收藏本站
《安徽医科大学》 2011年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

基于蛋白质组技术筛选的日本血吸虫鸟氨酸氨基转移酶和亲免素的克隆表达及其诊断应用

胡梅梅  
【摘要】:目的 为寻找新的血吸虫病免疫诊断候选抗原分子,对基于蛋白质组技术筛选出的日本血吸虫鸟氨酸氨基转移酶(SjOAT)和亲免素(SjIP)进行体外重组表达、纯化。通过初步的实验室检测评估重组蛋白rSjOAT和rSjIP在日本血吸虫病免疫诊断中的应用价值。 方法 以日本血吸虫成虫cDNA为模板,体外扩增SjOAT和SjIP目的基因,以pET28a为载体转化入大肠杆菌系统中;异丙基-B-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白表达,优化重组菌的诱导表达条件;大量诱导表达后,应用Ni2+亲和层析法纯化rSjOAT、rSjIP; SDS-PAGE和Western blotting验证表达量和免疫活性。应用重组抗原间接ELISA诊断日本血吸虫病,并与日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)的间接ELISA平行检测,比较两种方法之间的敏感性、特异性和交叉反应性的差异。 结果 成功构建了表达型重组质粒pET28a/SjOAT和pET28a/SjIP,经IPTG诱导培养,证实构建的两种质粒均能表达。SDS-PAGE电泳分析可见相对分子质量约50KDa和55KDa处有SjOAT、SjIP融合蛋白的表达;Western blotting检测结果表明rSjOAT、rSjIP能被抗His-tag单克隆抗体、血吸虫病患者血清识别。纯化后的SjOAT蛋白浓度达0.5㎎/ ml,纯化后的SjIP蛋白浓度达1.3㎎/ ml。分别以两种重组抗原建立间接ELISA法检测急、慢性血吸虫病患者血清结果显示: rSjOAT对52份急性血吸虫患者血清、81份慢性血吸虫病患者血清的敏感性分别达到了90.4%和86.4%;检测94例正常对照者血清的假阳性率为1.1%;检测94例疫区粪检阴性者血清的阳性率为3.2%。rSjIP对上述急、慢性血吸虫病患者血清的敏感性分别达到了88.5%、79.0%;对上述正常对照者血清假阳性率为2.1%;对上述疫区粪检阴性者血清的阳性率为4.3%。将上述急、慢性血吸虫病患者血清以SEA-ELISA检测,敏感性分别为94.2%和82.7%。SEA-ELISA检测上述正常对照者血清、疫区粪检阴性者血清的阳性率为9.6%和12.8%。两种重组抗原的敏感性分别与SEA的敏感性相比较,差异无显著性(P0.05),而特异性比较具有统计学意义(P0.05)。rSj-ELISA和SEA-ELISA分别检测22份华支睾吸虫、36份并殖吸虫、26份钩虫感染者血清时,交叉反应性的比较显示无显著性差异。 结论 本研究成功克隆、表达了基于蛋白质组学技术从日本血吸虫成虫中筛选出的SjOAT和SjIP。分别建立rSj-ELISA方法,探讨了其敏感性、特异性和交叉反应性。实验结果表明这两个重组抗原用于日本血吸虫病免疫诊断时和SEA具有相似的敏感性,特异性高于SEA,可作为血吸虫感染诊断候选分子,在诊断人血吸虫病方面具有研究和应用价值。同时也证明了蛋白质组学方法筛选疾病诊断候选分子的可行性。
【学位授予单位】:安徽医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R383.2

手机知网App
【参考文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 郑辉;日本血吸虫成虫可溶性抗原蛋白质谱鉴定与生物信息学分析[D];安徽医科大学;2009年
【共引文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 朱晓娟;NP30单特异性双链抗体的制备及对血吸虫病的治疗作用[D];南京医科大学;2009年
2 刘云;估计人群日本血吸虫感染状态的数学模型研究[D];南京医科大学;2010年
3 张磊;吡喹酮注射剂应用于小鼠的药效药动学研究[D];新疆农业大学;2010年
