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《安徽医科大学》 2011年
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抑制PKM2的siRNA协同抑制CCND1的作用机制研究

李杰  
【摘要】:目的:研究siM2PK-1分子对CCND1表达的抑制作用并探讨其机制。方法:通过克隆形成实验及流式细胞术检测siM2PK-1分子对于肝癌细胞增殖与周期的影响,利用实时定量PCR和Western blot检测siM2PK-1分子对于CCND1的表达的影响,过表达PKM2及利用其它针对PKM2的干涉实验确定siM2PK-1对于CCND1抑制作用的特异性,生物信息学分析及报告基因检测初步探究了siM2PK-1抑制CCND1表达的机制。结果:克隆形成实验发现siM2PK-1分子对于SK-Hep-1细胞具有抑制增殖的作用,流式细胞术检测发现siM2PK-1可以引起细胞周期阻滞于G0-G1期,实时定量PCR和Western blot证实siM2PK-1分子对于CCND1的表达在mRNA水平和蛋白水平都有影响,过表达PKM2分子不能引起CCND1分子在mRNA和蛋白水平的上调表达,而利用其他的针对PKM2分子的siRNA也不能使CCND1的表达下调,进而得出siM2PK-1分子具有双靶向作用,而进一步利用生物信息学分析结合报告基因确定siM2PK-1可能通过不完全互补的模式与CCND1分子启动子区的序列结合进而引起其启动子区的CpG岛的甲基化。结论:抑制PKM2的siM2PK-1分子具有协同抑制CCND1分子表达的作用。 目的:探讨不同缺氧条件对HepG2细胞中miR-210表达水平的影响。方法:采用CoCl_2、物理缺氧以及Na_2SO_3三种不同的缺氧条件诱导HepG2细胞,利用实时定量PCR技术检测不同缺氧模式诱导前后HepG2细胞miR-210等表达变化。结果:三种缺氧模式均可以诱导HepG2细胞miR-210表达上调,其表达与CoCl_2及Na_2SO_3的浓度有剂量依赖关系。结论:CoCl_2、物理缺氧以及Na_2SO_3三种不同的缺氧条件均可以有效诱导HepG2细胞中miR-210的表达上调,三种模型均可用于缺氧诱导miRNA研究,同时进一步证明miR-210表达上调是由于细胞缺氧所致。
【学位授予单位】:安徽医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R346

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