫病毒3C基因的克隆和噬菌体展示[A];猪的重要传染病防治研究新成果——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第五届理事会第二次全体会议暨防检疫专业委员会第7次学术交流会论文集[C];2002年
3 杨鑫;王红宁;周英顺;高荣;曾博;徐昌文;丁梦蝶;;猪源O型口蹄疫病毒分离株VP1基因特征分析[A];四川省动物学会第九次会员代表大会暨第十届学术研讨会论文集[C];2011年
4 邬苏晓;刘镇明;罗满林;戚一达;;口蹄疫病毒3ABC基因的原核表达[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集(上)[C];2003年
5 邱杨;肖性龙;刘建丽;李惠芳;张经纬;余以刚;吴晖;;口蹄疫通用型实时荧光RT-PCR检测方法的建立[A];中国畜牧兽医学会2009学术年会论文集(下册)[C];2009年
6 潘群兴;王永山;何孔旺;欧阳伟;王晓丽;诸玉梅;夏兴霞;;重组口蹄疫病毒T细胞表位基因的猪细小病毒VP2蛋白病毒样颗粒的构建[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次学术研讨会论文集[C];2010年
7 李夏莹;王建昌;郑世军;;口蹄疫病毒VP1,2C蛋白与宿主细胞相互作用机制的研究[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
8 张洪勇;金宁一;;口蹄疫病毒RNA组成、功能及分子致病机制的研究进展[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集(下)[C];2003年
9 鲁会军;韩松;郑敏;贾雷立;王凯;金宁一;;口蹄疫病毒3AB基因在重组杆状病毒中的表达及检测[A];人畜共患传染病防治研究新成果汇编[C];2004年
10 杨金菊;宁云山;何湘;吴琼;宋颖博;李辉;任飞垚;周枫;李戬;柳晓兰;陈勇;蔡云;钱小红;贺福初;李明;高建恩;孙启鸿;;成人肝脏组织胞浆蛋白单克隆抗体库的初步建立和鉴定[A];中国蛋白质组学第三届学术大会论文摘要[C];2005年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 尹晖;单克隆抗体研发进入新阶段[N];无锡日报;2010年
2 文来;2010年单克隆抗体市场有望扩三倍[N];中国医药报;2005年
3 庄愉;单克隆抗体异军突起[N];医药经济报;2003年
4 ;单克隆抗体异军突起[N];中国高新技术产业导报;2003年
5 尹晖;最大单克隆抗体研制项目在马山奠基[N];无锡日报;2010年
6 吴星;口蹄疫对农产品市场的影响[N];期货日报;2005年
7 河北省畜牧兽医站 韩庆安(高级兽医师);春防牲畜口蹄疫[N];河北科技报;2006年
8 记者 马波;滇将建首家单克隆抗体基地[N];科技日报;2000年
9 江南雪舞;谈谈口蹄疫病毒[N];大众卫生报;2005年
10 ;单克隆抗体应用前景看好[N];中国医药报;2002年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 何玉龙;猪O型口蹄疫病毒及猪传染性胸膜肺炎放线菌毒素抗原表位研究[D];华中农业大学;2007年
2 唐琳;肝再生增强因子与肝癌发生、发展关系的研究[D];重庆医科大学;2005年
3 侯桂华;巨噬细胞移动抑制因子在同种移植排斥中作用及其机理的研究[D];山东大学;2004年
4 高勇;新型单克隆抗体荧光探针染料的合成及免疫荧光组织化学应用[D];西北大学;2006年
5 江敏;大鼠单克隆抗体的制备、鉴定、基因克隆、抗原分析以及药物偶联物的抗肿瘤作用研究[D];中国协和医科大学;1996年
6 秦迎松;人促血液血管细胞生成素(Haemangiopoietin, HAPO)单克隆抗体的制备、鉴定及应用[D];中国协和医科大学;2004年
7 万忠海;抗PEA单抗和单链抗体制备及在绿脓感染中的应用[D];吉林大学;2008年
8 吕大伟;抗RANKL单克隆抗体在大鼠类风湿性关节炎模型中的应用及RANKL转录调控的探索性研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年
9 庄国洪;抗DR4、DR5单克隆抗体诱导胶质瘤细胞株凋亡的研究[D];吉林大学;2004年
10 付建芳;溶藻弧菌抗独特型抗体基因工程疫苗的研究[D];第四军医大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 赵磊;抗口蹄疫病毒单克隆抗体的制备和抗原模拟表位的筛选[D];安徽农业大学;2008年
2 彭伍平;利用噬菌体展示技术鉴定猪瘟病毒E2蛋白抗原表位[D];中国农业科学院;2007年
3 李永亮;口蹄疫病毒3B非结构蛋白单克隆抗体的制备及应用[D];中国农业科学院;2009年
4 王小娥;利用噬菌体展示技术鉴定vvIBDV抗原表位及多表位模拟蛋白表达[D];山东农业大学;2008年
5 李任峰;检测口蹄疫病毒单抗ELISA方法的建立及口蹄疫病毒多抗原基因的融合表达[D];华中农业大学;2005年
6 王万利;应用噬菌体展示技术筛选抗猪瘟病毒E2蛋白单克隆抗体的模拟表位[D];中国农业科学院;2009年
7 杨影;猪链球菌2型溶血素单克隆抗体的制备及其抗原表位鉴定[D];华中农业大学;2008年
8 陈勇;抗活化状态LM-1蛋白质单克隆抗体的制备及功能鉴定[D];吉林大学;2009年
9 宋扬;鸡传染性支气管炎病毒N蛋白单克隆抗体的制备及其表位的鉴定[D];中国农业科学院;2010年
10 姜海芳;牛边缘无浆体主要表面蛋白5(MSP5)单克隆抗体的制备及抗原表位的鉴定[D];黑龙江八一农垦大学;2010年
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