4 孔娟;日本血吸虫腺嘌呤磷酸核糖转移酶两种同工酶的相关研究[D];华东理工大学;2011年
5 房修罗;日本血吸虫rSj14-3-3疫苗和rSjGST疫苗联合免疫的保护作用研究[D];桂林医学院;2010年
6 王哲;猪带绦虫六钩蚴HSP的克隆表达及差异蛋白研究[D];吉林农业大学;2011年
7 房功思;溶血磷脂酶Sj1539蛋白在日本血吸虫病免疫学诊断中的初步应用[D];安徽医科大学;2011年
8 汪礼文;pcDNA3.1(+)-SjP14和SjGST真核表达载体的构建、鉴定及其保护作用研究[D];安徽医科大学;2011年
9 蔡世飞;rSj26GST-Sj32融合蛋白诊断慢性日本血吸虫病的研究[D];重庆医科大学;2011年
10 王敏;rSj26-Sj32融合蛋白用于急性日本血吸虫病的诊断价值[D];重庆医科大学;2011年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陈名刚;印度尼西亚的血吸虫病[J];国际医学寄生虫病杂志;1982年02期
2 章元沛;;氢溴酸槟榔碱促使小白鼠体内日本血吸虫肝移作用的观察[J];浙江大学学报(医学版);1982年04期
3 黄素秋;嵇汝运;;血吸虫病化学治疗的研究Ⅺ.芳氧烷基胺化合物的制备[J];药学学报;1962年12期
4 李翠英;李飞;贾雪梅;王红;陈连勇;;日本血吸虫云南品系SIEA对小鼠的免疫保护作用[J];昆明医学院学报;2006年04期
5 苏卓娃,胡采青,傅义,陈伟,黄希宝;不同宿主在湖区日本血吸虫病传播中的作用[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;1994年01期
6 李翠英;李飞;;日本血吸虫(云南品系)未成熟卵可溶性抗原免疫保护性观察(摘要)[J];昆明医学院学报;2006年03期
7 ;血吸虫病贫血的机制[J];国际医学寄生虫病杂志;1974年01期
8 周松华;汪世平;;简便快速分离日本血吸虫未成熟虫卵方法的研究[J];中国血吸虫病防治杂志;2007年02期
9 陶义训,黄左钺;日本血吸虫精氨酸酶的研究[J];Acta Biochimica et Biophysica Sinica;1964年02期
10 周钧,钱万红,李越希,陶开华,王勇,张兆松;日本血吸虫检测基因芯片的研制及初步应用[J];江苏医药;2004年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王欣之;矫矫;石耀军;冯新港;苑纯秀;金亚美;;日本血吸虫7d童虫消减cDNA文库的构建及测序分析[A];第二届全国人畜共患病学术研讨会论文集[C];2008年
2 苏斌涛;刘文琪;;日本血吸虫感染小鼠体内IL-17的动态变化研究[A];中华医学会第九次全国检验医学学术会议暨中国医院协会临床检验管理专业委员会第六届全国临床检验实验室管理学术会议论文汇编[C];2011年
3 付媛;张雪娟;卢福庄;石团员;;日本血吸虫融合蛋白2LHD-Sj23原核表达载体的构建和表达[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会论文集[C];2011年
4 张艳丽;赵犇鹏;李莹;杨健美;苑纯秀;冯新港;;日本血吸虫鞘脂激活蛋白原T细胞免疫原性研究[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会论文集[C];2011年
5 陈启军;郝力力;蔡鹏飞;;日本血吸虫小RNA(snRNA)转录组研究[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十次学术研讨会论文集[C];2009年
6 易新元;曾宪芳;蔡春;张冉;陈欲晓;曾宪忠;田明礼;;日本血吸虫DNA疫苗的研究[A];中国动物学会全国第九次寄生虫学学术讨论会论文摘要集[C];2003年
7 姜宁;武闯;陈启军;;日本血吸虫23kDa膜蛋白(Sj23)与人免疫球蛋白的相互作用分析[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会论文集[C];2011年
8 钱旻;白艳军;章平;严自助;;日本血吸虫模拟虫卵抗原的筛选和研究[A];中国动物学会第六届全国青年寄生虫学工作者学术讨论会论文摘要集[C];2000年
9 戴洋;朱荫昌;王晓婷;唐建霞;赵松;;日本血吸虫核酸疫苗体内电穿孔法的进一步研究[A];2011新型疫苗与抗体创制关键技术及质量控制研讨会论文集[C];2011年
10 张旻;韩艳辉;朱珠;李东;洪炀;吴秀娟;傅志强;林矫矫;;日本血吸虫体被表膜蛋白磷酸二酯酶-5(NPP-5)基因的研究[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会论文集[C];2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 耿挺;解开血吸虫生存秘密[N];上海科技报;2006年
2 刘志国;委员又谈瘟神事[N];人民政协报;2006年
3 记者 任荃;解读血吸虫“生命密码”[N];文汇报;2006年
4 记者 曹玲娟;1300多个血吸虫特有基因被找到[N];人民日报;2006年
5 记者 曹玲娟;我科学家公布日本血吸虫“基因天书”[N];人民日报;2006年
6 记者 李美娟 仇逸 张学全;江西:血吸虫病疫情必须6小时内上报[N];新华每日电讯;2003年
7 陈征贻;创制送“瘟神”的药物——呋喃丙胺[N];中国医药报;2009年
8 冯立中;告别耕牛[N];健康报;2006年
9 ;血吸虫病疫情出现反复[N];健康报;2003年
10 ;汤建人代表 建议进一步加强血吸虫病的防治[N];江西日报;2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 卢艳;日本血吸虫诊断抗原的筛选、鉴定及初步评价[D];华东理工大学;2012年
2 杨健美;不同终末宿主对日本血吸虫感染适宜性的差异分析[D];中国农业科学院;2012年
3 胡元生;日本血吸虫酪氨酸羟化酶信号通路的干预[D];安徽医科大学;2009年
4 洪炀;日本血吸虫童虫在不同敏感性宿主体内差异表达蛋白的研究[D];南京农业大学;2011年
5 唐桂霞;日本血吸虫虫源抗原与抗原递呈细胞的相互作用的(体外)实验研究[D];南京医科大学;2010年
6 龚强;东方田鼠抗日本血吸虫抗性相关基因Mf-HSP90α的克隆筛选及其功能研究[D];中南大学;2010年
7 李红飞;日本血吸虫Wnt4信号分子作用机制及β-连环蛋白基因克隆的研究[D];西北农林科技大学;2011年
8 罗洁;日本血吸虫感染小鼠肝星状细胞的基因表达谱特征及血管内皮生长因子旁分泌作用对肝星状细胞的影响[D];南京医科大学;2011年
9 汪雪峰;日本血吸虫HSP60来源的肽SJMHE1对CD4~+CD25~+调节性T细胞的诱导及机制的研究[D];南京医科大学;2009年
10 唐春莲;调节性T细胞对日本血吸虫GST疫苗保护性效果的影响及机制研究[D];华中科技大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 何谐;日本血吸虫与斯氏狸殖吸虫的遗传特征和特异性免疫诊断抗原研究[D];第三军医大学;2010年
2 罗秀菊;日本血吸虫重组亚单位疫苗的研究[D];中南大学;2003年
3 张鹏;日本血吸虫Tsunagi样蛋白编码基因功能的鉴定[D];安徽医科大学;2010年
4 王素娟;日本血吸虫SJCHGC06868蛋白的研究[D];中国农业科学院;2010年
5 武闯;日本血吸虫23kDa膜蛋白与人免疫球蛋白的相互作用分析[D];吉林大学;2011年
6 贾侃;基于功能基因组学数据的日本血吸虫候选疫苗分子的预测及初步鉴定[D];上海师范大学;2010年
7 郭凡吉;日本血吸虫磷酸甘油酸变位酶SjPGAM的研究[D];中国农业科学院;2010年
8 邹镇;日本血吸虫23KD膜蛋白的原核表达与纯化及双价膜锚定型和分泌型表达疫苗抗感染效果的比较研究[D];华中科技大学;2009年
9 杨巧林;药物(PZQ)压力下日本血吸虫的耐药性诱导及抗血吸虫新药的筛选[D];苏州大学;2010年
10 刘亚平;日本血吸虫感染小鼠肝星状细胞的功能研究[D];南京医科大学;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026